Pseudofracture: Akut Periferik Doku Travma Modeli

Femur veya tibia gibi uzun bir kemik kırıldığında, yaralı kas ve yumuşak doku hasarlı kemik parçalarına ve kemik iliğine maruz kalır. Bunu, doku onarımına yardımcı olmak için güçlü bir bağışıklık tepkisi izler. Bu maruziyetin etkilerini incelemek için bir model, hem femurların hem de tibianın toplanmasıyla oluşturulabilir.

Bir donör fareden. Kemikler bir kemik çözeltisi oluşturmak için ezilir ve daha sonra bir alıcı Farenin yaralı uyluğuna enjekte edilir. Daha sonra immün yanıtlar izlenir ve kırığın neden olduğu travmanın uzun vadeli etkilerini incelemek için uzak organ yaralanmaları değerlendirilir.

Bu tekniğin, bilateral femur kırığı modeli gibi mevcut periferik doku travması yöntemlerine göre ana avantajı, bu modelin, yalancı kırık modelinin, uzun süreli anestezi veya karmaşık kırık fiksasyon tekniklerinin komplikasyonları olmadan uzun süreli sağkalıma izin vermesi ve dolayısıyla travmayı takip eden geç dönemde immün yanıtların incelenmesine izin vermesidir. Prosedüre başlamadan önce, aşağıdakileri hazırlayın: bir buz kovası, Betadine cerrahi aletleri, GRE hemostatları, bir havan ve havan tokmağı forsepsi, 20 gauge iğne, bir CC şırınga, PBS anestezisi ve bir flor burun konisi. Tek bir ötenazi yaş ve kilo eşleşmesi.

Genetik donör fare, üç alıcı için yeterli materyal sağlamalıdır. Donörü bir pleksiglas levhaya bantlayın, alt ekstremiteleri sadece ayağın ucunda bantladığınızdan emin olun. Alt ekstremiteleri dikkatlice tıraş edin.

Daha sonra, uzun kemikleri alt ekstremiteden çıkarmak, kasık bölgesindeki cilde cerrahi bir kesi yapmak ve cildi ekstremitenin uzunluğu boyunca ayak bileğine kadar kesmeye devam etmek için sterilite için Betadine ve alkolle tamamen örtün, cildi geri çekin ve deri altı fasiya ve kastan uzaklaştırın, hem medial hem de lateral açıdan. Daha sonra makasın bir bıçağını tibianın önünde ve yanında bulunan kasların altına sokun. Kasları alttaki kemikten temiz bir şekilde kaldırmak için bıçağı proksimal ve distal olarak kaydırın.

Tibia altındaki kasları ayırmak için bu tekniği tibianın arka ve medial alt tarafında tekrarlayın. Bu bacak kaslarının proksimal ucundaki fibulayı tibiadan uzaklaştırmak için distal olarak kayarken arka tarafta minimal ek efor kullanılmalıdır. Tendonları mümkün olduğunca girişlerine yakın kesin ve kas grubunu bir araya getirirken kasları distal olarak geri çekin Aşağı doğru bir şekilde, küçük bir çekiş, ayak bileği ekleminden kesilen makas kullanarak ayak bileği ekleminden distal ataşmanları serbest bırakacaktır.

Bu noktada tibiayı uyluk kemiğinden ayırmayın, bu bağlantı uyluk kemiğinin kalça ekleminden diseksiyonuna yardımcı olacak ek kaldıraç sağlar. Kasların femurdan serbest bırakılması için benzer bir teknik kullanın. Bunu posterior olarak ve gerekirse hem medial hem de lateral olarak gerçekleştirin.

Bu kas gruplarının distal bağlantısını kesin ve diz ekleminden serbest bırakın. Yeterli pozlama elde etmek için cilt kesisini gerektiği gibi uzatın ve kasların altını takip edin. Femurun ucunu kalça ekleminden çıkarmak için, uyluk kemiğini çıkarın ve tibiayı donör fareden takın ve steril gazlı bez üzerine yerleştirin.

Her bir kemiği ayrı bir elinizle kavrayarak ve iki kemiği uzun AE'leri boyunca zıt yönlerde hafifçe bükerek veya döndürerek diz eklemindeki iki kemiği ayırın. Kalan tendon eklerini uzun kemiklerden çıkarmak için, kemiğin uzunluğunun etrafına dört parça gazlı bez sarın. Sıkıca kavrayın ve kalan dokuları yüzeyden çıkarmak için kemiklerin tam uzunluğunu birkaç kez kazıyın.

Toplanan kemikleri buz üzerinde steril 1,5 mililitrelik mikro reddedilmiş bir tüpe yerleştirin. Donör kemiklerini tamamen dezenfekte edilmiş bir biyolojik güvenlik kabinine taşıyın. Kemik çözeltisinin hazırlanması için.

Başlık, steril bir saha sargısı, steril bir havan ve havaneli, steril bir çift forseps, steril sekiz mililitre tüp steril PBSA bir mililitre pipet ile ilgili pipet uçları ile hazırlanmalıdır. 100 mikrolitrelik bir pipet adamı, ilgili uçlar, bir mililitre şırınga ve forseps kullanarak 20 gauge iğneler, kemikleri havan içine aktarın ve kemikleri nazikçe ezmek için havaneli kullanın. Harcın içine bir mililitre PBS pipetleyin ve tam reçine süspansiyonunu sağlamak için kalan parçaları dairesel hareketlerle ezmeye devam edin.

Sonra bir mililitre PBS daha ekleyin ve pembe bir renk tonuna sahip olması gereken kemik çözeltisini oluşturmak için ezmeye devam edin. Çözeltiyi harçtan yavaşça sekiz mililitrelik tüpe dökün ve daha büyük kalıntıların geride kalmasını sağlayın. Kemik çözeltisini bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın.

20 gauge iğne ile kemik çözeltisi buz üzerinde kalmalıdır. Kemik solüsyonunun bir mikrolitresini, yüzeye eşit şekilde yayılmış bir Mac congar plakasına pipetleyin. Steriliteyi sağlamak için plakayı 24 ila 48 saat inkübe edin.

Yumuşak doku yaralanması ve kemik çözeltisi enjeksiyonu için cerrahi prosedüre, penta barbital anestezi uygulanmış bir farenin ayak parmağıyla anestezi derinliğini değerlendirerek başlayın. Çimdiklemek. Fareyi bir pleksiglas tahta üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve 40 numara bıçaklı beş makas olan Oscar kullanarak her bir ekstremitenin distal kısmının etrafına ince bant şeritlerini, yapışkan tarafı dışarı doğru gevşek bir şekilde sararak hayvanı hareketsiz hale getirin. Hayvanın karın, kasık ve uyluk bölgelerini tıraş edin.

Fareyi steril cerrahi alana aktarın. Cerrahi bölgeyi Betadine ile silin. Sonra sterilize etmek için alkolle silin.

Farenin üzerine, bir mililitre% 99 flor içeren bir parça gazlı bez içeren bir burun konisi yerleştirin. Hayvanın solunumu yavaşlamaya başladığında, burun konisini çıkarın. İşlemin herhangi bir bölümünde ek anestezi gerekiyorsa, ek pentobarbital enjekte edilebilir veya flor uygulanabilir.

Daha sonra katlayın, steril bir alan pansumanı yapın ve sadece alt ekstremitelerin ve başın açığa çıkmasına izin vermek için farenin üzerine örtün. Bu yumuşak doku yaralanması, iki taraflı bir arka bacak ezilme yaralanmasıdır. Farenin arka bacakları hafifçe kesilmiş ve yanal olarak döndürülmüş şekilde konumlandırıldığından emin olun.

Bu, doğru kasa erişilebilirliğe yardımcı olur. Ezilme yaralanmasını gerçekleştirmek için diz fleksörlerini gruplandırın: Dışbükey eğrisi femura bakacak şekilde femur boyunca arka uyluk kas sistemi orta noktasının etrafına 18 santimetrelik büyük bir kanama durdurucu sıkıştırın. Kanama durdurucuyu yalnızca 30 saniye boyunca ilk tıklamaya kadar kilitleyin.

Eğimin ucu uyluk kemiğine değecek şekilde iğneyi deriden iki ila üç milimetre geçirin. Her iki taraftaki ezilmiş uyluk kas sistemine 0.15 mililitre kemik çözeltisi enjekte edin. İğneyi geri çekin ve kemik çözeltisinin yaradan geri akışını durdurmak için enjeksiyon bölgesinin üzerine hızlı bir şekilde steril eldivenli bir parmak yerleştirin.

Bu parmağınızı birkaç saniye orada tutun. Fareyi tekrar kafese yerleştirin ve anestezi azaldığında doğrudan tam hareket özgürlüğü sağlayın. Uygun. Fare uyanırken ağrı yönetimi uygulanmalıdır.

Bu genel şema, sıfır saat zaman noktasında travma sonrası bifazik immün yanıtı göstermektedir. Travma tetiklenir. Bunu, altı saatte zirve yaptığı görülebilen ve sistemik inflamasyon ve uzak organ disfonksiyonunun değerlendirilmesi ile ölçülen erken bir hiper inflamatuar yanıt izler.

Travma sonrası immün yanıtın ikinci bileşeni, immün hücre disfonksiyonu ile ölçülen gecikmiş bir immünosupresyondur ve yaklaşık 48 saatlik bir çukur olarak tasvir edilir. Bu, travmadan erken sonra ortaya çıkan plazmadaki inflamatuar sitokin yanıtının temsili bir diyagramıdır ve sistemik inflamasyonun bir örneğidir. Karaciğer hasarı ile ölçülen uzak organ disfonksiyonunun benzer bir zaman dilimi içinde yükseldiği bulunmuştur.

Bu temsili diyagram, travmayı takiben geç bağışıklık hücresi işlev bozukluğunu vurgulamak için bir örnektir. Bu prosedürü denerken, deney boyunca sterilite ve hassas manipülasyon sağlamayı unutmamak önemlidir. Bu gerçek bir kırık veya yara enfeksiyonu modeli değildir.