Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellemesi: Melanom Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

- Hastadan türetilen ksenogreft veya PDX modellerinde, insan hastalardan alınan tümör hücreleri veya parçaları, immün yetmezliği olan alıcı farelere implante edilir. PDX modelleri, insan tümör mikro ortamının biyolojik ve moleküler özelliklerini simüle eder. Bir melanom PDX modeli geliştirmek için önce bir melanom hastasından tümör dokusu alın. Nekrotik dokuyu tümörden çıkarın. Bir bulamaç elde etmek için tümörü kıyın. Ardından, anestezi uygulanmış bir alıcı fareyi yüzüstü pozisyonda hazırlayın. Sırt derisinde küçük bir cerrahi kesi yapın. Fasyal membranı veya cildin hemen altındaki gevşek bağ dokusu tabakasını nazikçe kesin. Bu, cildi alttaki kas katmanlarından ayırır ve tümör implantasyonu için bir cep oluşturmaya yardımcı olur.

Tümör bulamacını yavaşça cebe aktarın. Şimdi, implante edilen tümör hücrelerini stabilize etmek ve sabitlemek için cebe yapay bir hücre dışı matris uygulayın. Yarayı cerrahi olarak zımbalayın ve farenin iyileşmesine izin verin. Ksenogreft tümörünün büyümesini gözlemlemek için alıcı fareyi haftalık olarak izleyin. Aşağıdaki protokolde, hastadan türetilen melanom tümör hücrelerinin, hastadan türetilmiş melanom ksenogreft modelleri oluşturmak için immün yetmezliği olan bir NSG faresine deri altı implantasyonunu göstereceğiz.

- Cerrahi eksizyon veya cerrahi biyopsi dokusunu implante etmek için, önce NSG altı ila sekiz haftalık anestezi uygulanmış farelerin alt sırtından saçları tıraş edin ve yaklaşık 1,5 santimetre ila 3 santimetrelik bir alanı saçsız bırakın. Tümör parçalarını hazırlayın ve bir Petri kabındaki tümör bulamacını cerrahi implantasyon için ayrı höyüklere bölün. Bir neşter bıçağı kullanarak, farenin sırtının ortasında yaklaşık 5 milimetre uzunluğunda bir kesi yapın. Bir çift forseps ile, operatörün karşısındaki insizyonun yanındaki cildi yukarı kaldırın. Öte yandan makas ile fasyal zarı küçük makas kesikleri ile nazikçe keserek cildi kas tabakasından ayırın, böylece tümör dokusu için bir cep oluşturun.

Bir tümör yığınının yanı sıra tek bir tümör bulamaç dokusu höyüğünü almak için bir neşter bıçağı kullanın ve dokuyu nazikçe oluşturulan cebe yerleştirin. Ardından, cepteki tümör dokusu höyüğüne 100 mikrolitre yapay hücre dışı matris ekleyin. İki çift forseps kullanarak, yara kenarları birbirine yaklaşacak şekilde her iki uçtaki kesiği yukarı çekin. Ardından, yarayı kapatmak için bir veya iki yara klipsi uygulayın. Deri altından kilogram analjezik başına 1-5 miligram enjekte edilir. İyileşme tamamlandığında yaklaşık 7 gün sonra yara klipslerini çıkarın.