Name: Adeno-ilişkili Viral Vektörler İntrakranial Enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Öğrenin, görsel korteksteki nöron ve glia hücrelerini floresan etiketleme için adeno-ilişkili viral vektörlerle intrakranial enjeksiyon yöntemini. Bu teknik, transgenik fare hatlarına göre daha ekonomik ve hızlıdır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Burroughs Wellcome Fonu, Whitehall Vakfı ve Sloan Vakfı (AKM) Biyomedikal Bilimler Kariyer Ödülü NIH (EY012977) bağışları ile mümkün olmuştur.

1. Virüs İşleme ve Depolama <ol><li> Uygun koruma ve kullanım teknikleri kullanılacak virüs biyogüvenlik düzeyi dayalı seçilmelidir. Bu uygulamalar CDC web sitesinde mevcut Mikrobiyolojik ve Biyomedikal Laboratuvarlar 5 th edition, Biyogüvenlik bulunabilir ( <a href="http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm">http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm</a> ). AAV vektörleri Biyogüvenlik Seviye 1 (BSL-1) kullanım için onaylanmıştır. Virüs işlerken deney burada gösterildiği için, bir laboratuvar önlüğü ve eldiven BSL-1 agentları için prosedürler uyarınca, aşınmış olacak. </li><li> Virüs aktivitesini korumak için tekrarlanan dondurma ve çözme önlemek için küçük alikotları içine bölmek en iyisidir. </li><li> Biyogüvenlik Kabini (BSC) Sınıf II, herhangi bir gereksiz nesneler BSC takas ve% 70 EtOH yüzey sterilizasyon virüs aliquoting için hazırlayın. AAV-kontamine atık toplama kaputu% 10 çamaşır suyu çözeltisi içeren bir behere koyun. Ayrıca, steril 0.5mL tüpler ve kuru buz bir kap BSC yerleştirilir. </li><li> BSC dışında buz üzerinde viral stok çözülme. </li><li> Vorteks virüs ve BSC içinde tüp açık. </li><li> Flaş dondurucu virüs 0.5mL bir tüp içine istenen kısım hacim (örneğin 5 mcL) Pipet, tüpün kapağı kapatılır ve kuru buz koyun. </li><li> Tüm virüs aliquoted edildiğinde, virüs tüp ve pipet uçları,% 10 çamaşır suyu içeren atık kabını atmayın. </li><li> Kaputun atık kabını çıkarın ve% 10 oranında ek çamaşır suyu ekleyin, daha sonra lavaboya çamaşır suyu dökün. Enstitünün biyogüvenlik memuru tarafından talimat olarak biohazard bir kap içinde plastik atık bertaraf edin. </li><li> % 10 çamaşır suyu ile virüs ile temas geldi herhangi bir ekipman veya yüzeyleri temizleyin. Eldiven atın. </li><li> -80 ° C derin dondurucuda saklayın alikotları. </li></ol> 2. Cerrahi <ol><li> Emici laboratuarlarında kağıt cerrahi alanı kapsayacak. Cerrahi aletler kurumun biyogüvenlik ve hayvan kullanım yönergelerine uygun aseptik koşullarda steril ve cerrahi yapılmalıdır. </li><li> Mikropipetler virüs yükleme adanmış olacaktır cerrahi alanına bitişik bir alanda seçin ve emici laboratuvar tezgah kağıt ile örtün. Virüs, bu alanda buz bir kap içinde bir kısım yerleştirin ve izin ameliyat yapılmaktadır virüs buz üzerinde çözünme. </li><li> Pipet uçları, vb. Atılmasının virüsü ile temas halinde geldiği için adanmış bir virüs taşıma alanında% 10 çamaşır suyu atık konteyneri Kur. </li><li> Bir bardak ucu çapı yaklaşık 20 mikron Wiretrol mikropipet çekin. Mikropipet künt ucunda küçük bir damla mineral yağ koyun ve mikropipetler tel piston takın. </li><li> Micropump kol kelepçesi mikropipet sabitleyin. </li><li> Buprenorfin ile 0.5 mg / kg dozunda subkutan bir fare enjekte edilir. Intraperitoneal enjeksiyon yoluyla 200 mg / kg dozu ile Avertin fare anestezi ve cerrahi makas ile başın üst saç kaldırmak, saç kesi girmesini engellemek için yeterince büyük marjları bırakmak emin olun. </li><li> Vücut ısısı 37 ° C ameliyat boyunca korumak ve stereotax fare güvence altına almak için, bir stereotax taban ısıtma battaniye takın. </li><li> Etanol ve betadin alan sterilize etmek için üç alternatif scrubs ile baş batırın. </li><li> Ameliyat sırasında gözleri nemli tutmak için her gözün Tobradex göz merhemi bir damla yerleştirin. </li><li> Baş orta hatta aşağı bir kesi yapın ve cilt kafatası açığa çıkarmak için geri çekin. </li><li> Ince uçlu forseps kullanılarak kafatası fasya dikkatlice çıkarın. </li><li> Stereotaksik koordinatları kullanılarak enjekte edilir alanını bulun ve cerrahi bir kalem ile kafatası işareti. </li><li> Birkaç parça halinde inceltilerek alan bölme, yaklaşık 2mm kafatası kafatası çatlak kadar çapı 1.4mm bir çapak, ince bir alana sahip bir diş matkap kullanma. </li><li> Bu işlem boyunca, steril tuzlu su uygulamaları ile kafatası nemli tutmak. </li><li> Ekstra ince uçlu forseps kullanarak inceltilmiş kafatası parçaları hafifçe kaldırarak kraniotomi gerçekleştirin. </li></ol> 3. Enjeksiyon Hazırlık <ol><li> KimWipe kapağı üzerine yerleştirilen bir virüs virüs ve pipet 1.5uL (1uL bir enjeksiyon için), parafilm küçük bir parça üzerine tüp açın. </li><li> Mikropipet ucu viral stok içine yerleştirin ve piston elle çekilmeye. Mikropipet viral stok çizim güçlük yaşıyorsanız, ucu biraz daha küçük bir bölümünü cam kırmak için mikropipet KimWipe piercing büyütülmüş olabilir. </li><li> Mikropipet ucu kadar piston üzerine küçük bir miktar virüs Alt micropump kol effect. Idin bir pamuk uçlu aplikatör ve iptal aplikatör ile bu küçük bir damla çıkarıne kap. </li><li> Mineral yağ mikropipet mikropipet beyin içine düşürdü olarak tıkanmasını önlemek için ucuna bir damla uygulayın. </li></ol> 4. Virüs Enjeksiyon <ol><li> X ve Y stereotaksik koordinatları kullanarak mikropipet, enjekte edilecek alanın üzerine yerleştirin. Bu deneyde, stereotaksik orta hatta lateral 2.7mm bregma posterior ve 2.5mm birincil görsel korteks bulmak için kullanılır koordinatları. Çok yavaş doğru Z konumuna mikropipet 1mm/1minute yaklaşık bir oranda daha düşük. </li><li> SYS Micro4 micropump denetleyici kutuya istenilen enjeksiyon parametreleri girin ve enjeksiyon başlatabilir. Bu deney için, 10 dakika içinde 1 mikrolitrelik enjeksiyon oran olarak kullanılacaktır. </li><li> Enjeksiyon bittiğinde, çıkarılması sırasında virüs efflux önlemek için bir-iki dakika dinlenmek için pipet bırakın. Bu dönemden sonra, çok yavaş beyin (yukarıdaki gibi aynı oranda) mikropipet çıkarın. </li><li> Kafa derisi sütür ve doku yapıştırıcısı ile yapıştırın. Sonraki 72 saat içinde 0.1 mg / kg her 8-12 saatte bir doz hayvan buprenorfin ile subkutan enjekte edilir, veya hayvan olarak sürece ağrı belirtilerini sergiliyor. Yürüyebilen ve kendi kafesine iade edilmesi için hazır olana kadar bir ısı lambası altında hayvan kurtarmak için izin verin. Görüntüleme deneyler istenen inkübasyon süresi (viral enjeksiyondan sonra hafta gün) sonra başlanmalıdır. </li></ol> 5. Temizleme <ol><li> Mikropipet% 10 çamaşır suyu ile durulayın ve bir dikiş iğnesi kap içinde atın. </li><li> Bölüm 1 aynı şekilde atık konteyneri atın. </li><li> Laboratuarlarında kağıt biohazard bin içine atın ve tüm yüzeylerin ve aletlerin% 10 çamaşır suyu ile virüs ile temas gelmiş aşağı silin. </li><li> Kullanılmayan virüs tekrarlanan donma / çözülme döngüsü virüs düşmesine neden olduğunu göz önünde tutarak, tekrar donmuş olabilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. CMV Promotor kontrolü altında yeşil floresan proteininin (GFP) taşıyan çift iplikli adeno-ilişkili virüs serotip 1 (dsAAV S1) enjeksiyonundan sonra nöron Transduced. Epifluorescent bir mikroskop kullanılarak görüntülü yanı sıra hücre gövdesi proksimal ve distal dendritler sabit bölümlerde açıkça görülebilir. Ölçeği bar = 100 mikron. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. intrakranial bir virüs gibi viral yayılma derecesi etiketli nöronlar, glia ve süreçleri gösteren dsAAV S1 kullanarak birincil görsel korteks enjeksiyonu tipik Etiketleme. Ölçeği bar = 250 mm. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 dsAAV S1 kullanarak hipokampus hücrelerinin Etiketleme. Ölçeği bar = 250 mm. Bu rakamlar Lowery ve ark uyarlanmıştır. 2009 1

<ol><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O'Malley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+expression+and+phenotypic+correction+using+adeno-associated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nat Genet. 8, 148-154 (1994).</li>
<li>Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+gene+transfer+efficiency+in+the+murine+striatum+and+an+orthotopic+glioblastoma+tumor+model%2C+using+AAV-7-+and+AAV-8-pseudotyped+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors.</a> Hum Gene Ther. 17, 807-820 (2006).</li>
<li>Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+to+the+brain%3A+duration+and+modulation+of+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression.</a> Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).</li>
<li>Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+long-term+labeling+of+cells+in+the+developing+and+adult+rodent+visual+cortex+using+double-stranded+adeno-associated+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors.</a> Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).</li>
</ol>

Hayvan ve deneysel protokolleri PHS, Laboratuvar Hayvanları İnsani Bakım ve Kullanım Politikası uyarınca Hayvan Kaynakları (UÇAR), University of Rochester Üniversitesi Komitesi tarafından kabul edildi.

Viral-aracılı gen teslim nörolojik süreçleri ve beyin bozuklukları 1,2,3 tedavi çalışmaları için büyük bir potansiyele sahiptir . Bu tekniğin çok yönlülüğü de hücreleri in vitro ve in vivo 4 hem de görüntüleme için floresan etiket yararlanılabilir. Burada nöron ve gelişmiş yeşil flüoresan protein ifade eden bir çift iplikli adeno-dernek virüs kullanarak fare görsel korteks glia transdüksiyon için ayrıntılı bir prosedür ortaya koymaktadır. Bu t...

<table><tbody><tr><td>St&amp;#8211;lting Fare Mouse ve Neonatal Sıçan Adaptörü</td><td>Stoelting Co.</td><td>51625</td><td>Hayvanların cerrahi için sabitlenmesinde kullanılan standart stereotaksik cihazlar yerine kullanılabilir</td></tr><tr><td>Ekstra İnce Bonn Makası, 8.5cm, düz uç, kesme kenarı 13mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Göz Pansuman Penseti, 10cm, uç genişliği 0.5mm, eğri</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Penset- Dumoxel Standart Uç, 11cm, açılı</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>Kraniyotomi gerçekleştirmek için ekstra ince uçlu penset</td></tr><tr><td>Standart Desenli Penset, düz, 2.5mmx1.35mm uç, 12cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Microtorque Kontrol Kutusu ve Tech2000 el parçası</td><td>Ram Products, Inc.</td><td>TECH2000ON/OFF</td><td>Dental drill</td></tr><tr><td>Mikro Matkap Paslanmaz Çelik Frezeler, 1.4mm uç çapı</td><td>Fine Science Tools</td><td>19008-14</td><td></td></tr><tr><td>Wiretrol mikropipetler, 1-5 µL iletmek için</td><td>VWR international</td><td>5-000-1001 veya 53480-287</td><td></td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>VWR international</td><td>29447-338</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Mikromanipülatör ve Eğilebilir Taban (sağ elli)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>M3301-M3-R</td><td>Stereotaksik koordinatların belirlenmesinde kullanılır</td></tr><tr><td>SYS-Micro4 Kontrolörü ile birlikte (bir adet) UltraMicroPump (UMP3)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>UMP3-1</td><td></td></tr><tr><td>Sütürler</td><td>VWR international</td><td>95056-952</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown Mikropipet Çekici</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Tobradex</td><td></td><td></td><td>Kurumunuzun veteriner hizmetlerinden temin edilebilir&amp;rsquo;</td></tr></tbody></table>

adeno-ilişkili viral vektörler İntrakranial enjeksiyon

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

İntrakranial floresan proteini ifade etmek için tasarlanmış viral vektörlerin enjeksiyonu in vivo ve beyin bölümlerde iki farklı beyin bölgelerindeki hücrelerin belirli altkümelerini görünüm için çok yönlü bir etiketleme tekniği. Enjeksiyon floresan boyaların aksine, viral etiketleme bireysel hücre tipleri hedef sunar ve transgenik fare hatları kurulması daha tüketen daha az pahalı ve zaman. Bu teknikte, adeno-ilişkili virüs (AAV) vektörü, çevredeki dokuya minimum zarar ile intrakranyal istenen alana stereotaksik koordinatları, bir mikropipet ve AAV hassas teslimat için otomatik bir pompa kullanarak enjekte edilir. Enjeksiyon parametreleri, enjeksiyon enjeksiyon, enjeksiyon yeri, enjeksiyon hacmi, hızı, AAV serotip ve gen ekspresyonu sürüş organizatörü hayvan yaş ayarlayarak bireysel deneyler için uygun olabilir. Seçilen koşullara bağlı olarak, viral indüklenen transgen ifadesi, dendritik dikenleri düzeyini aşağı hücreleri, tek tek hücreler veya ince hücresel süreçlerin grupları görselleştirme, izin verebilirsiniz. Burada gösterilen deneyi fare birincil görsel korteks nöronlar ve glia etiketleme için yeşil flüoresan protein ifade çift iplikli AAV bir enjeksiyon gösteriyor.

Burada görsel korteks nöronlar ve glia floresan etiketlenmesi için AAV vektörleri intrakranial enjeksiyon sunuyoruz.

Adeno-ilişkili Viral Vektörler İntrakranial Enjeksiyon

Floresan bir protein eksprese edecek şekilde tasarlanmış viral vektörlerin intrakraniyal enjeksiyonu, belirli ... görselleştirmesi için çok yönlü bir markalama tekniğidir.

Viral vektörler, dokudaki belirli hücre alt kümelerinde floresan proteinler eksprese etmek için kullanılabilir. Burada, mühendislik ürünü proteinler eksprese eden bir virüs, öncelikle bu bölge üzerinde küçük bir kraniyotomi gerçekleştirilerek beynin primer görsel korteksine yerleştirilir. Ardından, beyne bir cam mikro pipet indirilerek dental ilişkili bir viral vektör enjekte edilir ve cerrahi bölge kapatılır.Hayvan iyileştikten sonra, floresanla işaretlenmiş hücrelerin kaderini in vivo olarak veya beyin kesitlerinde takip etmek için görüntüleme yapılabilir. Bu tekniğin, floresan boya işaretlemesi ve transgenik fare hatları gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajları, tekil hücre tiplerini hedefleyebilmesi ve transgenik bir hat oluşturmaktan daha az maliyetli ve daha az zaman alıcı olmasıdır. Adeno-ilişkili viral vektörlerin kullanımı, biyogüvenlik seviyesi bir veya BSL bir için onaylanmıştır.Burada, BSL 1 ajanlarının kullanımıyla ilgili prosedürlere uygun olarak laboratuvar önlüğü ve eldiven giyilecektir; işleme, Ali quoting virüsü için sınıf iki bir biyogüvenlik kabini hazırlayarak başlayın. Bu, tekrarlanan dondurma ve çözme işlemlerinden kaçınarak virüsün aktivitesini koruyaca

intracranial-injection-of-adeno-associated-viral-vectors

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Pereira, M. et. al., Viral Vektörlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile Yerleşik Glial Hücrelerin İnternöronlara İn Vivo Doğrudan Yeniden Programlanması. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, Cre'ye bağımlı nöronal yeniden programlama ve floresan raportör genleri glial hücrelere iletmek için transgenik bir farenin serebral korteksine adeno-ilişkili bir virüsün stereotaksik enjeksiyonunu göstermektedir.

Bir fare modelinde glial hücre yeniden programlaması için viral vektörlerin stereotaksik enjeksiyonu

Kaynak: Li, D., et al. Yetişkin Farelerde Rekombinant Adeno İlişkili Virüslerin Doğrudan İntratekal Enjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, adeno-ilişkili virüslerin (AAV) uyanık bir farenin beyin omurilik sıvısına (BOS) intratekal enjeksiyonu için şırınga hazırlığı, omurga hizalaması ve hassas iğne yerleştirmeyi kapsayan prosedürü göstermektedir. Bu yöntem, CNS tedavileri için potansiyelini destekleyerek hedeflenen gen iletimini doğrular.

Merkezi Sinir Sistemi Hastalıklarının Tedavisi için Bir Fare Modelinde Virüslerin İntratekal Verilmesi

Kaynak: Grames, M. S., et al. Adeno İlişkili Virüsün Sıçanlara İntravenöz Uygulanması ve Merkezi Sinir Sistemi Transdüksiyonunun Değerlendirilmesi için Yöntemler ve İpuçları. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, sıçanlarda rekombinant adeno-ilişkili virüsün (AAV) kuyruk veni enjeksiyonunu göstermektedir. Lateral kuyruk venine enjeksiyondan sonra, virüs kan dolaşımına girer, kalpte dolaşır ve beyne ulaşır, burada nöronlara girer ve nöroterapötik uygulamalar için hedef protein üretimini kolaylaştırır.

 Bir Sıçan Modelinde Rekombinant Adeno İlişkili Virüs Vektörlerinin İntravenöz Uygulaması 

Burada, adeno-ilişkili virüsün yenidoğan fare beynine intraventriküler enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon için bir teknik gösteriyoruz.  Bu yöntem, viral olarak verilen transgenlerin yaşam boyu ekspresyonunu elde etmek için hızlı ve kolay bir yol sağlar.

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

Beyin de in vitro veya ektopik analizler tarafından temsil edilmeyen nitelikleri ile benzersiz bir sitedir. Tekrarlanabilir bulunduğu yere ve büyüme özelliklerine sahip Ortotopik fare modelleri güvenilir bir stereotaksik tespit aracı ve bir düşük basınç şırınga pompası kullanılarak kafatası içine uygulanan enjeksiyonları ile oluşturulabilir.

Oluşturma Anatomik Doğru ve İnsan Beyin Tümörleri Reproducible İntrakraniyal Ksenograftlar

Fareyi bir geniş ölçekli merkezi sinir sistemi gen teslimi için yöntemleri kaplıdır. Bu örnekte, amacı tüm omurilik etkileyen bir hastalık taklit etmektir. Yaygın iletim bir terapötik protein MSS için bir kerelik, Çevre Yönetimi'nden teslim etmek için kullanılabilir.

Yöntemleri ve merkezi sinir sistemi iletim değerlendirilmesi ve Adeno ilişkili virüs fareler için intravenöz Yönetim için ipuçları

Burada %1 lidokain hidroklorür viral bir çözümde küçük hayvanlar için verimli adeno ilişkili virüs teslim edilmesini sağlamak ve iletim verimliliği merkezi tahmin etmek için bir skorlama sistemi kurmak için bir doğrudan intratekal enjeksiyon tekniği mevcut sinir sistemi geçici zayıflık lidokain tarafından indüklenen derecesine göre.

Rekombinant Adeno ilişkili virüs yetişkin farelerde doğrudan intratekal enjeksiyon

Bu yazıda, subkonjonktival enjeksiyon, mikroenjeksiyon iğneleri ile birlikte infüzyon/geri çekilme şırınga pompası ve gaz geçirmez çıkarılabilir şırıngadan oluşan bir enjeksiyon sistemi kullanılarak farelerde oküler dokular için geçerli bir vektör dağıtım yöntemi olarak gösterilmiştir. Bu enjeksiyon sistemi diğer göz içi uygulama yolları için de uyarlanabilir.

Küçük Hayvan Modellerinde Adeno İlişkili Virüs Vektörlerinin Subkonjonktival Uygulaması

Genç sıçanın bel sarnıcına enjeksiyon yapmak için cerrahi bir prosedür tarif edilmiştir. Bu yaklaşım, gen terapisi vektörlerinin intratekal verilmesi için kullanılmıştır, ancak bu yaklaşımın hücreler ve ilaçlar dahil olmak üzere çeşitli terapötikler için kullanılabileceği tahmin edilmektedir.

Juvenil Sıçanlarda Lomber Sarnıç Enjeksiyonu ile İntratekal Vektör Verilmesi

Burada, yetişkin farelerde adeno-ilişkili virüsü (AAV) sistemik olarak uygulamak için fare lateral kuyruk veni enjeksiyonu için optimize edilmiş bir protokolü detaylandırıyoruz. Ek olarak, AAV transdüksiyonunu değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan tahlillerin protokollerini açıklıyoruz.

Yetişkin farelerde lateral kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla adeno ilişkili virüsün tutarlı bir şekilde verilmesi

Subaraknoid virüs infüzyonu kullanan adeno ilişkili virüsün yaygın olarak verilmesi için yeni bir teknik tanımlanmıştır. Bu yöntem sadece fare neokortikal nöronlarının yüzeysel katmanlarda yaygın olarak transdüksiyonunu sağlamakla kalmaz, aynı zamanda seçici olmayan bir promotör kullanıldığında bile beşinci katman piramidal nöronlarında transgenin seçici ekspresyonu ile sonuçlanır.

AAV2'nin Subaraknoid Enjeksiyonu ile Fare Neokortikal Nöronlarının Yaygın Transdüksiyonu

Öğrenin, görsel korteksteki nöron ve glia hücrelerini floresan etiketleme için adeno-ilişkili viral vektörlerle intrakranial enjeksiyon yöntemini. Bu teknik, transgenik fare hatlarına göre daha ekonomik ve hızlıdır.

Adeno-ilişkili Viral Vektörler İntrakranial Enjeksiyon

Daha fazla video keşfet