Primer İnsan Keratinositlerinin Genetik Modifikasyonu: Rekombinant Retrovirüsler Kullanılarak Keratinositlerin Genetik Olarak Manipüle Edilmesi İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:07 dk. • April 30th, 2023
- Keratinositler, epidermiste veya cildin en dış tabakasında bulunan belirgin hücre tipidir. Keratinositleri genetik olarak değiştirmek için, retroviral paketleme anka kuşu hücrelerinin bir kültürüyle başlayın. Daha sonra, ilgilenilen geni taşıyan retroviral vektörler ve bir transfeksiyon reaktifi içeren bir karışım ekleyin. Plakayı istenen süre boyunca inkübe edin.
Transfeksiyon reaktifi, viral genetik materyalin ambalaj hücrelerine verilmesini kolaylaştırır. Bu özel olarak tasarlanmış hücreler, retroviral kapsid üretimi için gerekli proteinleri kodlar ve ilgilenilen geni taşıyan retroviral vektör RNA'nın paketlenmesini teşvik eder. Paketlendikten sonra, olgun virüsler hücrelerden ortama çıkar. Şimdi, virüsle süspanse edilmiş ortamı birincil keratinositler içeren taze bir kültür kabına aktarın. Kültürü istenen bir katyonik polimer çözeltisi ile arttırın.
Katyonik polimer, viral ve keratinosit zarları üzerindeki negatif yükleri nötralize ederek hücre yüzeyi ile viral füzyonun verimliliğini arttırır. Füzyon üzerine virüs, RNA'sını hücre sitoplazmasına bırakır ve bu da çift sarmallı DNA'ya ters kopyalanır. Bu viral DNA çekirdeğe girer ve keratinosit genomu ile bütünleşerek genetik de
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin