Eksozom İzolasyonu: Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri Hastalarının Plazmasından Eksozomları Ayırmak İçin Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:21 dk. • April 30th, 2023
- Eksozomlar, lipitler, proteinler, DNA, mRNA ve mikroRNA gibi biyomolekülleri taşıyan küçük, zara bağlı veziküllerdir. Eksozomlar, farklı hücre tipleri tarafından hücre dışı boşluklara salınır ve plazma gibi biyosıvılardan izole edilebilir.
Başlamak için, hücreleri ve kalıntıları temizlemek için plazma örneğini santrifüjleyin. Plazma süpernatanı yeni bir tüpe aktarın. Plazmayı istenen konsantrasyonda ribonükleaz enzimi ile tedavi edin. Numuneyi uygun bir süre boyunca 37 santigrat derecede bir ısıtma bloğu üzerinde inkübe edin.
Enzim, numunedeki herhangi bir serbest RNA'yı bozarken, ekzozomal RNA korunmaya devam eder. Numuneyi PBS kullanarak seyreltin. Daha sonra, istenen konsantrasyonda Proteinaz K enzim çözeltisini ekleyin ve uygun bir süre boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Proteinaz K, plazma proteinlerinin büyük kısmını bozar. Aynı zamanda daha önce eklenen ribonükleaz enzimini inaktive eder, böylece sonraki işleme sırasında ekzozomal RNA bozulması riskini ortadan kaldırır.
Plazmadan eksozom ayrılmasını kolaylaştırmak için uygun hacimde eksozom çökeltme tamponu ekleyin. Bozulmamış eksozomlar içeren bir pelet elde etmek için numuneyi santrifüjleyin. İzole edilen eksozom
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin