Name: Soğuk önkoşullamanın nöro-Çalışması için Stratejiler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-02T17:30:00.000+00:00
Duration: 16 min 27 s
Description: Öğrenin soğuk önkoşullamanın nöroproteksiyon mekanizmalarını sıçan hipokampal dilim kültürleri kullanarak. TNF-α ve interlökin 11 sinyalini ölçmek için qPCR ve immünohistokimya yöntemleri uygulanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüsü ve İnme (NS-19108), Migren Araştırma Vakfı ve Richard P. Kraig Beyaz Vakfı bağışları ile finanse edilmiştir. Bayan Marcia P. Kraig kültür ortamı ve dilim kültürlerin bakım hazırlanmasına yardımcı oldu. Yelena Grinberg Biz bu makalenin son halini onun yorum ve düzeltmeleri için teşekkür ederim.

<ol><li>Aptowicz, C. O., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+plasticity+in+hippocampal+slice+cultures+involves+changes+in+voltage-gated+Na%2B+channel+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Homeostatic plasticity in hippocampal slice cultures involves changes in voltage-gated Na+ channel expression.</a> Brain Res. 998, 155-163 (2004).</li>
<li>Beattie, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+synaptic+strength+by+glial+TNFalpha%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Control of synaptic strength by glial TNFalpha.</a> Science. 295, 2282-2285 (2002).</li>
<li>Breder, C. D., Dewitt, D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+inducible+cyclooxygenase+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of inducible cyclooxygenase in rat brain.</a> J Comp Neurol. 355, 296-315 (1995).</li>
<li>Caggiano, A. O., Breder, C. D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+elevation+of+cyclooxygenase-2%2C+but+not+lipoxygenase%2C+in+regions+synaptically+distant+from+spreading+depression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Long-term elevation of cyclooxygenase-2, but not lipoxygenase, in regions synaptically distant from spreading depression.</a> J Comp Neurol. 376, 447-462 (1996).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eicosanoids+and+nitric+oxide+influence+induction+of+reactive+gliosis+from+spreading+depression+in+microglia+but+not+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Eicosanoids and nitric oxide influence induction of reactive gliosis from spreading depression in microglia but not astrocytes.</a> J Comp Neurol. 369, 93-108 (1996).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+and+4-aminopyridine+prevent+the+lipopolysaccharide-induced+outwardly+rectifying+potassium+current+and+interleukin-1beta+production+in+cultured+rat+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 and 4-aminopyridine prevent the lipopolysaccharide-induced outwardly rectifying potassium current and interleukin-1beta production in cultured rat microglia.</a> J Neurochem. 70, 2357-2368 (1998).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E+receptor+subtypes+in+cultured+rat+microglia+and+their+role+in+reducing+lipopolysaccharide-induced+interleukin-1beta+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E receptor subtypes in cultured rat microglia and their role in reducing lipopolysaccharide-induced interleukin-1beta production.</a> J Neurochem. 72, 565-575 (1999).</li>
<li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+therapies+for+stroke+and+traumatic+brain+injury+often+display+U-shaped+dose+responses%3A+occurrence%2C+mechanisms%2C+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Drug therapies for stroke and traumatic brain injury often display U-shaped dose responses: occurrence, mechanisms, and clinical implications.</a> Crit Rev Toxicol. 38, 557-577 (2008).</li>
<li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+stress+response+terminology%3A+Integrating+the+concepts+of+adaptive+response+and+preconditioning+stress+within+a+hormetic+dose-response+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Biological stress response terminology: Integrating the concepts of adaptive response and preconditioning stress within a hormetic dose-response framework.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 222, 122-128 (2007).</li>
<li>Calabrese, E. J., Baldwin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis%3A+the+dose-response+revolution%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Hormesis: the dose-response revolution.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 175-197 (2003).</li>
<li>Hansel, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+CD4%2B+T-cell+gene+expression+in+allergic+subjects+using+two+different+microarray+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Analysis of CD4+ T-cell gene expression in allergic subjects using two different microarray platforms.</a> Allergy. 63, 366-369 (2008).</li>
<li>Hulse, R. E., Kunkler, P. E., Fedynyshyn, J. P., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+multiplexed+bead-based+cytokine+immunoassays+for+rat+serum+and+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of multiplexed bead-based cytokine immunoassays for rat serum and brain tissue.</a> J Neurosci Methods. 136, 87-98 (2004).</li>
<li>Hulse, R. E., Swenson, W. G., Kunkler, P. E., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monomeric+IgG+is+neuroprotective+via+enhancing+microglial+recycling+endocytosis+and+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Monomeric IgG is neuroprotective via enhancing microglial recycling endocytosis and TNF-alpha.</a> J Neurosci. 28, 12199-12211 (2008).</li>
<li>Hulse, R. E., Winterfield, J., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+clasmatodendrosis+in+hippocampal+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Astrocytic clasmatodendrosis in hippocampal organ culture.</a> Glia. 33, 169-179 (2001).</li>
<li>Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-alpha+and+Microglial+Hormetic+Involvement+in+Neurological+Health+and+Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dose-Respose+Society%22%5BJournal%5D)">TNF-alpha and Microglial Hormetic Involvement in Neurological Health and Migraine.</a> International Dose-Respose Society. , (2010).</li>
<li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+cytokine+protein+expression+profiles+from+spreading+depression+in+hippocampal+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Multiplexed cytokine protein expression profiles from spreading depression in hippocampal organotypic cultures.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 24, 829-839 (2004).</li>
<li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Schmitt, M. W., Nicholson, C., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+current+source+density+analysis+in+hippocampal+organotypic+culture+shows+that+spreading+depression+occurs+with+uniquely+reversing+currents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optical current source density analysis in hippocampal organotypic culture shows that spreading depression occurs with uniquely reversing currents.</a> J Neurosci. 25, 3952-3961 (2005).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytosis+from+excitotoxic+injury+in+hippocampal+organ+culture+parallels+that+seen+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytosis from excitotoxic injury in hippocampal organ culture parallels that seen in vivo.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 17, 26-43 (1997).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+waves+precede+electrophysiological+changes+of+spreading+depression+in+hippocampal+organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Calcium waves precede electrophysiological changes of spreading depression in hippocampal organ cultures.</a> J Neurosci. 18, 3416-3425 (1998).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P%2FQ+Ca2%2B+channel+blockade+stops+spreading+depression+and+related+pyramidal+neuronal+Ca2%2B+rise+in+hippocampal+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">P/Q Ca2+ channel blockade stops spreading depression and related pyramidal neuronal Ca2+ rise in hippocampal organ culture.</a> Hippocampus. 14, 356-367 (2004).</li>
<li>Lambertsen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+protect+neurons+against+ischemia+by+synthesis+of+tumor+necrosis+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia protect neurons against ischemia by synthesis of tumor necrosis factor.</a> J Neurosci. 29, 1319-1330 (2009).</li>
<li>Lee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormesis+and+disease+resistance%3A+activation+of+cellular+stress+response+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Hormesis and disease resistance: activation of cellular stress response pathways.</a> Hum Exp Toxicol. 27, 155-162 (2008).</li>
<li>Ning, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+and+simultaneous+gene+profiling+of+84+drug-metabolizing+genes+in+primary+human+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Systematic and simultaneous gene profiling of 84 drug-metabolizing genes in primary human hepatocytes.</a> J Biomol Screen. 13, 194-201 (2008).</li>
<li>Oppenheim, J., Feldman, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOppenheim%2C+J+%22in+Cytokine+Reference%22">in Cytokine Reference</a>. Oppenheim, J. J., Feldman, M. 1, Academic. New York. (2001).</li>
<li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, e45-e45 (2001).</li>
<li>Stellwagen, D., Beattie, E. C., Seo, J. Y., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+AMPA+receptor+and+GABA+receptor+trafficking+by+tumor+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of AMPA receptor and GABA receptor trafficking by tumor necrosis factor-alpha.</a> J Neurosci. 25, 3219-3228 (2005).</li>
<li>Stellwagen, D., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+scaling+mediated+by+glial+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic scaling mediated by glial TNF-alpha.</a> Nature. 440, 1054-1059 (2006).</li>
<li>Streit, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+as+neuroprotective%2C+immunocompetent+cells+of+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia as neuroprotective, immunocompetent cells of the CNS.</a> Glia. 40, 133-139 (2002).</li>
<li>Wilde, G. J., Pringle, A. K., Sundstrom, L. E., Mann, D. A., Iannotti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+and+augmentation+of+ischaemia-related+neuronal+death+by+tumour+necrosis+factor-alpha+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Attenuation and augmentation of ischaemia-related neuronal death by tumour necrosis factor-alpha in vitro.</a> Eur J Neurosci. 12, 3863-3870 (2000).</li>
</ol>

Soğuk önkoşullamanın nöro yer sitokin sinyalizasyon sistemi tarif önemli temelde iki önemli kavram Şekil 6 ve 7 'de gösterilmiştir. Öncelikle, sitokinler, son derece düşük konsantrasyonda normal beyin moleküllerinin sinyalizasyon. Bununla birlikte, fizyolojik sitokin konsantrasyon değişiklikleri, çünkü gen ekspresyonu değiştirmek için yeteneklerini (Şekil 6) beynin yapısı ve işlevi (yani, fenotip) değiştirmek için muazzam bir potansiyel var. Ayrıca, sitokinler benzer etkiler ve tek bir sitokin değişken etkileri olabilir (Şekil 7) son derece gereksiz ve birden fazla sitokinler pleiotropik. Böylece, doğru soğuk önkoşullamanın (veya diğer fizyolojik önkoşullamanın uyaranlara) ilgili sinyalizasyon değişkenlerin bileşik analizi tespit edilmelidir nöro için doğuştan sitokin üsleri kurmak için. Bu çoğullanır tahlil stratejileri aracılığı ile gerçekleştirilir. Bu "imza" soğuk önkoşullamanın nöro-sitokin kuracak. <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6. Güç beyin sitokin sinyal çizimler iyi tanınan diğer meslektaşları yoğunluklarına göre, beynin sitokinlerin fizyolojik konsantrasyonlarının muazzam sinyal gücü ifade . Konsantrasyon, referans noktası olarak tek bir kedi bıyık ile başlayan, mesafe ters olarak temsil edilmektedir. Sodyum (10 -1 M biber bir tane resimli) ve potasyum (domates gösterildiği 10 -3 M), sırasıyla 150 ve 3 mM düzeyde interstisyel beyin alanı bulunan ve iyi tanınan bir rolleri var sinir hücresinin elektrofizyolojik fonksiyonu. Benzer şekilde, pH (yani, 10 -7 M hidrojen iyonları düzeyleri ve Chicago Gölü sahili boyunca 780 metre gösterildiği gibi) ve kalsiyum (yani 7.8 km McCormick ve Chicago Gölü sahili boyunca bir uydu Google resim görüldüğü gibi gösterilir ~ 10 -8 M düzeyleri Chicago Üniversitesi yakınlarında Hyde Park Promontory Noktası yerleştirin.) Buna ek olarak, interstisyel alan bu konsantrasyonları üzerinde salınan nörotransmitterlerin yerel beyin bölgesi aktivitesini etkiler. Buna karşılık, sitokinler (Earth Mars mesafe olarak gösterilir) konsantrasyonları daha on milyon kat daha az beyin fonksiyonu değiştirebilir. <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig7.jpg" alt="Şekil 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7. Doğuştan sitokin yollar interaktif sinyalizasyon. Sitokinler, son derece gereksiz ve birden fazla sitokinler pleiotropik benzer etkileri olabilir ve tek bir sitokin değişken etkileri olabilir . Böyle bir çeşitlilik, ligandlar, reseptörler ve phosphoproteins düzeyinde ortaya çıkan karmaşık bir interaktif sinyalizasyon kaynaklanmaktadır. Daha fazla karmaşıklık, doğuştan sitokin, hücre spesifik reseptör ve ilgili phosphoprotein değişiklikleri yetenekli her farklı hücre tipleri, beyinde oluşur gerçeğinden kaynaklanmaktadır. Burada amaçlıdır, yollar (immün hücre çalışmaları türetilen) sinyal sadece doğuştan gelen sitokin gösterilmiştir. Basitlik için, doğuştan sitokinlerin potansiyel etkileşimleri gösteren tek bir hücre (beyaz çizgi) (IL-1α ve IL-1β (IL-1α / β), TNF-α, IL-6 olarak anılmaktadır, beyin olarak çizilir IFN-γ ve IL-10), reseptörleri (IL-1R1, TNFR1, IL-6/gp130, IFNγR, ve IL-10R) ve phosphoproteins (yani, kinazlar ERK1 / 2, P38 (P38-MAPK) ve JNK) transkripsiyon faktörleri (ATF-2, NFκB ve STAT3). ATF-2 ile gen ekspresyonu tetikler JNK, p38-MAPK ERK1 / 2, TNFR1 yoluyla Örneğin, TNF-α sinyalleri. TNF-α da NFκB aktivasyonu yoluyla doğrudan gen ekspresyonu değiştirir. Birlikte, bu transkripsiyon faktörlerinin aktivasyonu belirtildiği gibi sitokinler ve bunların reseptörleri ifade arttı (künt sonu) (ok) ve azalmış çağrıştırıyor. Da önemlisi, bu yollar, tek bir sitokin bu değişiklikleri (örneğin, TNF-α), diğer (örn., IL-1β) sitokinlerin etkisi üretimi göstermektedir. Böylece, doğru soğuk önkoşullamanın ilgili sinyalizasyon değişkenlerin bileşik analizi tespit edilmelidir nöro-sitokin üsleri kurmak için. Bu soğuk önkoşullamanın doğuştan gelen sitokin "imza" kuracak. (Görüntü referans # 25 verilerinden derlenmiştir.)

Dilim Kültürler hazırlanması <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Millicell-CM doku kültürü ekler (30 mm) </td><td> Thermo Fisher </td><td> PICM0-3050 </td><td></td></tr><tr><td> Bazal Orta Kartal </td><td> Invitrogen </td><td> 21010 </td><td></td></tr><tr><td> Earle s Dengeli Tuz Çözeltisi </td><td> Sigma </td><td> E2888 </td><td></td></tr><tr><td> At serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Invitrogen </td><td> 35050 </td><td></td></tr><tr><td> Gentamisin </td><td> Invitrogen </td><td> 15710-064 </td><td></td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Invitrogen </td><td> 15295 </td><td></td></tr><tr><td> D-glukoz </td><td> Sigma </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> BSL-1 davlumbaz </td><td> Fırıncı </td><td></td><td></td></tr><tr><td> McIlwain doku kıyıcı </td><td> Brinkmann </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Teflon diskler </td><td> Brinkmann </td><td> 023-49-310-1 </td><td></td></tr><tr><td> Spatula </td><td> Thermo Fisher </td><td> 14-373-25A </td><td></td></tr><tr><td> Eğimli iris makası </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14091-09 </td><td></td></tr><tr><td> Uzun düz makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 14002-14 </td><td></td></tr><tr><td> Uzun forseps </td><td> Thermo Fisher </td><td> 13-812-40 </td><td></td></tr><tr><td> Açılı forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11808-02 </td><td></td></tr><tr><td> Kısa forseps </td><td> Thermo Fisher </td><td> 13-812-38 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 Inox forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> 2 Iris spatulae </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10094-13 </td><td></td></tr><tr><td> 150 x 15 mm Petri kapları </td><td> Thermo Fisher </td><td> 08-757-148 </td><td></td></tr><tr><td> 60 x 15 mm Petri kapları </td><td> Thermo Fisher </td><td> 08-757-100B </td><td></td></tr><tr><td> Vahşi M8 stereomikroskopta </td><td> Wild Heerbrugg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gey denge tuz çözümü </td><td> Sigma </td><td> G9779 </td><td></td></tr><tr><td> BLAK-Ray kısa dalga Ultraviyole ölçüm metre </td><td> UVP </td><td> J-225 </td><td></td></tr><tr><td> 6-iyi Falcon kültür kaplarına </td><td> Thermo Fisher </td><td> 08-772-1B </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Invitrogen </td><td> 21103</td><td></td></tr><tr><td> B27 takviyesi </td><td> Invitrogen </td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> Gem21 Neuroplex </td><td> İkizler Bioproducts </td><td> 400-160-010 </td><td></td></tr><tr><td> Askorbik asit </td><td> Sigma </td><td> A4544 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 Analyzer </td><td> Bacharach </td><td> # 2820 </td><td></td></tr></tbody></table> Dilim Kültürler Canlılık için ön tarama <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Sytox Yeşil </td><td> Invitrogen </td><td> S7020 </td><td></td></tr><tr><td> DMIBRE inverted mikroskop </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Soğuk Önkoşullama <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> BSL-2 Çeker </td><td> NuAire </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Eksitotoksik Yaralanma <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> CoolSnap fx CCD kamera </td><td> Photometrics </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluoroscein </td><td> Invitrogen </td><td> F36915 </td><td></td></tr><tr><td> MetaMorph yazılımı </td><td> Moleküler Cihazlar </td><td> v. 7.5.04 </td><td></td></tr><tr><td> 100 mikron derin hemasitometre </td><td> Hausser Bilimsel </td><td></td><td></td></tr><tr><td> N-metil-D-aspartat </td><td> Calbiochem </td><td> 454575 </td><td></td></tr><tr><td> SigmaStat yazılımı </td><td> Systat Software Inc. </td><td> v. 3.5 </td><td></td></tr></tbody></table> Soğuk Önkoşullama uygulanan Co-tedavileri <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> sTNFR1 </td><td> Ar-Ge Sistemleri </td><td> 425-R1-050 </td><td></td></tr><tr><td> Sığır Serum Albumin </td><td> Sigma </td><td> A-4503 </td><td></td></tr></tbody></table> RNA İzolasyon <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> RNAl ater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Mikro RNEasy Seti </td><td> Qiagen </td><td> 74004 </td><td></td></tr><tr><td> ß-mercaptoethanol </td><td> Balıkçı </td><td> 03446-100 </td><td></td></tr><tr><td> Diposable 1.5 RNAse-ücretsiz havaneli </td><td> Güney Jersey Precision Tool ve Kalıp, Inc. </td><td> 749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N261A </td><td></td></tr><tr><td> Tris [hidroksimetil] aminomethane </td><td> Sigma </td><td> T3069 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA (ethylenediaminetetraacetic asit disodyum tuz hidrat </td><td> Sigma </td><td> # E7889 </td><td></td></tr></tbody></table> RNA Niceleme <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> RiboGreen Testi </td><td> Invitrogen </td><td> R11491 </td><td></td></tr><tr><td> Maya tRNA </td><td> Invitrogen </td><td> 15401-011 </td><td></td></tr><tr><td> 1,5 mL santrifüj tüplerine </td><td> ABD Bilimsel </td><td> 16155500 </td><td></td></tr><tr><td> 96-floresan tahlil plaka </td><td> Nunc </td><td> DK-4000 </td><td></td></tr><tr><td> 96-floresan plak okuyucu </td><td> Tecan </td><td> Safire II. </td><td></td></tr></tbody></table> Kantitatif PCR <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> iScript ters transkripsiyon kiti </td><td> Bio-Rad </td><td> 170-8891 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR Green </td><td> Invitrogen </td><td> S7563 </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Taq polimeraz </td><td> Invitrogen </td><td> RNA Ultrasense 11732-927 </td><td></td></tr><tr><td> iCycler PCR </td><td> Bio-Rad </td><td> iCycler Optik Modülü </td><td></td></tr><tr><td> iCycler sistem yazılımı </td><td> Bio-Rad </td><td> v. 3.1 </td><td></td></tr></tbody></table> Kantitatif PCR için Mikroarray&#39;ler <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Uzakta RNaz </td><td> Moleküler Bioproducts </td><td> # 7000 </td><td></td></tr><tr><td> RT 2 Birinci Strand Kiti </td><td> SABiosciences </td><td> C-03 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR Green tabanlı PCR karışımı </td><td> SABiosciences </td><td> PA-011 </td><td> ICycler için özel hususlar </td></tr><tr><td> RT 2 Profiler PCR Dizisi </td><td> SABiosciences </td><td> Parn-011A </td><td></td></tr></tbody></table> Proteomik Testi <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog/ Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Hücre parçalama kiti </td><td> Bio-Rad </td><td> 171-304011 </td><td></td></tr><tr><td> Mikrosantrifüj </td><td> Fisher Scientific </td><td> Mikro 7 </td><td></td></tr><tr><td> BSA protein Stock </td><td> Bio-Rad </td><td> 500-0007 </td><td></td></tr><tr><td> BCA protein tahlil kiti </td><td> Thermo Scientific </td><td> 23225 </td><td></td></tr><tr><td> İmmüno 96 kuyu plakalar </td><td> Nunc </td><td> 449824 </td><td></td></tr><tr><td> Sızdırmazlık bandı </td><td> Bio-Rad </td><td> 2239444 </td><td></td></tr><tr><td> 96-plaka okuyucu </td><td> Perkin Elmer </td><td> 1420-mulilabel sayacı </td><td></td></tr><tr><td> Bioplex Rat TNF-α sitokin tahlil </td><td> Bio-Rad </td><td> X0000001T </td><td></td></tr></tbody></table> Immün <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalogu / Model Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehit </td><td> Alfa Aesar </td><td> 43368 </td><td></td></tr><tr><td> Lizin </td><td> Sigma </td><td> L-6001 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum fosfat </td><td> Fisher Scientific </td><td> S374-1 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum periyodat </td><td> Sigma </td><td> S-1878 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum azid </td><td> Sigma </td><td> S-2002 </td><td></td></tr><tr><td> Hidrojen Peroksit (% 30) </td><td> Sigma </td><td> H1009 </td><td></td></tr><tr><td> Keçi serum </td><td> Colorado Serum Şirketi </td><td> CS 0920 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T-8787 </td><td></td></tr><tr><td> Boyama yemekleri </td><td> Ted Pella, Inc. </td><td> 14511 </td><td></td></tr><tr><td> Levha Shaker </td><td> Lab-Line Instruments, Inc. </td><td> 3520 </td><td></td></tr><tr><td> # 1 Filtre Kağıtları (185 mm) </td><td> Whatman </td><td> 1001-185 </td><td></td></tr><tr><td> 3,3-diaminobenzidin </td><td> Sigma </td><td> D8001 </td><td></td></tr><tr><td> Dimetil sülfoksit </td><td> Sigma </td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Pharmco-AAPER </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td> Ksilen </td><td> Fisher Scientific </td><td> X3&#39;leri-4 </td><td></td></tr><tr><td> Permount montaj medya </td><td> Fisher Scientific </td><td> SP15-100 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Leica </td><td> cm 3 050 S </td><td></td></tr><tr><td> Doku-Tek </td><td> Ted Pella, Inc. </td><td> 27050 </td><td></td></tr><tr><td> İnce ucu boya fırçası </td><td> Ted Pella </td><td> 11806 </td><td></td></tr><tr><td> PAP engelleme kalem </td><td> Ted Pella, Inc. </td><td> 22309 </td><td></td></tr><tr><td> SFX sinyal Enhancer </td><td> Invitrogen </td><td> A31631 </td><td></td></tr><tr><td> Antifade uzatmak </td><td> Invitrogen </td><td> P7481 </td><td></td></tr></tbody></table>

soğuk önkoşullamanın nöro-Çalışması için stratejiler

Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

Nörolojik yaralanma yönetmek için kolay ve güvenli önkoşullamanın tedavileri etkin gelişimi azaltılabilir genel anestezi ve cerrahi işlemler morbidite ve mortalite sık görülen nedeni. Biz yaralanma başlamasından önce beyni korumak için terapötikler geliştirilmesi için yeni hedefler belirlemeye gelir gibi soğuk önkoşullamanın sorumlu sinir bağışıklık sinyal tanımlamak için arıyorlar. Zamanla değişen sinyal düşük düzey pro-inflamatuar arabulucu soğuk önkoşullamanın nöro için çok önemlidir. Bu sinyalizasyon irritatif uyaranlara belirginleşmeye koruması için uyaranlara uyum için yeterli zaman bir eşik büyüklüğü ulaşmak gerektirir fizyolojik klima hormesis temel ilkelerinin tutarlı. Buna göre, soğuk önkoşullamanın nöro yer bağışıklık sinyal tarif biyolojik sistemleri ve deneysel manipülasyonlar artı teknik kapasitelerinin son derece tekrarlanabilir ve hassas olduğunu gerektirir. Bizim yaklaşımımız, yakından ve in vivo meslektaşları, olgun ve latent macroglia / mikroglia etkilenmiştir çok-sinaptik sinir ağları ile yansıtır in vitro model olarak hipokampal dilim kültürleri kullanmaktır. Femtomolar aralığı ameliyat sitokinlerin ana kaynağı, glial bu yana devlet mikroglia için özellikle önemlidir. Ayrıca, dilim kültürleri, in vitro birkaç hafta korunabilir, aktive edici uyaranlara uyandırmak ve adaptif yanıtları değerlendirmek için yeterli zaman . Son olarak, çevre koşulları doğru, bu sitokin sinyal böylece dilim kültürleri kullanılarak kontrol edilebilir soğuk önkoşullamanın, ölçülen taklit ve kritik bir düğüm yönlerini incelemek için modüle edilebilir. Sitokin sinyalizasyon sistemi analizleri, hassas ve tekrarlanabilir çoğullanır tekniklerin kullanılmasını gerektirir. Biz doku geniş sitokin değişiklikleri değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı qPCR dizi tarama takip mikrogliyal aktivasyonu için ekran TNF-α için kantitatif PCR. Ikincisi, değişiklikleri eşzamanlı olarak sinyalizasyon birden fazla sitokin sistemi ölçmek için en hassas ve tekrarlanabilir bir araçtır. Önemli değişiklikler hedef qPCR ve protein tayini ile teyit edilir. Biz LUMINEX teknoloji kullanarak çoğullanır Microsphere akış sitometri testleri kullanılarak doku tabanlı sitokin protein değişiklikleri için prob. Hücre-spesifik sitokin üretimi çift etiket immünohistokimya ile belirlenir. Birlikte ele alındığında, önerilen soruşturma stratejileri ile birleştiğinde bu beyin dokusu hazırlama ve kullanım tarzı, soğuk önkoşullamanın avantajları taklit ederek yenilikçi tedavilerin geliştirilmesi için potansiyel hedefler belirlenmesi için en uygun yaklaşım olabilir.

Biz yaralanma başlamasından önce beyni korumak için terapötikler geliştirilmesi için yeni hedefler belirlemeye gelir gibi soğuk önkoşullamanın sorumlu sinir bağışıklık sinyal tanımlamak için arıyorlar. Biz, bu tür çalışma gerektiren, biyolojik sistemler, deneysel manipülasyonlar artı teknik kapasiteleri yüksek tekrarlanabilir ve hassas için stratejiler sunuyoruz.

Soğuk önkoşullamanın nöro-Çalışması için Stratejiler

Nörolojik hasar, genel anestezi ve ilgili cerrahi prosedürlerden kaynaklanan morbidite ve mortalitenin yaygın bir nedenidir ve ... ile hafifletilebilir.

Nörolojik hasar, genel anestezi kaynaklı morbidite ve mortalitenin sık görülen bir nedenidir. Bu videoda sunulan çalışmanın amacı, beyni hasar başlangıcından önce korumaya yönelik yeni terapötik hedefler belirlemek amacıyla, soğuk ön koşullamanın sıçan nöral bağışıklık sinyallemesi üzerindeki etkisini incelemektir. Bu, sağlıklı ve uzun ömürlü yetişkin sıçan hipokampal kesit kültürleri üretilerek gerçekleştirilmektedir.İmmün temelli nöroproteksiyonu indüklemek için kültürler soğuk ön koşullandırmaya maruz bırakılır. Ardından anci toksini eklenir ve dilim kültürleri görüntülenir. Görüntü analizi, soğuk ön koşullandırmanın seçici nöronal kayıp düzeyinde dramatik bir azalmaya yol açtığını göstermektedir.Benim adım Richard Craig, yanımda ise Heidi Mitchell var. Chicago Üniversitesi Nöroloji Bölümü'ndeyiz ve bugün, beyni beyin hastalıklarına karşı daha dirençli hale getirmenin bir yolu olarak, düşük seviyeli pro-enflamatuar immün sinyallemeyi içeren nöroproteksiyon hakkındaki soruları yanıtlamak için dilim kültürü hazırlığının nasıl kullanılabileceğini size anlatacağız. Genel olarak konuşmak gerekirse, bu prosedürde yeni olan kişiler, düşük seviyeli pro-enflamatuar sinyallemeyi gösterebilen sağlıklı kültürlerin ve uzun süreli canlılığın sağlanması gerekliliği nedeniyle zorluk yaşamaktadırlar.Heidi şimdi, beyin için nöroprotektanlar üretmek amacıyla düşük seviyeli pro-inflamatuar sinyalizasyonun ölçülmesini sağlamak için laboratuvarda kullandığımız bir dizi prosedürü size gösterecek. Aşağıdaki deneyler, temiz bir laboratuvar önlüğü ve önlük kollarının üzerine geçirilmiş steril eldivenler giyilerek gerçekleştirilmelidir. İşleme, mcil wane doku kıyıcı ve ilgili Teflon ekler, bir jilet, cerrahi aletler ve diseksiyon petri kapları dahil olmak üzere prosedür için gerekli tüm malzemelerin BSL 1 laminer akışlı kabine yerleştirilmesiyle başlayın.Çeker ocak, deneylere başlanmadan en az 30 dakika öncele kendinden bağımsız ultraviyole ışıklı hava temizleme fanları ile havası temizlenmiş, HIPAA filtreli pozitif basınçlı bir kültür odasında bulunmalıdır. Çeker ocağın içerisine bir diseksiyon soğutma plakası yerleştirin ve bunu hücre kültürü çeker ocağındaki yakın bir su banyosuna bağlayın. Altı kuyuklu bir plakanın her bir kuyuğuna bir milli-cell insert yerleştirin ve her birine 1,1 mililitre kültür ortamı ekleyin.Tepsiyi 36 °C, %5 karbondioksit ve %95 nem koşullarına sahip bir inkübatöre en az 20 dakika boyunca yerleştirin. Sıçan yavrularını, ihtiyaç duyulana kadar bir ısıtıcı lambanın altında tutarak sıcak tutun. Yavruyu %100 karbondioksit içine yerleştirerek anestezi uygulayın. Anestezinin ardından yavruyu %100 etanola batırın, ardından kafasını kesin ve gövdeyi bir 100 mm'lik Petri kabına, kafayı ise başka birine yerleştirin.Ardından, orta hat boyunca bir insizyon ve ardından gözlerin arkasında sağa ve sola doğru iki lateral kesi yaparak kafatasını açmak için Kavisli iris makaslarını kullanın. Üstteki kafatasını sıyırmak için açılı pensler ve beyni kaşıklamaya başlamak için bir spatula kullanın. Trigeminal sinirleri spatula ile keserek beyni çıkarın ve beyni, glikoz ile desteklenmiş 10 mililitre steril soğuk gaz dengeli tuz çözeltisi içeren 60 milimetrelik bir Petri kabının alt yarısına yerleştirin.Ardından, her bir hemisferden hipokampusları çıkarmak için 2 numaralı iris spatula altında 5 numaralı IOx pens kullanın ve bunları McIlwain doğrayıcı için bir Teflon diske yerleştirin. Spatulayı kullanarak, kesit kalınlığı 350 ila 400 mikrometreye ayarlanmış doğrayıcı ile besiyerini beyin dokusundan uzaklaştırın. Hipokampusları, uzun eksenlerine dik olacak şekilde 1 mililitrelik perpet ile hızlıca kesin.Taze kesilmiş dilimleri Teflon eklerden yıkayarak soğuk gaze BSS içeren 60 milimetrelik bir Petri kabının üst yarısına aktarın. Dilimleri bir stereo mikroskop altına yerleştirin ve inceleyin. Dentatus girusu ve parametal hücre tabakası sağlam olan dilimleri belirleyin.Ardından, en büyük üç dilimi bir insert üzerine nazikçe yerleştirerek pop başına toplam 12 dilim hazırlayın. Insertleri altı kuyucuklu bir tepsiye yerleştirin ve her üç ila dört günde bir 36 °C'de inkübe edin. Eski besiyerini taze ve sıcak besiyeri ile değiştirerek büyüme ortamını yenileyin.Yedi gün sonra hücreleri 36 °C'lik inkübatöre geri yerleştirin. Besiyerini 1,1 mL serumsuz takviyeli neuro Basal besiyeri ile değiştirin. 18. günde, dilim kültürlerinin canlılığını inceleyin.Altı kuyucuklu kültür plaklarının her birine 1,1 mL ox poel koyarak başlayın. Plağı, 36 °C'ye kadar ısınması için inkübatöre yerleştirin. Bu sırada, mikroskop için fitzy filtreli floresan ışık kaynağını açın ve en az 20 dakika boyunca ısınmasını bekleyin.Bu, ışık yoğunluğunun tekdüze olmasını sağlayacaktır. Ardından, dilim kültürü insertlerini 10 dakika boyunca inox medyasına yerleştirmek için pens kullanın. Daha sonra bunları tekrar SIM içermeyen medyuma geri aktarın.Kültür insertini mikroskop tablasına yerleştirin ve geri dönüşümsüz parametal tabaka hasarını taramak için yönünü işaretleyin. Kültürleri, kesitler ön taramada kullanılanla benzer bir yönde tutularak, ters mikroskobun aseptik yüzeyine 5x büyütme altında yerleştirin.FIT CX sitasyon emisyon küpüne geçin. Soğuk ön koşullandırma için ca bir alanında 30'dan az cytx pozitif hücresi olan kültürleri seçin. Altı kuyucuklu bir kültür plağına 1,1 milliliters serumsuz ortam koyun ve ortamın dengelenmesi için plağı %5 carbon dioxide ve %95 nem içeren 30 degree bir inkübatöre en az 20 dakika yerleştirin; 20 dakika geçtikten sonra işleme devam edin.Dengeleme ortamını inkübatörden çıkarın. Kültür insertlerini, içindeki kesitlerle birlikte normal serumsuz ortamdan 30 derece ortamına aktarın. Ardından, inkübasyon sonrası 90 dakika boyunca 30 derecelik inkübatöre yerleştirin.Kesit kültürlerini normal serumsuz ortama geri aktarın ve 36 °C'de 24 saat boyunca inkübe edin. Kültür insertlerini 20 dakika boyunca sit medyasına transfer ederek, kesit kültürlerinin deneysel kullanımı için ön taramaya başlayın. Kesitler inkübe olurken, ultraviyole lambayı ve bir CCD kamerayı açın ve 20 dakika boyunca ısınmalarını bekleyin.Gerektiğinde, CCD'yi temizlemek için yazılımı kullanarak 50 döngü boyunca ışığa maruz bırakın. Ardından, 90 µL PBS içinde 10 µL florescein içeren çözeltiyi 100 µm derinliğinde bir hemositometreye pipetleyin ve cihazı mikroskop tablasına yerleştirin. Yazılımı kullanarak, dinamik aralık 4.096 üzerinden 1000 olacak şekilde pozlama süresini ayarlayın.Ardından, soğuk ön koşullandırmaya tabi tutulmuş dilim kültürlerinin bulunduğu kabı mikroskoba yerleştirin ve görüntüleri alın. Bu görüntüler, hasarlı dilimlerden yayılan floresan sinyalinden çıkarılacak olan arka plan floresan düzeyini belirlemek için kullanılacaktır. Eğer soğuk ön koşullandırmanın kendisi hasara yol açmışsa, bir sonraki aşamada floresansı artmış hücreler görülecektir.ExoToksik hasarın etkisini incelemek için, insertleri, en az 20 dakika boyunca 36 °C'ye dengelenmiş, 20 ila 50 µM NMDA içeren serumsuz medyuma aktarın. 36 °C'de 60 dakika boyunca inkübe edin; NMDA, inkübasyonun ardından nörotransmitter glutamatın etkilerini taklit eder. Her bir inserti, üç ayrı 60 mm'lik kaba üç kez daldırarak NMDA'yı insertlerden uzaklaştırın.Her biri 36 °C'ye ısıtılmış 10 mililitre nörobazal besiyeri içeren. Her bir 360 milimetrelik yıkama kabı seti için üçten fazla insert kullanmayın. Yıkama işleminden sonra, insertleri taze besiyeri içeren bir tepsiye yerleştirin ve 36 °C'lik inkübatöre geri koyun.24 saat sonra, kamerayı daha önce olduğu gibi bir floresein standardı ile kalibre edin. Ardından, görüntüleme işleminden 20 dakika önce kültürleri OX medyumuna yerleştirin. Yaralanma sonrası birinci günde hasar seviyeleri düşükse, hasarı metamorph yazılımı kullanarak nicelleştirmek için deneyi gerektiği şekilde iki ila üç güne uzatın.Yaralanma için seçilen bir bölgenin yoğunluğunu ölçmek amacıyla CA one bölgesi etrafında bir ilgi alanı tanımlayın. İlgi alanını yaralanma görüntüsünden arka plan görüntüsüne kopyalayıp yapıştırın. Ardından, yaralanma ve arka plan değerlerini istatistiksel yazılım kullanarak excel'e girin.Kontrol ve soğuk ön koşullandırmalı kültürler için pay kısmından arka planı çıkararak nicelik belirleyin; deneysel gruptaki hasarı, her deneysel çalışma ile birlikte mutlaka eklenmesi gereken bir kontrol grubuyla karşılaştırmak için uygun istatistiksel testi uygulayın. Bu görüntü, 21 günlük in vitro kültür sonrası tipik bir olgun hipokampal dilim kültürü boyamasını göstermektedir. Yeşil renkte gösterilen yeni uç etiketleme, temel nöronların sitomimarisini örneklendirmek için kullanılmıştır.Parametal nöronlar hipokampusun ca bir ve ca üç bölgelerinde gösterilmiştir ve burada solda dentat girus veya DG nöronları görülmektedir. Daha yüksek büyütmede gösterilen CA bir bölgesi, dinlenme halindeki mikrogliaların dallanmış yapısını örneklendirmektedir. Olgun dilim kültürleri içerisinde hücreler, mikroglia yüzey belirteci CD 11 B ile işaretlenmiştir. Bu şekil, soğuk ön koşullamanın etkilerini, nöroproteksiyonu ve ölü hücreler için cytx green belirteci ile inkübe edilmiş hipokampal dilim kültürlerini göstermektedir.Soldaki ön tarama görüntüleri burada herhangi bir CA1 hasarının olmadığını göstermektedir. Üstte sham kontrol kültürleri, altta ise soğuk ön koşullu kültürler gösterilmektedir. Orta sıradaki görüntüler, 20 µM NMDA maruziyetinden 24 saat sonraki göreceli dilim kültürü hasarını göstermektedir.Sham kontrol grubundaki hasarın, cp olarak etiketlenen soğuk ön koşullamaya maruz bırakılan kültürlerdekinden daha fazla olduğuna dikkat edin. Göreceli hasar renk kalibrasyon ölçeği sol üstteki görüntüde gösterilmiştir. Geleneksel olarak, kültürler daha sonra, CA1 nöronal hasar seviyelerini ve soğuk ön koşulamanın sham grubuna göre göreceli hasarını (maksimum hasara oran olarak belirtilen hasar oranı) maksimize etmek için 20 µM MDA ile gece boyunca bekletilerek maksimal bir hasar seviyesine maruz bırakılır.Buna rağmen, maksimal yaralanma stimülasyonuna maruz kalmak, ön koşullamanın sağladığı nöroproteksiyonu aşmak için yeterli olmayabilir. Buna bağlı olarak, yaralanma ve maksimal yaralanma oranlarının kullanımı, ön koşullamadan kaynaklanan nöroproteksiyonu doğru şekilde yansıtmayabilir. Bu durum, soğuk ön koşullama maksimal seviyelerinin sham kontrollere göre daha düşük olduğunu gösteren sağ el görüntülerinde belirgindir.Bu çalışmada, hasarın maksimum hasara oranının kullanılmasının soğuk ön koşullamanın sağladığı nöroproteksiyonu maskeleyebileceği saptanmıştır. Bu durum, NMDA maruziyetinden bir gün sonra şam hasarının kırmızı, soğuk ön koşullama sonrası hasarın ise mavi ile gösterildiği şemadan görülebilir; şam kontrolde beş olan hasar seviyesinin, soğuk ön koşullamada üç olduğu belirlenmiştir. Bu sonuç, %40 nöroproteksiyon ile tutarlıdır.Buna karşın, hasarın maksimum hasara oranı gibi geleneksel formatlar kullanıldığında, herhangi bir koruma belirgin değildir. Diğer bir ifadeyle, sham grubu için %50'ye karşı soğuk ön koşullandırma için %50. Burada gösterildiği gibi, mRNA örnekleri kullanılarak kantitatif PCR gerçekleştirilmiştir.Mavi çizgi ile gösterilen soğuk ön koşullandırma sonrası TNF alpha seviyeleri; yeşil, sarı ve mor çizgilerle gösterilen kontrollere göre daha yüksekti. Bu durum, soğuk ön koşullandırmanın beyinde TNF alpha üretimini artırdığını göstermektedir; kantitatif PCR ve kantitatif PCR dizisi sonuçlarını doğrulamak amacıyla immün boyama gerçekleştirilmiştir. Bu dilim kültürü, kırmızı ile gösterilen interlökin 11 ve yeşil ile gösterilen nöronları göstermek üzere işlenmiştir.Oklarla belirtilen bazı parametal nöronların interlökin 11 ve yeni end boyanması gösterdiğine ve sarı renkte olduğuna dikkat edin. Oklar, astrosit olduğu tahmin edilen ve yalnızca artmış interlökin 11 boyanması gösteren birkaç daha küçük hücreyi işaret etmektedir. Soğuk ön koşullama nöroproteksiyonunda yer alan sitokin sinyal sistemi tanımlanırken, temel olarak önemli olan birkaç kavramın not edilmesi önemlidir.Sitozinler normal beyinde son derece düşük konsantrasyonlarda bulunsa da, sitokin konsantrasyonlarındaki küçük değişiklikler gen ekspresyonunu değiştirir. Bu nedenle, düşük konsantrasyonlarda bile sitokinler, beyin yapısını ve işlevini ve dolayısıyla bir organizmanın fenotipini değiştirme konusunda muazzam bir potansiyele sahiptir. Bu kavram burada, bir kedi bıyığı referans noktası olarak alınarak ve sodyum, potasyum, pH ve kalsiyum ile TNF alpha karşılaştırılarak mesafenin tersi ile temsil edilmiştir.Sitokinlerin yüksek düzeyde yedekli ve pleiotropik olduğunu, yani birden fazla sitokinin benzer etkilere sahip olabileceğini ve tek bir sitokinin değişken etkiler gösterebileceğini akılda tutmak da önemlidir. Bu nedenle, soğuk ön koşullamanın nöroproteksiyonuna temel teşkil eden doğuştan gelen sitokin mekanizmasını doğru bir şekilde belirlemek için, ilgili sinyalizasyon değişkenlerinin kompozit analizi yapılmalıdır. Bu işlem, soğuk ön koşulama nöroproteksiyonunun sitokin imzasını belirleyecek olan multipleks assay stratejileri aracılığıyla gerçekleştirilir. Uzmanlaşıldığında, bu kültürler yaklaşık üç saat içinde hazırlanabilir ve çalışma manipülasyonları uygulanabilir.Soğuk ön koşullamanın yanıtı, yaklaşık üç gün boyunca gerçekleştirilebilir; bu prosedürler uygulanırken, işlemler sonrası düşük seviyeli pro-inflamatuar sinyallemeyi tespit etme yeteneğini korumak için steril tekniklerin uygulanmasının ve minimum elleçlemenin gerekli olduğunu unutmamak önemlidir. Soğuk ön koşullamanın beyin üzerindeki besleyici ve koruyucu etkisinin mekanizmalarını çözmek için kültürlere proteomik ve moleküler biyolojik analizler gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

strategies-for-study-of-neuroprotection-from-cold-preconditioning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

Kaynak: Zheng, Y., et al. Serebral iskemiye karşı asidik son koşullandırmanın nöroproteksiyonunu incelemek için deneysel modeller. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, orta serebral arter tıkanıklığının (MCAO) bir fare modelinde iskemik hasara karşı nöroprotektif etkilerini değerlendirmek için asidik son koşullandırma (APC) uygulamasını göstermektedir. MCAO modelinde reperfüzyonda yer alan adımları ve eksitotoksisite, oksidatif stres ve nöronal ölümü azaltmak için reperfüzyon sırasında APC uygulamasını...

 Serebral İskeminin Bir Fare Modelinde Asidik Postkoşullandırmanın Nöroprotektif Etkilerinin Değerlendirilmesi

Kaynak: Poinsatte, K., et al., Farelerde Tekrarlayan Hipoksik Ön Koşullandırma ve Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyonu Sonrası Nörovasküler Korumanın Niceliklendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, iskemik inmeye neden olmadan önce bir fareyi kontrollü hipoksi döngülerine maruz bırakarak tekrarlayan hipoksik ön koşullandırma (RHP) yöntemini göstermektedir. Deney, kan-beyin bariyeri stabilitesi, nöronal adaptasyon ve iltihaplanma üzerindeki etkilerini değerlendirir.

Farelerde Tekrarlayan Hipoksik Ön Koşullandırmaya Nöronal Adaptasyon

Kaynak: Brandli, A. Uzaktan Ekstremite İskemik Ön Koşullandırma: Kemirgenlerde Nöroprotektif Bir Teknik. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, sistemik nöroproteksiyonu indüklemek için sıçanlarda non-invaziv bir ekstremite iskemik ön koşullandırma protokolünü göstermektedir. Prosedür, koruyucu faktörleri serbest bırakan hücresel stres yollarını tetikleyen kontrollü arteriyel oklüzyon ve reperfüzyonu içerir. Bu faktörler beyin ve retina gibi uzak organlarda iskemik ve metabolik yaralanmalara karşı...

Nöroproteksiyon için Bir Sıçan Modelinde Non-İnvaziv Ekstremite İskemik Ön Koşullandırma

Uzaktan iskemik önkoşullama (RIP) zarar strese karşı koşullandırma dokuların bir yöntemdir. Biz 5-10 dakika bir tansiyon aleti manşet şişirilerek, arka bacak uzaktan iskemi bir yöntem kurduk. RIP nöroprotektif yetenekleri kemirgenlerde retina dejenerasyonu modelinde gösterilmiştir.

Uzaktan Ekstremite İskemik Önkoşullanma: Kemirgenler Bir Nöroprotektiftir Tekniği

Bu protokol, farelerde geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben enfarktüs hacimlerini ve kan-beyin bariyeri bozulmasını azaltan tekrarlayan hipoksik ön koşullandırmayı veya sistemik hipoksiye kısa süreli maruziyetleri tanımlar. Ayrıca, nörovasküler korumanın etkinliğini değerlendirmek için inme sonrası enfarktüs hacminin ve kan-beyin bariyeri bozulmasının ikili miktar tayinini detaylandırır.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

distal orta serebral arter dalı (MCAO) Cerrahi tıkanması, deneysel inme araştırmalarında sıkça kullanılan bir modeldir. Bu el yazması farelerde boyuna intravital mikroskopi için bir fırsat sunuyor yanal kafatası pencere takılması, birlikte kalıcı MCAO temel tekniğini açıklar.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Asitik sonrası kondisyonlama serebral işemiye karşı korur. Burada, APC'yi yürütmek için iki model sunuyoruz. Bu in vitro olarak oksijen glikoz yoksunluğu sonra asidik tampon Kortikostriatal dilimleri aktarılarak ve in vivo olarak orta serebral arter oklüzyonundan sonra% 20 CO2 solunması ile sırasıyla gerçekleştirilir.

Serebral İskemiye Karşı Asitik Sonrası Sonrasyonun Sinir Korumasını Çalıştırmak için Deney Modelleri

Doğal ortamlarda ekstremitelerin dikkatli koordinasyon gerektiren karmaşık hareket parietal korteks bölgelerinde içerir. Aşağıdaki iletişim kuralı parietal bölgede 5 bellek destekli engel kaçınma içinde yürüyen kedi rolünü göstermek için ters çevrilebilir soğutma kaynaklı devre dışı bırakmayı açıklar.

Kortikal katkıları engel bellek yürüyen kedi içinde çalışmaya geri dönüşümlü soğutma kaynaklı deaktivasyon

Farklı hipotermi derecelerinin miyokard koruması üzerindeki belirgin etkileri ayrıntılı olarak değerlendirilmemiştir. Bu çalışmanın amacı, insan kardiyomiyosit tabanlı bir modelde farklı hipotermi tedavilerinin ardından hücre ölüm seviyelerini ölçmek ve gelecekteki derinlemesine moleküler araştırmaların temelini atmaktı.

İnsan Kardiyak Miyosit Modelinde Hipotermi-Önkoşullama Sonrası Miyokard Korumasının İn vitro Değerlendirmesi

Bu makalede, sıçanlarda tüm vücut kısa süreli hipotermi indüksiyonunun iki yöntemi açıklanmaktadır. İlk, hızlı indüksiyon yöntemi, sıcaklıkta hızlı bir düşüş için fanlar ve etanol spreyi kullanarak aktif soğutmayı istihdam eder. İkinci yöntem kademeli bir soğutma yöntemidir. Bu, izofluran anestezisinin kombinasyonu ve homeotermik ısı paspasındaki sıcaklık ayarlarının azaltılması kullanılarak elde edilir. Bu, herhangi bir harici soğutma cihazı kullanmadan çekirdek vücut sıcaklığında kademeli bir...

Klinik Alaka düzey ve Mekanizmaları inceleyen Çalışmalar için Modeller Kullanan Sıçanlarda Kısa Süreli Hipotermi İndüksiyonu

Öğrenin soğuk önkoşullamanın nöroproteksiyon mekanizmalarını sıçan hipokampal dilim kültürleri kullanarak. TNF-α ve interlökin 11 sinyalini ölçmek için qPCR ve immünohistokimya yöntemleri uygulanır.

Soğuk önkoşullamanın nöro-Çalışması için Stratejiler

Daha fazla video keşfet