miRNA Ekstraksiyonu: Plazma Örneğinden miRNA'yı Çıkarmak İçin Bir Yöntem

- MikroRNA'lar veya miRNA'lar, gen regülasyonunda yer alan küçük, kodlamayan RNA'lardır. İfadeleri kanser sırasında değişir ve bu nedenle potansiyel kanser biyobelirteçleridir. MiRNA izolasyonuna başlamak için, taze toplanmış tam kan örneğini alın ve plazmayı kan hücrelerinden ayırmak için 4 santigrat derecede santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve daha net bir plazma süpernatanı elde etmek için tekrar santrifüjleyin. Süpernatanı ekstrakte edin, soğutulmuş homojenizasyon solüsyonu ile muamele edin, ardından numuneyi homojenize etmek için lizis tamponu uygulayın. Proteinleri, özellikle de aşağı akış adımları sırasında RNA'yı sindirecek olan nükleazları parçalamak için proteinaz K enzim çözeltisi ekleyin.

- Daha sonra, lizatı önceden monte edilmiş bir alete özel nükleik asit çıkarıcı kartuşun belirlenmiş kuyucuğuna yükleyin. Numuneden genomik DNA'yı ortadan kaldırmak için uygun kuyucuğa DNaz 1 solüsyonu ekleyin. MiRNA izolasyonundan önce şartlandırma için kartuş üzerine monte edilmiş elüsyon tüpüne nükleaz içermeyen su ekleyin. Kartuş tertibatını nükleik asit çıkarıcıya yükleyin. Uygun miRNA saflaştırma yazılımını seçin ve çalıştırın. Tamamlandığında, miRNA içeren elüsy