JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:33 dk. • April 30th, 2023
- Pankreas adacıkları, insülin salgılayan beta hücreleri içerir. Tip 1 diyabet hastalarında insülin yapan beta hücreleri işlevsiz hale gelir. Bu tür hastalarda adacıkların transplantasyonu glisemik kontrol sağlama potansiyeli sunar. Transplantasyon verimliliğini değerlendirmek için, ön göz odası greftleme ve in vivo görüntüleme için en uygun bölge olan bir fare gibi hayvan modelleri kullanıyoruz.
Adacıkları nakletmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi ılık bir ısıtma yastığına yerleştirin ve ağrıyı hafifletmek için bir analjezik olan buprenorfini farenin arkasına deri altına enjekte edin. Ardından, sürekli oksijen ve anestezik izofluran kaynağı için farenin burnunu bir burun maskesine yerleştirin.
Gözü ortaya çıkarmak için farenin kafasını baş tutucuya sabitleyin ve gözü dışarı çıkarmak için künt forseps kullanarak göz kapağını nazikçe geri çekin. Floresan etiketli adacıklara sahip bir kanül yükleyin. Kanülün yarım ucunu korneaya yerleştirin. Korneayı kaldırın, adacıkları nazikçe dağıtın, kanülü çıkarın ve göz jeli uygulayın.
İstenilen süreden sonra, fareyi iki fotonlu bir mikroskobun altına yerleştirin ve görüntü alın. Greft boyunca mikrovasküler bir ağ oluşturan kan damarlarını gözlemleyebilirsiniz. Aşağıdaki protokolde, farenin ön göz odasına insan pankreas adacık greftlemesi yapacağız.
Başlamak için, fareyi ılık bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin, baş tutucuya yerleştirin ve burun maskesini takın. Başı hafifçe kaldırmak için başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanın. Yanlardaki metal parçalarla sabitleyin ve kulaklıkların kafayı doğrudan kulakların altına sabitlediğinden emin olun. Deri altında, buprenorfin solüsyonunu farenin arkasına enjekte edin. Nazikçe, künt forseps kullanarak nakledilecek gözün göz kapaklarını geri çekin. Gözü dışarı çıkarın ve polietilen tüp ile kaplı bir cımbızla gevşek bir şekilde sabitleyin.
Adacıkları PBS ile bir Petri kabına aktardıktan sonra, göz kanülünde yaklaşık 20 ila 30 adacık toplayın. 25 gauge bir iğne kullanarak yukarı doğru eğim verin, ucu dikkatlice korneaya yerleştirin ve tek bir yanal kesi yapın. Önceden adacıklarla yüklenmiş kanül ile korneayı dikkatlice kaldırın ve adacıkları yavaşça göze bırakın. Kanülü yavaşça geri çekin ve göze göz jeli uygulayın.
10 dakika sonra, göz kapağını tutan forsepsleri çıkarın ve gözü normal konumuna geri koyun. İmplante edilmiş insan adacıklarının iki foton mikroskobu ile görüntülenmesi için, baş tutucu platformu mikroskobun altına yerleştirin ve kornea ile lens arasına daldırma sıvısı olarak göz jeli uygulayın. Gözü objektifin altına yerleştirin ve implante edilmiş insan adacıklarını metin el yazmasında anlatıldığı gibi görüntüleyin.