JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:28 dk. • April 30th, 2023
- Tau, mikrotübüllerin stabilize edilmesinde ve birleştirilmesinde rol oynayan mikrotübül ile ilişkili bir proteindir. Birçok kanser hücresi, iyi organize edilmiş bir mikrotübül bağlanmasını sürdüremeyen hiperfosforile tau proteini eksprese eder. Tau proteini ve mikrotübüller arasındaki etkileşimi incelemek için, bir mikrofüj tüpüne tau proteini ve bir mikrotübül çalışma çözeltisi içeren kanser hücresi lizatı ekleyin.
Hücre lizatında bulunan fosforile edilmemiş tau proteinleri mikrotübüllere bağlanır. Şimdi, mikrotübüller oluşturmak için filamentlere polimerize olan bir protein olan tübülinin aktivitesini stabilize etmek için tüpe istenen miktarda PEM tamponu ekleyin. Karışımı istenen süre boyunca inkübe edin.
Mikrotübüle bağlı proteini peletlemek için karışımı santrifüjleyin. Bağlanmamış protein süpernatantta kalır. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve peleti uygun bir tamponda yeniden süspanse edin. Yeniden süspanse edilmiş pelet süspansiyonuna bir jel yükleme tamponu ekleyin ve mikrotübüle bağlı proteini ve elektroblotu uygun bir zar üzerinde ayırmak için numuneleri bir poliakrilamid jel üzerinde çalıştırın.
Uygun antikorlar ekleyin ve bağlı tau proteinlerini tanımlamak için kem
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin