Melanom Kök Hücre İzolasyonu: Manyetik Aktivasyonlu Hücre Sıralaması Kullanılarak CD133 Pozitif ve Negatif Melanom Hücreleri Elde Etmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:40 dk. • April 30th, 2023
- Melanom, hem kendini yenileme hem de tümör başlatma yeteneklerine sahip küçük bir kanser kök hücresi alt popülasyonunu barındırır. CD133 veya bir pentaspan transmembran glikoproteini olan Prominin-1, metastatik melanom kanseri kök hücreleri tarafından ifade edilen anahtar belirteçlerden biridir. CD133 pozitif hücreleri izole etmek için, uygun bir tamponda primer melanom hücrelerinin süspansiyonu ile başlayın.
Hücre yüzeyindeki spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke eden proteinler içeren bir bloke edici reaktif ile inkübe edin. Hücreleri biyotinile CD133 primer antikorları ile tedavi edin. Bu antikorlar, CD133 pozitif hücrelerde eksprese edilen CD133 antijenlerine bağlanır. Şimdi, süspansiyona anti-biyotin manyetik mikro boncuklar ekleyin. Mikroboncukların biyotin etiketli hücrelere bağlanması için kuluçkaya yatırın.
Son olarak, inkübe edilmiş süspansiyonu manyetik bir alana yerleştirilmiş bir kolondan geçirin. Manyetik etki ile, mikro boncuklarla etiketlenmiş tüm CD133 pozitif hücreler sütuna yapışırken, etiketlenmemiş hücreler geçer. Bu etiketlenmemiş CD133 negatif hücreleri toplayın. Sütunu manyetik alandan çıkarın. CD133 pozitif hücreleri elüte etmek ve toplamak için içe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin