JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:44 dk. • April 30th, 2023
- Hücreler, hücre dışı bir matris üzerinde etkili olan mekanik kuvvetler üretir. Bu kuvvete çekiş kuvveti denir. Hücreler, göç ve çoğalma gibi çeşitli görevleri yerine getirmek için çekiş kuvvetleri uygular.
Metastatik kanser hücreleri, sağlıklı hücrelerden daha fazla çekiş kuvveti uygular; bu nedenle, hücrelerin elastik substratlar üzerinde uyguladığı çekiş kuvvetlerini ölçmek için bir çekiş sitometrisi testi yapıyoruz. İstenilen miktarda kolon kanseri hücresini, in vitro ECM'yi taklit eden bir jel olan bir poliakrilamid hidrojel üzerine tohumlayarak başlayın. Jel, hücrelerin yüzeye yapışmasına yardımcı olan fibronektin proteinlerini ve konumsal değişiklikler için bir belirteç görevi gören floresan boncukları içerir.
Hücreleri istenen süre boyunca inkübe edin. Hücreler jele yapışır ve çekiş kuvvetini uygular, bu da floresan boncukların yer değiştirmesine neden olur. Şimdi, plakayı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin ve yer değiştiren floresan boncukların bir görüntüsünü alın. Daha sonra, hücreleri ayırmak için plakaya istenen miktarda tripsin ekleyin ve uygun yazılımı kullanarak hücreler tarafından uygulanan çekiş kuvvetini analiz edin. Aşağıdaki protokolde, insan kolon kanseri hücrelerinin hücresel çekişini analiz etmek için bir çekiş kuvveti mikroskobu testi gerçekleştireceğiz.
- Çekiş kuvveti mikroskobu testini gerçekleştirmek için, önce% 0.25 tripsin-EDTA% 10 SDS çözeltisini çekiş deneyi başlamadan önce 10 dakika boyunca bir su banyosunda 37 santigrat dereceye ısıtın. Hücre kültürü inkübatöründen her seferinde bir jeli çıkarın ve mikroskop aşamasına yerleştirin. Görüş alanında tek bir hücre bulduktan sonra, Petri kabı kapağını çıkarın ve hücrenin faz kontrast görüntüsünü alın.
Ardından, görüntüleme modunu floresan olarak değiştirin ve uygun filtreyi seçin. Bu süre zarfında mikroskop tablasını veya numuneyi hareket ettirmeyin. Ardından, hücresel çekiş ile yer değiştiren floresan boncukların bir görüntüsünü alın. Şimdi, hücreyi jelden ayırmak için Petri kabına 1 mililitre Tripsin SDS çözeltisi ekleyin. Hücre çıkarıldıktan sonra boncukların referans görüntüsünü alın.