JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:25 dk. • April 30th, 2023
- Substrat morfolojisi, kanser hücrelerinin davranışını ve metastatik tepkilerini büyük ölçüde etkiler. Dinamik bir aktin hücre iskeleti ağı, hücrelere yapısal destek sağlar ve hücresel harekete aracılık eder. Fokal adezyonlar adı verilen büyük zarla ilişkili protein kompleksleri, hücre iskeletini hücre dışı matrise bağlayarak hücre yayılmasını kolaylaştırır.
Boyamaya başlamak için bir kanser hücre kültürü alın ve hücreleri sabitlemek ve geçirgen hale getirmek için paraformaldehit ile muamele edin. Şimdi, hücreleri arka plan lekelenmesini azaltmaya hazırlamak için proteinleri içeren bir sinyal arttırıcı reaktif ile inkübe edin. Fokal yapışma kompleksi içindeki proteinlerden biri olan vinculin'e bağlanan anti-vinkülin birincil antikorlarını ekleyin.
Daha sonra, numuneyi, birincil antikoru hedef alan bir floresan boya konjuge ikincil antikor ile inkübe edin. Son olarak, hücreleri, hücre iskeletinin aktin filamentlerine seçici olarak bağlanan floresan etiketli falloidin konjugatları ile tedavi edin. Floresan sinyallerini incelemek için hücreleri konfokal lazer tarama mikroskobu altında gözlemleyin.
İyi yayılmış morfolojiye sahip hücreler, tanımlanmış aktin lifleri sergiler ve farklı v
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin