JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:11 dk. • April 30th, 2023
- Organoidler, dokuya özgü kök hücrelerden türetilen küçük, üç boyutlu hücre kültürleridir. Genomik olarak stabildirler, ancak transfeksiyon yoluyla genetik olarak değiştirilebilirler ve bu nedenle genetik araştırma için idealdirler. Transfeksiyon için, organoidleri çok kuyulu bir kültür plakasında belirli bir kültür ortamı ile tohumlayın ve istenen süre boyunca inkübe edin. Daha sonra, organoid hücrelerin ayrışmasına yardımcı olmak için plakaya bir ayrışma karışımı ekleyin. Karışımı bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin. Organoid peleti, floresan etiketli plazmit DNA içeren bir elektroporasyon tamponunda yeniden süspanse edin. Tampon hücreleri stabilize eder ve elektriksel strese bağlı hücre ölümünü önler.
Karışımı bir küvete aktarın ve hücreleri elektropore edin. Hücre zarı boyunca elektriksel uyarılar, plazmit DNA'nın hücreye alımını kolaylaştırmak için geçici gözenek oluşumuna neden olur. Elektroporasyondan sonra, hemen hücre süspansiyonuna kültür ortamı ekleyin ve karışımı bir tüpe aktarın. Şimdi, hücreleri santrifüjleyin. Peleti bodrum matrisinde yeniden süspanse edin ve polimerizasyon için çok kuyulu plakaya aktarın. Plakayı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin ve hücrele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin