JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:55 dk. • April 30th, 2023
- Organoidler, köken organının temel doku özelliklerini taklit etmek için kendi kendini organize eden üç boyutlu in vitro hücresel yapılardır. Etiketlemeye başlamak için, hücreleri süspansiyona ayırmak için hasat edilen organoidleri proteolitik ve kollajenolitik bir enzim kokteyli ile muamele edin. Hücreleri enzim içeren süpernatanttan ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Lentiviral vektörler içeren bir ortam kullanarak hücre peletini çözün. Bu rekombinant virüsler, yeşil bir floresan proteini veya GFP için kodlama dizisini taşır.
Virüsler hücrelerle birleşir ve genetik materyallerini ve bazı viral enzimleri sitoplazmaya salar. Viral ters transkriptaz, konakçının çekirdeğine hareket eden tamamlayıcı viral DNA'yı sentezler. Viral integraz, GFP dizisi içeren viral DNA'nın konakçı genomuna dahil edilmesine yardımcı olur. Bu dönüştürülmüş hücreleri hücre dışı bir matris veya ECM kaplı kültür plakasında büyütün. Ortamı aspire edin ve bağlanmamış hücreleri toplamak için santrifüjleyin. Hücreleri ek ECM'de yeniden askıya alın.
Hücre canlılığını arttırmak için süspansiyonu yapışkan kültür üzerine yerleştirin. Matris katılaştıktan sonra, kültür ortamı ekleyin ve organoid oluşumunu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin