Spontan Metastaz Fare Modelleri: Ortototopik Olarak Enjekte Edilen Kolorektal Kanser Hücrelerinin Metastatik Potansiyelini İncelemek İçin Bir Platform
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:57 dk. • April 30th, 2023
- Kolorektal kanser organoidlerini ifade eden yeşil floresan proteini veya GFP kültürü ile başlayın. Organoidleri hasat edin. Organoidleri tek hücreli bir süspansiyona ayırmak için bir hücre ayırma enzim çözeltisi ile muamele edin. Enzim içeren süpernatanı ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın. Yapay bir hücre dışı matris içeren ortam kullanarak GFP eksprese eden kolorektal kanser hücrelerini yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu bir şırıngaya yükleyin ve ortam sıcaklıklarında matris katılaşmasını önlemek için buz üzerinde tutun.
Ardından, sırtüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bir fare hazırlayın. Rektumun mukozal tabakasını anal açıklıktan yavaşça dışarı çekin. Şimdi, hazırlanan GFP eksprese eden kanser hücresi süspansiyonunu, kan damarları ağını içeren rektal submukozal tabakaya enjekte edin. Farenin iyileşmesine izin verin.
Birkaç gün içinde, enjeksiyon bölgesinde GFP eksprese eden bir primer tümör gelişir. Spontan metastaz ile bu tümör hücreleri ayrılır ve dolaşıma girer. Sonunda, hücreler uzak organlara ekstravaze olur ve GFP pozitif metastatik tümörler oluşturmak için çoğalır. Aşağıdaki protokolde, GFP eksprese eden kolorektal organoid hücrelerin ortotopik
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin