JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:19 dk. • April 30th, 2023
- Mutasyona uğratılacak istenen tümör baskılayıcı geni çevreleyen LoxP ekleri adı verilen spesifik Cre-rekombinaz enzim tanıma dizilerini taşıyan modifiye edilmiş bir genoma sahip anestezi uygulanmış koşullu mutant bir fare alarak başlayın. Cerrahi olarak karın boşluğunu ortaya çıkarın. Distal kolonu bulun ve üst kısmını kelepçeleyin. Transanal olarak tıbbi sınıf bir tüp yerleştirin ve distal kolona ilerletin. Herhangi bir dışkı maddesini çıkarmak için kolonu tuzlu suyla yıkayın. Tüpü değiştirin. Segmentasyon için kolonun alt bölgesini kelepçeleyin. Uygun bir hücre ayrışma çözeltisi kullanarak segmenti şişirin. Bu, mukozal bariyeri deler ve bağırsak kript hücrelerinin erişilebilirliğini arttırır. Ayrışma çözeltisini boşaltın.
Daha sonra, kolon segmentine bir adenoviral süspansiyon enjekte edin. Bu tasarlanmış viral vektörler, Cre-rekombinaz enzimlerini kodlar. Virüs hücreye girer, DNA'sını çekirdeğe bırakır ve enzimleri ifade eder. Proteinler, konakçı genomundaki LoxP eklerini tanır ve bölgeye özgü rekombinasyonu katalize eder, böylece tümör baskılayıcı geni inaktive eder. Bu fonksiyon kaybı mutasyonu kanserin ilerlemesini teşvik eder. Kesiği dikin ve farenin iyileşmesine izin veri
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin