JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:07 dk. • April 30th, 2023
- Zebra balığında melanom, melanin üreten hücreler olan melanositlerin kötü huylu dönüşümünden kaynaklanır. Melanom başlangıcını incelemek için, melanoma eğilimli, melanosit eksikliği olan bir transgenik zebra balığı modeli kullanın. Bu model, melanosit spesifik mitfa promotöründeki fonksiyon kaybı mutasyonu nedeniyle melanositlerden yoksundur.
Bu transgenik modelin tek hücreli bir embriyosunu bir agar plakası üzerinde alarak başlayın. Transpozon bazlı bir miniCoopR vektörü ve transpozaz enzimi mRNA'ları içeren bir karışımı embriyoya birlikte enjekte edin. Vektör, iki transpozon elemanı arasına sıkıştırılmış bir aday gene bağlı promotör taşıyan bir mitfa mini geni içeren bir gen kaseti içerir.
Birlikte enjekte edilen mRNA'lar, transpozaz proteinlerini kodlar. Bu proteinler transpozon elementleri üzerinde etki eder ve miniCoopR vektöründen kaset eksizyonunu katalize eder, ardından embriyonun genomik DNA'sına entegrasyonu gerçekleşir. Daha sonra, kaset promotörü hem mitfa geninin hem de ilgilenilen aday genin ekspresyonunu yönlendirir.
Mitfa geni melanosit kurtarılmasını ve gelişimini desteklerken, aday gen onkojenik ise melanom başlangıcını indükler. Geliştirilen zebra balığını tara
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin