Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

- Pankreastaki adacık hücreleri, endokrin fonksiyonlarda rol oynayan temel hormonları üretir. Adacıkları izole etmek için önce ötenazi yapılmış bir fareyi emniyete alın ve karın boşluğunu cerrahi olarak ortaya çıkarın. Ortak safra kanalını bulmak ve klemplemek için karaciğeri ve bağırsakları bir kenara fırçalayın. Pankreas ve safra kanallarının birleşmesiyle oluşan kanal olan Vater'in ampullasını tanımlayın.

Daha sonra, ortak safra kanalına bir kollajenaz enzim çözeltisi enjekte edin. Kanaldan gelen geri akış, pankreası başarılı bir şekilde şişirerek pankreas dokularının kollajenaz kaynaklı ayrışmasını kolaylaştırır. Pankreası daha fazla kollajenaz çözeltisi içeren bir tüpe eksize edin. Dokuyu mekanik olarak doğrayın ve kollajenaz tarafından doku sindirimine yardımcı olmak için inkübe edin.

Homojen bir süspansiyon elde ettikten sonra, kollajenaz aktivitesini inhibe eden proteinler içeren bir çözelti ekleyerek enzimatik sindirimi durdurun. Bir doku peleti toplamak için santrifüjleyin. Peleti uygun yoğunluklu gradyan bir ortamda yeniden süspanse edin, üzerine uygun bir tampon yerleştirin ve gradyan katmanları oluşturmak için santrifüjleyin.

Yoğunluk gradyan ortamı ile tampon arasında