JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:45 dk. • April 30th, 2023
- Transkripsiyon faktörleri, DNA bağlanma alanları içeren proteinlerdir. Spesifik DNA dizilerine bağlanırlar ve hücrelerde gen ekspresyonunu düzenlemeye yardımcı olurlar. Ölçekle ilişkili melanositlerde transkripsiyon faktörü ekspresyonunu tespit etmek için, önce anestezi uygulanmış bir zebra balığından koyu pigmentli sırt pullarını hasat edin. Ölçekleri sabitleyin ve tek tek melanositleri geçirgen hale getirmek için bir geçirgenleştirme solüsyonu ile muamele edin.
Koyu melanin pigment granüllerini hücrelerden çıkarmak için bir ağartıcı solüsyon ile muamele edin. Bu ağartma işlemi, sonraki boyama adımları sırasında pigmentle ilişkili arka plan sinyallerinin olasılığını ortadan kaldırır. Hücre yüzeyindeki spesifik olmayan protein bağlanma bölgelerini bloke etmek için proteinler içeren bir bloke edici çözelti ile inkübe edin.
Şimdi, numuneyi istenen primer antikorlarla tedavi edin. Bu antikorlar, hücreler içindeki hedef transkripsiyon faktörlerine bağlanır. Daha sonra, numuneyi birincil antikorlara özgü floresan etiketli ikincil antikorlarla etiketleyin. Ek olarak, hücre çekirdeğini lekelemek için numuneyi uygun bir floresan DNA bağlayıcı boya ile muamele edin. Transkripsiyon faktörü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin