JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:29 dk. • April 30th, 2023
- Sferoidler, üç boyutlu in vitro hücre kültürü modelleridir. İmmünofloresan boyama için, önce çok kuyulu bir plakada gerekli hücre tipinde bir küresel kültür oluşturun. Geniş delikli bir ucu olan bir mikropipet kullanarak, kesme kuvvetleri nedeniyle yırtılmayı önlemeye dikkat ederek sferoidleri toplayın.
Ardından, tek tek hücreleri geçirgen hale getirmek için sferoidleri sabitleyin ve geçirgen hale getirin. Şimdi, hücre yüzeyindeki spesifik olmayan protein etkileşim bölgelerini bloke etmek için proteinler içeren bir çözelti ile inkübe edin. Sferoidleri istenen bir birincil antikor kokteyli ile tedavi edin. Antikorların hücre yüzeyindeki hedef moleküllere bağlanması için inkübe edin.
Daha sonra, sferoidleri, birincil antikorlara özgü floresan etiketli bir ikincil antikor çözeltisi ile etiketleyin. Son olarak, hücre çekirdeklerini boyamak için sferoidlere uygun bir floresan DNA bağlayıcı boya uygulayın. Lazer taramalı bir floresan mikroskobu kullanarak, sferoidin çoklu optik kesitlerini farklı optik düzlemlerde görüntüleyin.
Yakalanan görüntüler, floresan etiketli çekirdekleri ve ilgilenilen antijenleri yansıtır. 3B sferoidin son bileşik görüntüsünü elde etmek için ilgili yazılımı k
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin