Flow Sitometrisi için Fare Akciğeri Hazırlığı: Flow Sitometrik Analiz için Akciğer Dokusundan Hücre Süspansiyonu Oluşturma

- Ötenazi yapılmış bir fare alarak başlayın ve laboratuvar bandı ile bir diseksiyon tahtasına sabitleyin. Cildi kesmek için makas kullanın. Diyaframdan dikey bir kesi yapın ve kalbi ve akciğerleri açığa çıkaran göğüs boşluğuna ulaşmak için kaburgaları kesin. Sonra, kalbin sol ventrikülünde küçük bir kesi yapın. Daha sonra, sağ ventrikülü bulun ve ventrikülün lümenine PBS içeren bir şırınga yerleştirin. PBS'yi sağ ventrikülden geçirin, akciğerler beyazlaşana kadar kanın sol ventriküldeki önceden yapılmış kesikten dışarı akmasına izin verin. Tümör nodülleri içeren akciğer dokusunu çıkarın ve küçük parçalar halinde kıyın.

Parçaları akciğer sindirim tamponunda inkübe edin. Akciğer sindirim tamponundaki kollajenaz, hücreleri izole etmeye yardımcı olur ve DNAse, ölü hücrelerden DNA'yı ortadan kaldırmaya yardımcı olur. Topakları çıkarmak ve hücre süspansiyonunu homojen hale getirmek için elde edilen süspansiyonu bir hücre süzgecinden süzün. Artık eritrositleri parçalamak için peleti amonyum klorür potasyum tamponunda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin. Peletteki WBC'leri ve tümör hücrelerini toplamak için santrifüjleyin. Hücre stabilitesini korumak için FCS ile takviye edilmiş PBS'de