İmmünohistokimyasal Boyama: İnce Doku Kesitlerinden Mekansal Bilgi Elde Etmeye Yönelik Bir Yöntem

- Nazik antijen alımına izin vermek için bir amonyak çözeltisine ince bir doku bölümü yerleştirerek başlayın. Kesiti polilisin kaplı bir slayta aktarın. Negatif yüklü hücreler, pozitif yüklü polilisine bağlanır. Ardından, endojen peroksidaz aktivitesini bloke etmek için hidrojen peroksit ekleyin. Slaytı Tris-Buffered Salin, TBS ile yıkayın.

TBS, protein çapraz bağlarını kırarak antikorların antijenlere erişimini teşvik eder. Spesifik olmayan antikor bağlanmasını azaltmak için bölümü bir blok solüsyonla yıkayın. Bölüme birincil antikorlar ekleyin ve gece boyunca inkübe edin. Birincil antikor, hücre yüzeyinde bulunan spesifik antijenine bağlanır. Slaytı TBS ile yıkayın.

Primer antikorun Fc bölgesine bağlanan Biotin konjuge sekonder antikorları ekleyin. Bölümü streptavidin-biotin peroksidaz enzimi ile yıkayın. Daha sonra, dokuya peroksidazın kromojenik substratını ekleyin. Peroksidaz, kromojeni renkli çözünmeyen bir ürüne dönüştürür.

Dokuyu hematoksilen çözeltisi ile lekeleyin. Hematoksilin, hücrelerin asidik bileşenlerine bağlanır ve onları maviye çevirir. Dokuyu ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Antijenler kırmızı olarak tespit edilirken, hücreler hematoksilen nedeniyle mavi görü