Tam Kan Örneğinden CTC İzolasyonu: Murin Kolorektal Kanser Modelinden CTC Elde Etmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:50 dk. • April 30th, 2023
- Dolaşımdaki Tümör Hücreleri veya CTC'ler, birincil tümörden kaynaklanan ve kan dolaşımına giren kanser hücreleridir. Çoğu CTC, yüzeye yapışmadan kan dolaşımında hayatta kalabilir; Bu nedenle, onları doğrudan çoğu kanser hastasının kanından tespit edebiliriz.
Kandaki CTC'ler, tümörün vücut içindeki yayılımını gösterebilir, bu nedenle bunları tanımlamak kanserin ilerlemesini anlamaya yardımcı olur. Anestezi uygulanmış bir kolorektal kanser fare modeli alarak başlayın ve kardiyak ponksiyon ile kan elde edin. Kanı, yoğunluk gradyan ortamı içeren konik bir tüpe aktarın ve kan bileşenlerini ayırmak için santrifüjleyin.
Plazma içeren en üst tabakayı atın ve arayüzde bulunan periferik kan mononükleer hücre fraksiyonunu veya PBMC'yi ayrı bir tüpte toplayın. Daha sonra, anti-EpCAM antikorunu PBMC hücrelerine ekleyin ve floresan mikroskobu altında gözlemleyin. Dolaşımdaki CTC'ler, Epitel Hücre Adezyon Molekülü veya EpCAM olarak bilinen bir hücre markörünü eksprese eder. Bu nedenle, anti-EpCAM antikorları, EpCAM pozitif CTC'lerin tanımlanmasına yardımcı olabilir.
CTC'leri toplayın ve daha fazla aşağı akış analizi için saklayın. Aşağıdaki protokolde, kolorektal kanserli fare modelinin kanının
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin