Dolaşımdaki miRNA Ekstraksiyonu: Organik Ekstraksiyon ve Küçük RNA Zenginleştirme Yoluyla Plazma Örneklerinden miRNA'yı İzole Etmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:33 dk. • April 30th, 2023
- MikroRNA'lar veya miRNA'lar, mRNA'yı parçalayarak veya fonksiyonel proteinlere translasyonlarını bloke ederek gen ekspresyonunu düzenleyen küçük, kodlamayan RNA'lardır. Dolaşımdaki miRNA'lar potansiyel kanser biyobelirteçleridir ve plazma gibi vücut sıvılarından ekstrakte edilebilirler. Başlamak için, plazmayı, numuneyi aynı anda homojenize eden ve RNA bozunan ribonükleazları inhibe eden denatüre edici bir çözelti ile karıştırın.
Numuneyi DNA ve protein içeren bir alt organik faz ve RNA içeren bir üst sulu faz olmak üzere iki faza ayırmak için asit fenol-kloroform ve santrifüj ile muamele edin. Sulu fazı geri kazanın. Çözeltiden RNA'yı çökeltmek için mutlak etanol ekleyin.
Büyük RNA ayrılmasına elverişli bir başlangıç koşulu ayarlamak için numune etanol konsantrasyonunu %25'e getirin. Karışımı önceden monte edilmiş bir filtre kartuşuna ve santrifüje aktarın. Büyük RNA'lar filtre üzerinde seçici olarak hareketsiz hale gelirken, daha küçük miRNA'lar süzüntüde toplanır.
Daha sonra, miRNA izolasyonunu desteklemek için etanol konsantrasyonunu %55'e yükseltin. Filtratı yeni bir filtre kartuşuna aktarın ve miRNA'ları yakalamak için santrifüjleyin. Kartuşu bir toplama tüpüne yerleştirin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin