JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:29 dk. • April 30th, 2023
- Yüzeyine tutturulmuş ve immünofloresan boyama ile boyanmış hücrelere sahip işlevselleştirilmiş bir tel alın. Buz gibi soğuk tuzlu sodyum sitrat veya SSC solüsyonu ile yıkayın. Kabloyu floresan etiketli problar içeren bir mikrotüpe yerleştirin ve bir tel durdurucu ile kapatın. Hücreler içindeki DNA'yı denatüre etmek için mikrotüpü karanlık nemli bir odada 75 santigrat derecede bir hibridizasyon fırınında inkübe edin.
Probların DNA üzerindeki tamamlayıcı diziye bağlanması için odayı 37 santigrat derecede bir fırına aktarın. Ardından, hazneyi fırından çıkarın ve teli çıkarın. Teli istenen sıcaklıkta SSC çözeltisi içeren bir tüpe batırın. Spesifik olmayan veya kısmen hibritleştirilmiş probları çıkarmak için teli Tween içeren SSC solüsyonu ile yıkayın ve damıtılmış suda tekrar yıkayın.
Teli kurutun ve hücrenin çekirdeğini lekelemek için işlevselleştirilmiş ucu DAPI solüsyonunda inkübe edin. Kabloyu PBS'de durulayın ve havayla kurutun. Teli bir floresan mikroskobu altına yerleştirin. İlgilenilen gen ile hibritlenen prob, hücrenin çekirdeğinde bir floresan nokta olarak görünür. Aşağıdaki protokolde, akciğer kanseri hücrelerinde ALK geninin translokasyonunu belirlemek için 3D DNA FISH ge
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin