JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:22 dk. • April 30th, 2023
- Tau proteini, kolorektal kanser hücrelerinde nükleolusa periferik olarak lokalize olur ve nükleolar yapının korunmasına yardımcı olur. Çoğunlukla, bu hücreler hiperfosforile tau proteinini eksprese eder ve bu da ilaç direncine neden olur. Bu nedenle, bir fosfataz testi yaparak tau fosforilasyon seviyelerini analiz ediyoruz.
İnsan kolorektal kanser hücrelerinden toplam protein içeren hücre lizatını test ve kontrol olarak etiketlenmiş iki şişede alarak başlayın. Test örneğini alkalin fosfataz enzimi ile muamele edin. Alkalin fosfataz, fosfat gruplarını tau'dan uzaklaştırırken, kontrol şişesi fosforile tau proteinini tutar.
Ardından, proteinleri ayırmak için hem numuneyi hem de kontrol tau'sunu bir poliakrilamid jel üzerinde çalıştırın. Fosforile tau, jel üzerinde fosforile olmayan tau proteininden daha yavaş hareket eder. Protein örneğini uygun bir zara elektroblot yapın ve hem fosforile hem de normal tau'ya karşılık gelen birincil antikorları ekleyin.
Lekeyi gece boyunca kuluçkaya yatırın. Lekeyi, birincil antikorun Fc bölgesine bağlanan raportör enzim konjuge ikincil antikor ile tedavi edin. Son olarak, lekede bulunan toplam protein örneğinden tau proteinini tanımlamak için kemil
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin