Rekombinant Merkel Hücreli Polyomavirüs (MCPyV) Virion Hazırlığı: Yüksek Titreli Rekombinant MCPyV Virion Üretmek İçin Bir Teknik

- Merkel hücreli polyomavirüs veya MCPyV, bir tür cilt kanseri olan merkel hücreli karsinomuna neden olan dairesel bir genoma sahip çift sarmallı bir DNA onkovirüsüdür. MCPyV virionlarını hazırlamak için, önce yapışık bir paketleme hücresi kültürünü, bir transfeksiyon ajanı, viral genom ve viral replikasyonu teşvik etmek için gerekli proteinleri kodlayan iki ekspresyon plazmidi içeren bir kokteyl ile muamele edin.

İnkübasyon sırasında, transfeksiyon reaktifi, plazmitlerle lipopleksler oluşturur ve bunların paketleme hücrelerine verilmesini kolaylaştırır. Çekirdeğin içine girdikten sonra, hücre mekanizması viral ve plazmit genomlarının ekspresyonuna izin verir. Plazmitler ekspresyonu, büyük tümör antijenini ve küçük tümör antijen proteinlerini kodlar. Bu proteinler çekirdeğe yer değiştirir ve viral DNA replikasyonunu yönlendirir. Daha sonra, viral genom yapısal kapsid proteinlerini kodlar. Bu proteinler çekirdeğe hareket eder ve rekombinant virionların toplanmasına yardımcı olur.

Ardından, kültürlenmiş hücreleri hasat edin. Onlara deterjan ve DNaz içeren bir çözelti uygulayın. Deterjan, virüsleri serbest bırakmak için hücreleri parçalar. DNaz, süspansiyondan herhangi bir serbest pla