Name: Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Öğrenin, Kaposi sarkomu dokusunda çift etiketleme immünohistokimyası ile viral ve konak hücre proteinlerini nasıl belirleyeceğinizi. Bu yöntem, patolojide enfeksiyon ajanlarını ve düzensiz hücre genlerini tanımlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

James EK Hildreth, Meharry Tıp Koleji, onun tavsiye ve bu yazının incelenmesi için teşekkür ederiz. Ayrıca Diana marver yazının düzenleme için teşekkür ederim. AIDS Sağlık Farklılıkların Araştırma Merkezi, NIH hibe 5U54 RR019192-05; Meharry Klinik Araştırma Merkezi, erişmiş P20RR011792; Bu çalışma, AIDS Araştırma Meharry Vanderbilt Merkezi (NIH hibe P30 AI054999-05) tarafından desteklenen ve NIH tarafından Hibe P01 CA113239. DJA kısmen, AIDS Araştırma Vanderbilt Meharry Merkezi (CFAR) ve Meharry Klinik Araştırma Merkezi (CRC) pilot bağışları ile finanse edilmiştir.

<ol><li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma+in+South+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li>
<li>Moore, P. S., Chang, Y. Kaposi's sarcoma associated herpesvirus. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoore%2C+PS+%22Field%27s+Virology%22">Field's Virology</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 2803-2833 (2002).</li>
<li>Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-associated+Kaposi%27s+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma.</a> Science. 266, 1865-1869 (1994).</li>
<li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li>
<li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi%27s+sarcoma%2C+primary+effusion+lymphoma%2C+and+multicentric+Castleman%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Diagn+Pathol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li>
<li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+%28ORF74%29+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li>
<li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+%28spindle%29+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li>
<li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi%27s+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li>
<li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spindle+cell+conversion+by+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li>
<li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LANA-1%2C+Bcl-2%2C+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch%22%5BJournal%5D)">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li>
</ol>

Bu raporda kullanılan metodolojileri, çeşitli laboratuar ayarları yapılabilir. Onlar bazı özel ekipman ya da çekirdek tesislerine erişim gerektirir. KSHV bir biosaftey seviye 3 (BSL-3) özellikler kullanılması gerekebilir gibi bulaşıcı viral patojenler içeren deneyler yaparken uygun önlemler alınmalıdır. Doku satın almalar da uygun kurumsal inceleme kurulları (IRBs) tarafından onaylanmış olması gerekir. Bu metodolojileri birlikte, in vitro ifade içinde düzensiz ve in vivo ol...

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640</td><td>Invitrogen</td><td>05-0001DJ</td><td></td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bütirat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>19364 (FLUKA)</td><td></td></tr><tr><td>EBM-2 besiyeri</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td>+ bullet kitleri takviyesi</td></tr><tr><td>DMVEC hücreleri (HMVEC)</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC2543</td><td></td></tr><tr><td>Fetal dana serumu</td><td>Hyclone</td><td>SH30066.03</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Kameralı lamlar</td><td>Nalge Nunc international</td><td>154461</td><td></td></tr><tr><td>KSHV LANA Mab</td><td>Vector Laboratories</td><td>VP-H913</td><td>1:50 dilüsyon/IFA</td></tr><tr><td>Galektin-3 keçi pAb</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>AF1154</td><td></td></tr><tr><td>Eşek-anti-keçi FITC</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>705-095-1</td><td></td></tr><tr><td>Eşek-anti-keçi Rho</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>705-295-003</td><td>1:100 dilüsyon/IFA</td></tr><tr><td>Kapatma besiyeri</td><td>Vector Laboratories</td><td>H 1500</td><td>DAPI içeren Vectashield</td></tr><tr><td>BCA Protein Analiz Kiti</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Nitrokselüloz</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0112</td><td></td></tr><tr><td>Eşek-anti-keçi-konj.</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC 2020</td><td></td></tr><tr><td>Western substratı</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>34075</td><td></td></tr><tr><td>Biyotin-tavşan-anti keçi</td><td>Dako</td><td>305-065-045</td><td></td></tr><tr><td>AP-Strepavidin konj.</td><td>Dako</td><td>K 0492 (kit)</td><td></td></tr><tr><td>RNase DNase Free Set</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>MJ Mini Cycler</td><td>Bio-Rad</td><td>PTC-1148C</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Fotometre</td><td>Eppendorf</td><td>952000006</td><td></td></tr><tr><td>RC 6 Plus Santrifüj</td><td>Sorvall, Thermo Scientific</td><td>46910</td><td></td></tr><tr><td>Coulter Optima L-90K Ultrasantrifüj</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>392052</td><td></td></tr><tr><td>MYiQ iCycler Real Time PCR Tespit Sistemi</td><td>Bio-Rad</td><td>170-9770</td><td></td></tr><tr><td>TE 2000S Floresan mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE2000S</td><td></td></tr><tr><td>2100 Bioanalyzer</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2938C</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse E 200</td><td>Nikon Instruments</td><td>E 200</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend RT Santrifüj</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>75004377</td><td></td></tr></tbody></table>

kaposi sarkomu ile ilişkili herpes (kshv) yol açtığı düzensiz genler belirlenmesi

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

KS en baskın Güney Afrika&#39;da HIV / AIDS ile ilgili malignite ve dolayısıyla dünyada 1,2 vasküler endotelyal hücreler bir angioproliferative tümör olarak karakterize edilir ve plevral efüzyon lenfomalar şeklinde nadir B hücreli lenfoproliferatif hastalıklar (PEL ) ve multisentrik Castleman hastalığının bazı formları, KS 3-5 hücrelerin sadece% 1-5 Kaposi sarkomu-ilişkili herpes (KSHV), KS ile ilişkili etiyolojik ajan litik çoğaltma aktif destek lezyonlar, ve hücresel faktörler gerektiği açıktır . karsinojeneze ve tümör progresyonu sürecinde viral faktörler ile etkileşim. KS patoloji katkıda 6,7 belirlenmesi roman konak faktörü belirleyicileri sıra KS tedavisi için yeni terapötikler geliştirilmesi için tümör progresyonu ve metastaz için prognostik göstergeleri geliştirmek için gerekli mikroarray analizi düzensiz genler tarafından tespit edildikten sonra 8 eşlik eden video ayrıntıları dermal mikrovasküler endotel hücreleri (DMVEC) KSHV enfeksiyon sonrası ve KS tümör dokusu değişmiş konak hücre gen ekspresyon programları tanımlamak için kullandıkları yöntemleri. 9, protein ekspresyonunda değişiklikler immunoblotting ve çift etiketli immünofloresan doğruladı. Düzensiz genlerin transkripsiyonel ifade değişiklikler kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (QRT PCR) ile in vitro teyit edilir. Arşiv KS tümör dokusu kullanılarak in vitro bulgular Doğrulama ayrıca çift etiketli immünokimyanın tuvar 8,10 Bizim yaklaşımımız, in vitro ve in vivo model sistemler daha sonra gelişmesi için izin KS tümör dokusu mikroçevresinin düzensiz genlerin belirlenmesi amacıyla KS tedavisi için potansiyel yeni tedavi keşif ve değerlendirme.

Konak hücre faktörleri, kuruluş ve Kaposi sarkomu (KS) bakım çok önemli bir rol oynamaktadır. Biz KSHV enfekte DMVEC hücreleri değişmiş konak hücre faktörleri belirlemek için yöntemler anahat ve KS tümör dokusu. Virüs tarafından değiştirilmiş Hücresel gen roman tedavi için potansiyel hedef (ler) olarak hizmet edecektir.

Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi

Günümüzde KS, Güney Afrika'da ve dolayısıyla dünyada HIV/AIDS ile ilişkili en yaygın malignitedir.1,2 Angioproliferatif bir ... olarak karakterize edilir.

Bu prosedürün genel amacı, viral ve konak hücre proteinleri için immünohistokimya kullanılarak Kaposi sarkomu tümör dokusunun çift etiketlemesini göstermektir. Bu işlem, öncelikle ısı kullanarak antijenlerin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise biyotine konjuge primer antikorun uygulanmasıdır.Prosedürün üçüncü adımı, strep din enzim konjugatının eklenmesidir. Prosedürün son adımı ise renk gelişimi için dokuya enzim substratının eklenmesidir. Sonuç olarak, immünohistokimyasal boyama yoluyla tümör dokusundaki hem viral hem de konak hücre proteinlerinin lokalizasyonunu gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu yöntem, aynı örnekte enfeksiyöz ajanların yanı sıra düzensiz çalışan hücresel genlerin tanımlanması gibi patoloji alanındaki temel sorulara yanıt verebilir. Çeker ocak altında, fikse edilmiş parafin gömülü dokunun 5 µm kalınlığındaki kesitlerini içeren sekiz adede kadar lamı ksilen dolu bir Coplan kavanozuna yerleştirin. Deparafinizasyon yapmak ve lamları çift etiketli immünohistokimya işlemine hazırlamak için 10 dakika boyunca inkübe edin.Dokuyu %100, %95 ve %70'lik etanol çözeltilerinden oluşan bir dereceli seride beşer dakika boyunca rehidre edin. Antijen maskesinin açılması, diğer adıyla antijen geri kazanımı işleminden önce lamları en az 10 dakika boyunca suya aktarın. Lamları, taze hazırlanmış 95 °C sıcaklıktaki çözeltinin bulunduğu plastik bir kaba daldırın.50 millimolar sitrat tamponu, 95 °C'de kaynama durumunu korumak için mikrodalga fırında 15 dakika boyunca ısıtın. Lamları hemen oda sıcaklığındaki distile su dolu bir coplan kabına aktarın. Ardından lamları, taze hazırlanmış söndürme solüsyonu ile dolu temiz bir coplan kabına aktarın.Endojen peroksidazı söndürmek için 30 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edildi. Her yıkama beş dakika sürecek şekilde, oda sıcaklığındaki 1X PBS ile üç kez yıkandı. Lamlar PBS yıkamasından çıkarıldı, fazla sıvı silkelendi, doku 200 µL buz gibi soğuk bloklama solüsyonu ile kaplandı ve kurumasını önlemek için bir parafin şeridi ile örtüldü.Lamları nemlendirilmiş bir hazneye yerleştirin ve oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin. Parafin şeridini kaldırın ve lam üzerindeki fazla bloklama solüsyonunu silkeleyerek atın; ardından dokuyu kaplayacak şekilde bloklama tamponunda seyreltilmiş 50 ila 100 µL buz gibi soğuk KSHV Lana primer antikoru ekleyin. Dokuyu yeni bir parafin şeridiyle kapatın ve nemlendirilmiş haznede bir ila iki saat boyunca inkübe edin.Lamları 1X PBS içerisinde beş dakika boyunca üç kez yıkayın. Her yıkamadan sonra, 1X PBS içerisinde seyreltilmiş 50 ila 100 µL biyotinize sekonder antikor ekleyin ve nemlendirilmiş hücrede oda sıcaklığında 30 ila 45 dakika inkübe edin. Lamlar inkübe olurken, peroksidaz konjuge streptavidini hazırlayın.Daco animasyon düeti kiti kullanılarak, 1,5 ml'lik bir eppendorf tüpü içerisindeki 1 ml 1X PBS'e 10 µL çözelti A ekleyin ve karıştırmak için vorteksleyin. 10 µL çözelti B ekleyin, tekrar vorteksleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Lamları 1X PBS ile, her bir yıkama beş dakika sürecek şekilde 3 kez yıkayın.Daha önce yapıldığı gibi, slaytlara 100 ile 200 µL arasında horseradish peroxidase konjuge streptavidin ekleyin. Nemlendirilmiş oda sıcaklığındaki inkübasyon kabında 30 ila 45 dakika inkübe edin. Slaytları tekrar, her yıkama beş dakika sürecek şekilde 1X PBS ile üç kez yıkayın.Yıkamanın bitimine beş dakika kala, 20 milliliters XPBS ve 25 microliters %3 Hidrojen peroksit içeren 50 milliliter'lik konik bir tüpe bir adet DAB tableti bırakın. Her seferinde bir lam ile çalışarak DAB çözeltisini 0,45 micrometer'lik bir şırınga filtresinden süzün. Işık mikroskobunda parlak alan aydınlatması altında, dokuyu bir milliliter DAB çözeltisi ile kaplayın.Enfekte hücrelerde KSHV Lana için renk gelişimi izlenmeli ve istenen renk gelişimi sağlandığında işlem tamamlanmalıdır. Çift etiketleme için reaksiyonu durdurmak amacıyla lamlar beş dakika boyunca distile su içerisinde bekletilmelidir. Eşlik eden metinde açıklandığı üzere, 95 °C sıcaklıktaki sitrat tamponunda antijen maskesinin kaldırılması işlemiyle tekrar başlanmalı ve boyama yapılmalıdır.Aynı prosedürü kullanarak, dokuyu per mount montaj medyumu ile monte edin ve lamelyle kapatarak aydınlık alan aydınlatması altında görüntüleyin. Daha fazla istatistiksel analiz için, parafin bloklara gömülmüş birçok bireysel örneğin gönderilip, buradan zımbalama yöntemiyle alınarak bir doku mikro dizisi şeklinde düzenlenmesi genellikle tercih edilir. Gri okla belirtilen, hücresel protein pcam one CD 31 için pozitif olan kahverengi hücreler kan damarlarının etrafında kümelenmiştir.Viral protein için pozitif olan kırmızı hücreler. Siyah oklarla işaretlenen Lana, Kaposi sarkomu ile ilişkili herpes virüsü ile enfekte olmuş hücreleri göstermektedir. Burada, hücresel protein pcam için pozitif olan kahverengi hücrelerin düşük büyütmeli görüntüsü yer almaktadır.Kan damarları çevresindeki bir bölgede gri oklarla belirtilen CD 31. Viral protein için pozitif olan kırmızı hücreler. Siyah okla işaretlenen Lana, Kaposi sarkomu ile ilişkili herpes virüsü ile enfekte olmuş hücreleri göstermektedir.Burada, tümör dokusu mikrodizisinde, viral protein için pozitif olan kahverengi hücrelerin görüldüğü bir KS tümör dokusu biyopsisi yer almaktadır. Lana, kaposi sarkomu ile ilişkili herpes virüsü ile enfekte olmuş hücreleri göstermekte olup bazı iğsi hücre oluşumları sergilemektedir. Burada, tümör dokusu mikrodizisinde, viral protein için pozitif olan kahverengi hücrelerin yer aldığı bir başka KS tümör dokusu biyopsisi görülmektedir.Lana, yüksek derecede iğsi hücre oluşumuyla birlikte kaposi sarkomu ilişkili herpes virüsü ile enfekte olmuş hücreleri belirtir. Bu videoyu izledikten sonra, formalinle fikse edilmiş ve parafine gömülmüş dokularda çift etiketli immünohistokimyanın nasıl uygulanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu deneyi gerçekleştirirken, mikroskop altında renk gelişimini izlemek ve reaksiyonu su ile durdurmak oldukça önemlidir.

identifying-dysregulated-genes-induced-kaposi-s-sarcoma-associated

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz bir model herpes, gamma herpes 68 (γHV68) litik çoğaltma konak sinyal molekülleri arasında önemli rolleri tanımlamak için bir protokol açıklar. Genetiği değiştirilmiş fare suşları ve γHV68 litik replikasyon için embriyonik fibroblastlar kullanarak, protokol fenotipik karakterizasyonu ve viral litik çoğaltma virüs konak etkileşimler moleküler sorgulama hem de izin verir.

Model Herpesvirüs Litik çoğaltma Diseksiyon Host-virüs Etkileşim

Canlı hücreler içinde ayrı DNA molekülleri gözlenmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu teknik ilgi DNA içine yerleştirilmiştir bağlanma yerleri için bir floresan etiketlendi lac represör proteininin bağlayıcı esas alınmaktadır. Bu yöntem, zaman içindeki çok sayıda canlı hücreler rekombinant DNA izlemek için adapte edilebilir.

Floresan Mikroskobu ile Çoklu Nesiller boyunca Canlı Memeli Hücrelerinde Plazmid Çoğaltma İzlenmesi

İnsan genomunun% 8'ini işgal insan endojen retrovirüsleri (herv), kıt kodlama kapasitelerini ama yüz bin uzun terminal tekrarları (LSY) korur. Özel bir Affymetrix mikroarray bireysel herv odağı ifade belirlemek için tasarlanmıştır ve gelecekteki klinik çalışmalar için kavramının bir kanıtı olarak prostat kanseri dokularda kullanıldı.

Prostat Kanserinde Biyomarker Discovery Uygulama: Bireysel herv Lokusları İfade Mikroarray tabanlı Kimlik

İnsan Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) ve Epstein-Barr virüsü (EBV) ile yakından ilgili olan bir model herpesvirüs, kemirgen gamma herpes virüsü 68 (γ HV68) ile enfekte olan fareler içindeki antiviral sitokin üretimini ölçmek için bir protokolü tarif eder. Genetik olarak modifiye edilmiş olan fare soyları ve fare embriyonik fibroblastlar (MEF'ler) kullanarak, biz antiviral sitokin üretimini in vivo ve ex vivo hem de değerlendirildi. Lentiviral transdüksiyonu ile nakavt embriyonik...

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

Bu hayvan modellerinin doku bölümleri içinde kalıcı bir DNA virüsü genomunun saptanması için in situ hibridizasyon protokolünde bir floresan kurulmuştur. Bu protokol, viral genomun codetection, kendi RNA ürünleri ve tek bir hücre içinde viral veya hücresel proteinleri tarafından enfeksiyon süreci üzerinde çalışırken sağlar.

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

Kaposi sarkomu (KS) enfeksiyon oncogenic virüs insan herpesvirus-8/KS herpesvirus (HHV-8/KSHV) ile indüklenen bir tümördür. Burada açıklanan endotel hücre kültür model benzersiz olarak hangi konak hücreleri KSHV dönüşümleri mekanizmaları eğitim için uygundur.

Hücresel dönüştürme Kaposi sarkomu Herpesvirus tarafından eğitim için bir Vitro modeli

Viral transkripsiyon fabrikalar hücresel RNA polimeraz II viral gen transkripsiyonu yeniden etkinleştirme sırasında artırmak için ile zenginleştirilmiş ayrık yapılardır. Burada, sitelerinden Aktif 3D nükleer alanda viral Kromatin ayirt boyama ve in situ RNA hibridizasyon kombinasyonu tarafından transkripsiyonu birini bulmak için bir yöntem açıklanmıştır.

3D Floresans mikroskobu kullanılarak Viral transkripsiyon fabrikaların fonksiyonel görüntüleme

Burada bir iletişim kuralı açıklamak yüksek üretilen iş RNAi tarama oncolytic virüs tedavisi geliştirmek için manipüle edilebilir ana hedefleri ortaya çıkarmak için istihdam için özellikle rhabodvirus ve vaksinia virüs tedavisi, ama -ebilmek var olmak diğer oncolytic için kolayca adapte virüs platformlar veya virüs çoğaltma genellikle modüle ana bilgisayar genler keşfetmek için.

Tedavi Oncolytic virusu modüle ana faktörleri tanımlamak için genom çapında RNAi tarama

Biz situ hibridizasyon floresan kullanan bir protokol tarif (FISH) lytically enfekte insan hücrelerinin içinde birden fazla herpesviral RNA görselleştirmek için, süspansiyon veya yapışık. Bu protokol, nükleositoplazmik oran üreten floresan ların niceliğini içerir ve konak ve viral proteinlerin immünoresans (IF) ile eşzamanlı olarak görüntülenmesi için uzatılabilir.

KSHV Enfekte Hücrelerde Spesifik Gen Ürünlerinin Situ Hibridizasyonunda (FISH) ve İmmünfloresansında (IF) Kantitatif Floresan

Bu protokol, BAC16'dan türetilmiş viryonları kullanarak Kaposi sarkomu ile ilişkili herpes virüsünün de novo litik enfeksiyonunu modellemek için bir in vitro sistemi tanımlar. Yöntem, erken viral replikasyon ve yayılımının araştırılmasını sağlar. Enfeksiyöz virüs üretimi, GFP tabanlı enfeksiyöz birim testleri ve kapsüllenmiş viral genomların gerçek zamanlı PCR'si ile ölçülür.

Hücresiz Kaposi Sarkomu ile İlişkili Herpes Virüsü ile De Novo Litik Enfeksiyonun Kurulması ve Miktarının Belirlenmesi

Öğrenin, Kaposi sarkomu dokusunda çift etiketleme immünohistokimyası ile viral ve konak hücre proteinlerini nasıl belirleyeceğinizi. Bu yöntem, patolojide enfeksiyon ajanlarını ve düzensiz hücre genlerini tanımlamaya yardımcı olur.

Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi

Daha fazla video keşfet