Pankreas Hücrelerinde Kalsiyum Dinamiklerini Görüntüleme: Pankreas Adacığındaki Sitozolik Kalsiyum Konsantrasyonundaki Gerçek Zamanlı Değişiklikleri İncelemek İçin Bir Teknik

- Pankreas adacıkları, glikoz homeostazının korunmasında çok önemli bir rol oynayan hormon üreten pankreas hücrelerinin bir kümesidir. Yüksek glikoz konsantrasyonu, potasyum iyon kanallarının kapanmasını tetikleyerek potasyum iyonu akışını önler ve membran depolarizasyonuna yol açar. Sonuç olarak, voltaja bağlı kalsiyum iyon kanalları açılır ve kalsiyum iyonlarının akışına izin verir. Bu artan sitozolik kalsiyum konsantrasyonu, insülin gibi hormonların salınımını uyarır. Gerçek zamanlı olarak, sitozolik kalsiyum dinamiklerini görüntülemek için, önceden monte edilmiş ince bir ağın ara duvarları arasına uygun kalsiyum indikatör boyası ile yüklenmiş birkaç adacığı aktarın.

Ağı, ters çevrilmiş bir mikroskobun görüntüleme odasının içine yerleştirilmiş bir lamel üzerine baş aşağı yerleştirin. Hücreleri hareketsiz hale getirmek için kaba bir ağ ve ağırlık yerleştirin. Hazneye görüntüleme solüsyonu ekleyin. Daha sonra, glikoz veya ilgilenilen bir test hormonu eklemek için bir perfüzyon sistemi kurun. Hücreler içinde, önceden yüklenmiş floresan kalsiyum göstergeleri, sitozolik kalsiyum konsantrasyonlarında herhangi bir artış olduğunu bildirir. Kalsiyum iyonlarına bağlandıktan sonra, indikat