Akciğer İnstilasyonu ve Fiksasyonu: Sabit Akciğer Hacmini Ölçmek için Trakeaya Sıvı Verilmesi ve Akciğerlerin Sabitlenmesi

- Akciğer damlatma, kanserli veya diğer patolojileri olan fare akciğerlerini analiz etmek için maddeyi doğrudan trakeaya sokmak için kullanılır. İlk olarak, anestezi uygulanmış bir fareyi eğimli bir entübasyon platformuna yerleştirin ve boynundaki kılları tıraş edin. Boynun altında bir makas ile küçük bir kesi yapın ve trakeayı ortaya çıkarmak için forseps kullanarak cildi nazikçe çekin. Ağızdan trakeaya bir kateter yerleştirin ve bir kesiden gözlemleyin. Trakeaya örnek sıvı enjekte edin ve sıvıyı düzgün bir şekilde dağıtmak için boş bir şırınga ile hava vererek akciğerleri hızla şişirin.

Yarayı kapatın ve fareyi bir kurtarma odasına yerleştirin. İstenilen süreden sonra, fareyi feda edin ve akciğerleri açığa çıkarın. Toplam akciğer kapasitesini ölçmek için fiksatif ile şişirin. Akciğerleri sabitleyici içeren bir tüpe yerleştirin. Arşimet prensibini kullanarak sabit akciğer hacmini ölçün. Akciğerleri suya yerleştirin ve kablolu bir cihazla bastırın. Batık akciğerler tarafından yer değiştiren suyun ağırlığına dikkat edin. Sabit sol akciğerdeki akciğer hacminin fraksiyonu genellikle in vivo olarak ölçülenden daha küçüktür.

- Prosedüre başlamadan önce, ticari 1 inç uzunluğunda 20 gauge intravenöz kanülün ucunu manuel olarak hafif bir eğriye bükün. Daha sonra, ayak parmağı sıkışmasına yanıt vermeyerek anesteziyi onayladıktan sonra, yetişkin bir farenin gözlerine merhem sürün ve fareyi, büyük bir ofis bağlayıcısı ve dikiş halkaları olan eğimli bir platformda sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Boynun ventral kısmını tıraş edin ve cildi% 70 alkol ile dezenfekte edin. Daha sonra keskin bir makas kullanarak boyunda, alt kesici dişin yaklaşık 12 milimetre altında küçük bir cerrahi kesi yapın.

Daha sonra, trakeanın ventral duvarı görünene kadar boyundaki cildi kaudal olarak nazikçe çekmek için forseps kullanın. Ardından dili nazikçe geri çekin ve kanülü, bükülmüş ucu farenin ventral yüzeyine doğru eğik olacak şekilde yerleştirin. Az önce gösterildiği gibi boyun derisini tekrar nazikçe çekerek, kanülü trakeaya yerleştirin. Soluk borusunda kateter gözlendiğinde, ses tellerini geçecek şekilde kateteri yaklaşık 5 milimetre ilerletin.

Şimdi 50 mikrolitre instilat yüklü bir jel yükleme pipetinin ucunu kateterin alt göbeğine yerleştirin. Farenin solunumu ile eşzamanlı olarak uçtaki sıvının hareketini onaylayın, ardından damlatmayı enjekte edin. 1 mililitrelik bir şırınga kullanarak, sıvının akciğerlerin derinliklerine dağılmasına yardımcı olmak için akciğerleri hemen kateterden 0,6 mililitre hava ile şişirin, ardından kanülü çıkarın. Cerrahi yarayı az miktarda siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın ve fareyi tamamen iyileşene kadar izlemeli ayrı bir kafese yerleştirin.

Son deneysel zaman noktasından sonra, trakeanın ventral tarafını ortaya çıkarmak için hayvanın boynunda küçük bir kesik yapın. Ardından trakeaya 18 gauge saplama iğne ucu sokun. İplik kullanarak, iğneyi trakeaya bağlayın ve göğüs kafesi orta hat kesisi ile dikkatlice açın. Daha sonra diyaframı kesin ve akciğeri açığa çıkarmak için yan göğüs duvarlarını çıkarın. Ardından, musluğun ucundan formaldehit çalıştırarak sabitleme borusunda hava olmadığından emin olun. Daha sonra formalin rezervuarını ve doldurulmuş hortumu doğrudan trakeostomi iğnesinin alt ucuna bağlayın.

Formaldehitin üst yüzeyini ağız seviyesinin 25 santimetre üzerine ayarlayın ve akciğerleri bir fiksatif ile şişirmek için vanayı açın. Akciğerleri en az 20 dakika basınç altında bıraktıktan sonra, trakeayı saplama iğnesinin ucunun ucunun ötesine bağlarken, çözülmemiş trakeanın daha fazlasını ortaya çıkarmak için iğneyi yavaşça geri çekin. Trakea güvenli bir şekilde bağlandığında, vanayı çıkarın ve akciğerleri dikkatlice inceleyin. Ardından akciğerleri gece boyunca formaldehite yerleştirin.

Burada, plastik pipetler ve ince 20 gauge telden yapılmış sabit akciğer hacmi sırasında akciğerleri yerinde tutmak için tipik bir cihaz gösterilmektedir. Sabit akciğer hacmini ölçmek için önce kalbi ve akciğerlerdeki diğer akciğer dışı dokuları inceleyin. Ardından, bir tel destek cihazı ile donatılmış yaklaşık 200 mililitre su içeren bir beheri bir teraziye yerleştirin ve ekipmanın darasını alın.

Daha sonra cihazı çıkarın, akciğeri su yüzeyine yerleştirin ve akciğerin, dikişin veya cihazın herhangi bir parçasının beherin yanlarına veya altına temas etmemesine dikkat ederek dokuyu su altına bastırmak için cihazı kullanın. Ağırlığı teraziye kaydedin. Bu sayı, yer değiştiren su hacmini yansıtır ve bu nedenle akciğer hacminin doğrudan bir ölçüsüdür. Daha sonra akciğeri bir silecekte kurutun, beherin darasını tekrar cihazla darası alın ve akciğer hacmi ölçümünü tekrarlayın. Daha sonra iki hacim ölçümünün ortalaması alınmalıdır.