JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 3:50 dk • April 30th, 2023
- Geri dönüşümsüz elektroporasyon veya IRE, tümöre kısa, yüksek voltajlı elektrik akımı darbeleri uygulayarak pankreas tümörlerini ablasyon için kullanılan ve tümör hücrelerinde kalıcı hasara neden olan bir tekniktir. IRE, hedef tümör alanı için yüksek seçiciliğe ve erişilebilirliğe sahiptir. Yakındaki sağlıklı hücrelerde ısıya bağlı hasara neden olmaz, bu da onu umut verici bir anti-tümör tedavisi haline getirir.
Anestezi uygulanmış bir fareyi yan tarafa yerleştirerek başlayın ve tümörü pankreasın yüzeyine yerleştirmek için karın boşluğunu inceleyin. Daha sonra, tümör bölgesini parantez içine alarak elektrotları kullanın ve istenen süre boyunca hedeflenen elektrik akımı darbelerini uygulayın. Belirli bir eşiğin üzerindeki elektrik akımı, tümör hücrelerinin hücre zarında kalıcı gözeneklere neden olarak hücrenin homeostaz durumuna dönmesini engeller.
Bu gözenekler hücrenin hücre içi içeriğinin dışarıya çıkmasına neden olur ve bu nedenle apoptoz ile kademeli hücre ölümüne yol açar. Şimdi, karın boşluğunu kapatın ve fareyi ev kafesinde iyileşmeye bırakın. Son olarak, elektroporasyon sonrası tümörün boyutundaki azalma için pankreası izleyin. Aşağıdaki protokolde, farelerin pankreas tümörlerini bozmak için geri dönüşümsüz elektroporasyon gerçekleştirmek için bir yöntem göstereceğiz.
- Tümörün çapı 6 milimetreye ulaşmadan önce, uyuşturulmuş hayvanı tümöre erişim sağlamak için sağ tarafına yerleştirin ve tümör bölgesini temizlemek için makas ve alkollü çubuk kullanın. Forseps kullanarak, cildi doğrudan tümörün altına kaldırın ve elektrotların periton boşluğuna nüfuz etmemesine dikkat ederek, tümörü braketlemek için vücuda paralel olarak deriden iki iğne dizisi elektrotu yerleştirin.
Elektroporatörü, 1 Hertz frekansında, santimetre başına 1.500 voltta toplam 150 darbe için 100 mikrosaniyelik darbeler verecek şekilde ayarlayın ve darbeleri iletmek için ayak pedalını kullanın, her 10 darbe setini 10 saniye ayırın her bir darbe seti arasında ısı dağılımına izin vermek için.
- IRE uygulaması sırasında kas seğirmesi meydana geldiğinden ve ilk darbe seti sırasında daha belirgin olduğundan, elektrotların hala istenen yerde olduğundan ve her darbe setinden sonra hayvanın hala sakinleştirildiğinden emin olun.
- En fazla 200 saniyelik dozlamadan sonra, elektrotları çıkarın ve elektroporatörde gösterildiği gibi verilen gerçek voltajı kaydedin. Ardından, fareyi kafesine geri koyun. Ortotopik bir tümörün IRE'si için, tümör implantasyonundan 8 ila 10 gün sonra, tümörü forseps ile dışsallaştırmak için künt burunlu forseps kullanın ve tümörü cımbızın platin elektrotları ile sıkıca yakalayın.
Elektroporasyon darbelerini az önce gösterildiği gibi verin, herhangi bir kanama belirtisi olup olmadığını izlemek için tümörü son darbe seti için en az 60 saniye dışsallaştırın. Ardından, tümörü karın boşluğuna geri koyun ve gösterildiği gibi insizyonu kapatın, hayvanı tamamen iyileşene kadar izleyin.