Name: Kornea Konfokal Mikroskop: Periferik Nöropatiler Küçük Fiber Patoloji belirlememize • Bir Roman Non-invaziv Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-03T17:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Öğrenin kornea konfokal mikroskopi ile periferik nöropatilerde küçük sinir lifi hasarını non-invaziv olarak nicelendirmeyi. Bu yöntem erken tanı ve hastalık şiddetinin belirlenmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Juvenil Diyabet Araştırma Vakfı (hibe 17-2008-1031) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (hibe 1R01DK077903-01A1) tarafından desteklenmiştir.

Giriş: Periferik nöropati doğru kantifikasyon riskli hastalarda, tanımlamak bozulma tahmin, ve yeni tedavilerin değerlendirilmesi önemlidir. Alışılmış yöntemler, nörolojik defisit ve elektrofizyoloji değerlendirmek ve kantitatif duyusal test nöropati tespit etmek için fonksiyonel değişiklikler rakamlarla. Ancak, ilk hasar küçük lifler ve henüz bu testler öncelikle büyük fiber disfonksiyonu değerlendirmek ve yenilenme ve onarım göstermek için sınırlı bir yeteneği var gibi görünüyor. Miyelinsiz sinir lifi hasarı ve onarım doğrudan incelenmesine olanak sadece teknikleri, elektron mikroskobu ve deri punch biyopsi ile sural sinir biyopsisi. Ancak, her iki invaziv girişimler ve uzun laboratuar prosedürleri ve bir hayli uzmanlık gerektirir. Kornea mikroskopisi kornea sinir lifleri in vivo görüntüleme sağlar, non-invaziv klinik bir tekniktir . HRT III-Rostock Kornea Modülü (RCM) Çalışma El Kitabı 1. Kamera hazırlanması HRT kullanan sınavında ilk adım objektif lens ucu hazırlanması. <ol><li> İlk lazer tarama kameranın objektif tüpü, 12 diyoptriye kırılma ve sonra kamerayı en düşük konuma ayarlayın. </li><li> Büyük bir homojen, kabarcık, lens ucunda Viscotears ölçekli bezelye damla uygulayın. </li><li> Steril kapta bir TomoCap çıkarın ve objektif lens ve kapak arasında bir menisküs jel formları böyle lens ucu üzerine monte. Kadar tutucu üzerinde mümkün olduğu kadar itin. Montaj sırasında TomoCap ön yüzeyi dokunmamaya dikkatli olun. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 TomoCap uygulanması viscotear jel (alt) uygulayarak objektif lens ucu (üst) hazırlanması. </li><li> Kadar geriye mümkün lazer tarama kamera kamera monte taşıyın. </li><li> TomoCap iç ve dış yüzeyi, parlak bir lazer yansıması olarak görünür. Odak düzlemli ayar çarkı, parlak bir yansıması objektif kapağının ön içinde odaklı olduğunu belirten görülünceye kadar ayarlanabilir olmalıdır. Odak pozisyon ekranda gösterilen derinliği değeri -150 mikron ve 150 mikron arasında olmalıdır. </li><li> Sıfır derinlik ayarını sıfırlayın. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 odak düzlemli ayarlanması. </li></ol> 2. Hasta hazırlanması Konusu gözünde bir damla% 0.4 benoxinate hidroklorür kullanarak anestezi ve Viscotears yağlanması için göz önünde kullanılır. Konu çene ile çene geri kalanında rahat oturan ve kendi alnına alnına çubuğu sıkıca basın istedi. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Hastanın hazırlanması 3. Kamera hizalama Hasta muayene olmak değil, göz ile dış fiksasyon ışığı düzeltmek için talimat eğer muayene kolaylaştırır. Mikroskop baş mesafe hedefleri kullanımını sağlayan kompakt boyutu, konu kontralateral göz gizlenmiş olmadığı anlamına gelir. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 Objektif lens kornea modülü. <ol><li> Optik eksen lazer tarama kamera optik eksene dik çalıştığı CCD kamera yerleştirin. Hastanın sağ tarafında kamera görüntüleme sağ göz ve tersi olmalıdır. Bu pozisyonda, CCD kamera ile canlı görüntü merkezinde TomoCap ön yüzeyi göreceksiniz. </li><li> TomoCap kadar hastanın kornea TomoCap 5 ila 10 mm bir mesafe olan kadar hastanın doğru lazer tarama kamera hareket ettirin, sonra yukarı / aşağı lazer tarama kamera hareket ve sol / sağ kamera monte siyah düğmeleri kullanarak hastanın kornea merkezinde konumlandırılmış. Bu aşamada kırmızı lazer ışığı kornea merkezinde olup olmadığını kontrol edin ve ince ayarı için, CCD kamera görüntüsü görünür kornea, lazer ışını yansıması gözlemlemek. Bu yansıma korneanın ön kutbu tam olarak gerçekleşmesi gerekir. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5, santral kornea görüntü yakalamak için kornea ön kutupta lazer ışını uyumu . </li><li> Mümkün olduğunca geniş onun / onun gözü açmak için hasta isteyin. Hasta TomoCap temas edinceye kadar hastanın kornea lazer tarama kamera yavaş yavaş ileri doğru hareket ettirin. Gerekiyorsalazer tarama kamera pozisyonunu düzeltmek için, daha sonra sonra kornea daha ileriye taşımak, düzeltme yapmak uzakta, hastanın ilk kamera taşımak. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6 TomoCap ve kornea arasındaki ince jel köprü gösterilmesi. </li><li> Kamera ve kornea arasındaki minimal temas yeterlidir. Optimal bir ayar TomoCap ve kornea arasında ince bir jel köprü CCD kamera ile canlı görüntü görünür. </li></ol> Kameraya çok yakın kornea TomoCap basın veya taşırsanız sonra CCD kamera ile canlı görüntü ile korneada basık bir görünüm ile kornea üzerinde baskı göreceksiniz. Ayrıca bu nedenle kornea için çok fazla baskı uygulamayın, basınç görünür gösteren bir çizgi görüntüler elde etti. Bir kez temas kuruldu, headrestto TomoCap kornea sürgülü önlemek pozisyon hareket etmez. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig7.jpg" alt="Şekil 7" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7 (sol) TomoCap kornea üzerinde aşırı basınç uygulanması nedeniyle bir straie görünümü (sağda) bir görüntü aşırı baskısı olmadan normal bir görünüme sahip . 4. Hasta incelenmesi Görüş alanı seçildikten sonra, HRT III lazer kameraya döndü ve görüntü alımı pencere ekranda görüntülenir. Hastanın kornea TomoCap ve lazer ışık konumuna CCD görüntü kullanın. Seçilen modu kullanarak Sınav sonra başlamış olabilir. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig8.jpg" alt="Şekil 8" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 8"> Şekil 8 görüntülerin elde edilmesi sırasında monitör modu görüntüleniyor. Satın alma modu Bölüm modunda, tek bir görüntü ayak düğmesine basın her zaman kazanılmış ve saklanır. Biz, Bowman tabakası, korneanın merkezi de dahil olmak üzere tüm kornea tabakası görüntüleri yakalamak için bu modu kullanın. Ve sonra yeterli sayıda görüntü ele geçirdikten sonra, bir sıra ve hacim de dahil olmak üzere diğer modlar deneyebilirsiniz. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig9.jpg" alt="Şekil 9" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 9"> Şekil 9, farklı görüntü alımı modları için seçimi ile görüntüler . Sıra tarama ile, bir ayarlanabilir bir kare hızı ile 100 adete kadar görüntü bir dizi elde edebilirsiniz. 30 kare arasında bir kare hızı ve saniyede 1 kare (fps) ve 3 ila 100 saniye arasında bir süre ile bir film elde etmek için bu modu dayalı seçebilirsiniz. Hacim tarama modu, kamera, otomatik olarak ardışık odak düzlemleri 40 fotoğraf bir dizi satın aldı. 85 mikron toplam derinliği yaklaşık 2.1 mikron olacaktır "FOV 400 mikron" alanına lens ve iki ardışık görüntüler arasında odak uzaklığı ile taranabilir. Birkaç taradıktan sonra lensin odak düzlemi, kornea epitel hücre tabakası odak noktası haline getiren ve ardından derinlik değeri 0 olarak ayarlamak için Reset butonu tıklayarak yüzeye göreli bir kornea hücre tabakasının derinliğini ölçmek için değiştirilebilir. Bugünkü çalışmanın amacı, farklı derinliklerde merkezi kornea görüntüler elde. Bu nedenle kornea çevresinde yatay veya dikey tarama lazer kamera hareket yok, biz sadece ileriye ve geriye doğru hareket ve Bowman tabakasının aynı kornea noktada tüm derinliklerinden görüntüleri yakalayabilir. Her görüntü arasındaki mesafe yaklaşık 1 mikron, bu nedenle, Bowman derinliği 10 mm ise 10 görüntü olacak. Ancak son tahlilde, biz, aralarında yaklaşık olarak 2-3 mikron bir mesafe görüntüleri seçin. Incelenmesinden sonra satın penceresinde kamera güç düğmesine tıklayarak kamerayı kapatmak tamamlandı. Lokal anestezi kapalı yıpranmış kadar o onun gözleri ovmak gerektiğini hasta farkında olun. Bir önlem olarak, muayene sonrası hastanın kornea bir yarık lamba muayene isteyebilir. TomoCap kameradan çıkarın ve elden ve daha sonra mikroskop lensi temiz bir pamuklu çubukla distile su ile temizleyin. 5. Sınav Analizi a. Çerçeveler seçme Mevcut sınavlar incelemek ve analiz için uygun hasta Kayıt (lar) veritabanı penceresinde seçilmiş olması gerekir. Görüntü izleme penceresi, seçilmiş hasta için mevcut kornea sınavların genel bir bakış sağlar. Sınavlar, farklı günlerde yapılan ayrı ziyareti sekmelerde saklanır. Üç farklı tarama türleri Hei görüntü izleme penceresi HRT III kornea ziyaret sekmesinde üç farklı simgeler tarafından temsil edilirdelberg Göz Explorer. Kornea görüntü anket için, uygun resim simgesine çift tıklayın ve "Göster" fonksiyonu aşağıdaki pencere açılır: <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig10.jpg" alt="Şekil 10" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 10"> Şekil 10 inceleme sonrasında tüm çekilen görüntülerin görüntüleyin. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig11.jpg" alt="Şekil 11" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 11"> Şekil 11: Seçilen görüntünün doğru uyum göstermek için göz CCD kamera görüntüsü ile ihracat öncesi Ekran . Daha fazla analiz için uygun bir görüntü vermek için, araç çubuğundaki "Export" tıklatın ve sonra görüntüleri kaydetmek istediğiniz klasörü seçin. Biz almak ve her hasta için korneanın tüm katmanları görüntüleri yakalayabilir, ancak bu araştırmanın ana odak noktası olarak Bowman tabakası ve kornea sinirleri, bu katmanı sadece görüntüleri analiz edilecektir. Biz her konu için farklı derinliklerde korneanın Bowman tabakası 5-6 kare seçin. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig12.jpg" alt="Şekil 12" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 12"> Şekil 12 Ekran sağlıklı bir konu tüm kornea tabakaları. Bowman tabakası kornea merkezinde farklı derinliklerde ortalama 5-6 kare nicel ölçümler ve analizler için rastgele seçilmiştir. b. Görüntüleri Analizi HRT III merkezi korneanın Bowman katman yakalanan görüntüleri analiz etmek için, biz "CCM Görüntü Analiz Araçları v 0.6" adlı grup içinde geliştirilen özel yazılım kullanın. Korneal sinirler için dört ana parametreler bu yazılım ile ölçülür: <ul><li> Sinir lifi yoğunluğu (NFD) ana sinirler / kare sayısı olarak tanımlanır. </li><li> Ana dalları / çerçeve Sinir şube yoğunluğu (NBD) numarası. </li><li> Sinir lif uzunluğu (NFL) tüm sinirler / kare toplam uzunluğu olan. </li><li> Ana sinirler / çerçeve sinir lifi kıvrımlarında (NFT). </li></ul> CCM görüntüyü açmak için, dosya&gt; açık. <ul><li> Görüntü yüklendikten sonra, Denetim Masası'ndaki sol üst tarafında Görüntü Bilgi Kutusu, boyutu ve türü görüntülenir. </li><li> Varsayılan ölçekli görüntü Bilgi düzenleme doğrultusunda görüntülenir. Ölçek farklı ise, düzenleme hat numarasını değiştirmek. </li><li> Görüntü analiz başlatmak için kontrol panelinin sağ üst tarafta Metrik Kutusu ölçmek için istediğiniz parametreyi seçin. </li><li> Sayfa sayısı NFD altındaki sonuç kutusuna UHY kıvrımlarında katsayısı (TC) mm ve kıvrımlarında gerçek sayı, NFL sunulmaktadır. </li><li> Ancak sonuçları bir excel sayfasına verdikten sonra, sonuçlar NFD ve UHY ve mm / mm 2 NFL için hayır / mm 2 olacak. </li><li> Bu amaçla ölçümleri Ekle ölçümleri tıklayın bitirdikten sonra, daha sonra Dosya&gt; Excel ile kaydedilen sonuçları açın Save as. </li></ul><img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig13.jpg" alt="Şekil 13" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 13"> Şekil 13 kornea sinir görüntü analiz aracı kullanarak "CCM Görüntü Analiz Aracı" izleme Ekran. 6. Temsilcisi Sonuçlar: Biz göstermiştir ilerleyici bir kornea sinir dejenerasyonu diyabetik nöropati 1 ve diyabetik hastalarda pankreas nakli 3 nöropatik şiddeti ve onarım tabakalaşma ile birlikte 2 cilt biyopsilerinde intraepidermal sinir lifleri kaybı önce diyabetin erken sinir hasarı artan şiddeti ile artmaktadır. Ayrıca sinir hasarı idiyopatik küçük lif nöropatisi 4 ve Fabry hastalığı 5 göstermiştir. <img src="/files/ftp_upload/2194/2194fig14.jpg" alt="Şekil 14" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 14"> Şekil 14 kornea Bowman tabakasının HRT III (b) Hasta nöropati ve şiddetli sinir hasarı ile karşılaştırıldığında (a) Kontrol konu ile kornea konfokal mikroskobu görüntüleri.

<ol><li>Abbott, C. A., Kallinikos, P., Marshall, A., Finnigan, J., Morgan, P., Efron, N., Boulton, A. J. M., Malik, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Confocal+Microscopy%3A+A+Novel+Non-invasive+Test+to+Diagnose+and+Assess+Progression+of+Human+Diabetic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Corneal Confocal Microscopy: A Novel Non-invasive Test to Diagnose and Assess Progression of Human Diabetic Neuropathy.</a> Diabetes Care. 33, 1792-1797 (2010).</li>
<li>Quattrini, C., Tavakoli, M., Jeziorska, M., Kallinikos, P., Tesfaye, S., Marshall, A., Finnigan, J., Boulton, A. J. M., Efron, N., Malik, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+Markers+of+Small+Fiber+Damage+in+Human+Diabetic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Surrogate Markers of Small Fiber Damage in Human Diabetic Neuropathy.</a> Diabetes. 56, 2148-2154 (2007).</li>
<li>Mehra, S., Tavakoli, M., Efron, N., Boulton, A. J. M., Augustine, T., Malik, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Confocal+Microscopy+Detects+Early+Nerve+Regeneration+After+Pancreas+Transplantation+in+Patients+with+Type+1+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Corneal Confocal Microscopy Detects Early Nerve Regeneration After Pancreas Transplantation in Patients with Type 1 Diabetes.</a> Diabetes Care. 30, 2608-2612 (2007).</li>
<li>Tavakoli, M., Marshall, A., Pitceathly, R., Fadavi, H., Gow, D., Roberts, M. E., Efron, N., Boulton, A. J. M., Malik, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+confocal+microscopy%3A+A+novel+means+to+detect+nerve+fibre+damage+in+patients+with+impaired+glucose+tolerance+and+idiopathic+small+fibre+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Corneal confocal microscopy: A novel means to detect nerve fibre damage in patients with impaired glucose tolerance and idiopathic small fibre neuropathy.</a> Experimental Neurology. 223, 245-250 (2010).</li>
<li>Tavakoli, M., Marshall, A., Thompson, L., Kenny, M., Waldek, S., Efron, N., Malik, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+confocal+microscopy%3A+A+novel+technique+to+detect+small-fibre+neuropathy+in+patients+with+Fabry+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Corneal confocal microscopy: A novel technique to detect small-fibre neuropathy in patients with Fabry disease.</a> Muscle & Nerve. 40, 976-984 (2009).</li>
</ol>

Şekil 4 - 6: Heidelberg Engineering izniyle

Kornea konfokal mikroskobu (CCM), erken sinir hasarı tespit ve periferal nöropati, şeker hastalığı, Fabry hastalığı ve idiyopatik küçük elyaf nöropatiler (ISFN) de dahil olmak üzere küçük lif patoloji ölçmek için kullanılan bir non-invaziv klinik bir tekniktir. Bu tekniğin acil klinik etkisi, teşhis, takip ilerlemesi ve değerlendirmek, diyabetik nöropati ve diğer periferik nöropatiler olan hastalarda terapötik yanıt ve hasta sonuçları üzerinde hemen bir etkisi olacak yeteneği açısından büyük bir atılım temsil eder.

<table><tbody><tr><td>HRT III CCM Cihazı - Rostock Kornea Modülü</td><td></td><td></td><td> Heidelberg Engineering</td></tr><tr><td>CCM görüntü analiz yazılımı v0.6 </td><td></td><td></td><td>University of Manchester</td></tr></tbody></table>

kornea konfokal mikroskop: periferik nöropatiler küçük fiber patoloji belirlememize • bir roman non-invaziv tekniği

Corneal Confocal Microscopy: A Novel Non-invasive Technique to Quantify Small Fibre Pathology in Peripheral Neuropathies

Periferik nöropati doğru kantifikasyon riskli hastalarda, tanımlamak bozulma tahmin, ve yeni tedavilerin değerlendirilmesi önemlidir. Alışılmış yöntemler, nörolojik defisit ve elektrofizyoloji değerlendirmek ve kantitatif duyusal test nöropati tespit etmek için fonksiyonel değişiklikler rakamlarla. Ancak, ilk hasar küçük lifler ve henüz bu testler öncelikle büyük fiber disfonksiyonu değerlendirmek ve yenilenme ve onarım göstermek için sınırlı bir yeteneği var gibi görünüyor. Miyelinsiz sinir lifi hasarı ve onarım doğrudan incelenmesine olanak sadece teknikleri, elektron mikroskobu ve deri punch biyopsi ile sural sinir biyopsisi. Ancak, her iki invaziv girişimler ve uzun laboratuar prosedürleri ve bir hayli uzmanlık gerektirir. Kornea mikroskopisi kornea sinir lifleri in vivo görüntüleme sağlar, non-invaziv klinik bir tekniktir . Biz erken sinir hasarı, cilt biyopsilerinde nöropatik şiddeti ve diyabetik hastalarda aşağıdaki pankreas nakli onarım tabakalaşma birlikte intraepidermal sinir liflerinin kaybı öncesinde ortaya koymuştur. Biz de idiyopatik küçük lif nöropatisi ve Fabry hastalığı sinir hasarı göstermiştir.

Kornea mikroskopisi artan nöropatik şiddeti ile hastaların teşhis ve sınıflandırmaktı C lifi hasarı ölçmek için kullanılan olabilir, non-invaziv klinik bir tekniktir.

Kornea Konfokal Mikroskop: Periferik Nöropatiler Küçük Fiber Patoloji belirlememize • Bir Roman Non-invaziv Tekniği

Periferik nöropatinin doğru şekilde nicelleştirilmesi; risk altındaki hastaların belirlenmesi, kötüleşmenin öngörülmesi ve yeni tedavilerin değerlendirilmesi açısından önem taşımaktadır. ...

Bu video, sinir lifi hasarının miktarının belirlenmesine olanak tanıyan korneal konfokal mikroskopi (CCM) invaziv olmayan tekniği kullanılarak korneal C liflerinin görüntülenmesi prosedürünü göstermektedir. İlk olarak, CCM üzerindeki lensin odak düzlemi ayarlanır ve tek kullanımlık kapak takılmadan önce lense visko gözyaşı jeli uygulanır. Ardından göze anestezik damlalar ve visko gözyaşı jeli uygulanır.Ardından, lensin önündeki jel ile hastanın korneası arasında temas sağlamak için kamera ayarlanır. Son olarak, odak düzleminin derinliği ayarlanır ve Bowman tabakasının merkezi kısmındaki kornea sinirlerinin görüntüleri alınır. Kornea sinir liflerindeki morfolojik değişiklikler, nöropatiyi nicelleştirmek için gözlemlenebilir.Bu, aslında daha önce optometri ve oftalmoloji dünyasında kullanılmış olan oldukça yeni bir tekniktir; ancak son sekiz yıl civarında, diyabetik nöropatiyi ve diğer periferik nöropatileri incelemek ve değerlendirmek için bu yöntemi çok etkili bir şekilde kullandık. Bu tekniğin temel avantajı, küçük lif hasarının çok erken bir aşamada nicelleştirilmesine olanak tanıması ve ardından hastalardaki nöropati şiddetini tamamen non-invaziv bir şekilde sınıflandırmayı sağlamasıdır; bunu, nöropati şiddeti açısından nicelleştirilebilen iki dakikalık bir tarama ile çok hızlı bir şekilde gerçekleştirebiliriz ve bu sayede, deri biyopsisi ve sinir biyopsisi gibi çok daha invaziv olan diğer bazı tekniklerin yerini almasını umuyoruz. Genel olarak basit bir teknik gibi görünse de, aslında görüntüyü optimal şekilde yakalamanızı ve ardından görüntüyü nicelleştirmenizi sağlayan belirli adımlar gerektirmektedir.Ve gerçekten, bu tüm süreci bu tekniği kullanmak isteyebilecek diğer herkes için açık ve belirgin hale getirmek istiyoruz. HRT kornea konfokal mikroskobu kullanılarak yapılan incelemedeki ilk adım, lazer tarama kamerasının objektif tüpündeki objektif lens ucunun hazırlanmasıdır. Kırılmayı +12 diyoptre olarak ayarlayın, ardından kamerayı en düşük konuma getirin ve lensi saat yönünün tersine döndürerek kilitleyin.Lens ucuna, büyük, homojen, hava kabarcıksız, P boyutunda bir damla visco tears uygulayın. Bir tomo kapağını steril kabından çıkarın ve, jel objektif lens ile kap arasında bir menisküs oluşturacak şekilde, tutucu üzerinden mümkün olduğunca ileriye, lens ucunun üzerine yerleştirin. Montaj sırasında tomo kapağının ön yüzeyine dokunmamaya dikkat edin.Şimdi, lazer tarama kamerasını kamera braketi üzerinde mümkün olduğunca geriye çekerek tomo kapağının iç ve dış yüzeyini görüntüleyin. Her ikisi de ekran monitöründe parlak bir lazer yansıması olarak görünür. Lensin kapağın ön kısmına odaklandığını belirten parlak bir yansıma gözlemlenene kadar odak düzlemi ayar tekerleğini çevirin.Odak konumu ekranında görünen derinlik değeri şu anda -150 µm ile +150 µm arasında olmalıdır. Derinlik ayarını sıfıra getirin. Şimdi hastanın nasıl hazırlanacağını görelim.Deneklerin gözleri %0,4 atropin hidroklorür damlası ile anestezi edildikten sonra, gözün ön kısmı visco tears ile kayganlaştırılır. Deneği, alnının alın barına sıkıca dayandığından emin olarak, çenesi çene desteğinde rahat bir şekilde konumlandırın. Hastanın dış fiksasyon ışığına odaklanması sağlanarak muayene kolaylaştırılır.İncelenmeyen göz söz konusu olduğunda, mikroskop başlığının kompakt boyutu deneğin karşı tarafındaki gözünün kapanmamasını sağlar. Bu durum, mesafe hedeflerinin kullanılmasına olanak tanır. CCD kamerayı, optik erişimi lazer tarama kamerasının optik erişimine dik olacak şekilde konumlandırın.Sağ göz görüntülenirken kamera hastanın sağ tarafında, sol göz görüntülenirken ise sol tarafında olmalıdır. Bu konumda, tomo kapağının ön yüzeyi CCD kameranın merkezinde görülür. Canlı görüntü.Lazer tarama kamerasını, hastanın korneası tomo başlığından yaklaşık beş ila 10 milimetre uzaklıkta olana kadar hastaya doğru hareket ettirin. Ardından, tomo başlığı hastanın korneasının merkezine yerleşene kadar kamera tutucusundaki dikey ve yatay erişim ayar düğmelerini kullanarak lazer tarama kamerasını yukarı-aşağı ve sağa-sola hareket ettirin. Şimdi hastadan gözlerini mümkün olduğunca geniş açmasını isteyin.Lazer tarama kamerasını, tomo kapağı hastanın korneasına temas edene kadar yavaşça hastaya doğru hareket ettirin. Bu aşamada, kırmızı lazer ışığının korneanın merkezinde olduğunu ve lazer ışınının korneadan yansımasının tam olarak korneanın ön kutbunda gerçekleştiğini kontrol edin. Optimal ayarlamada, lens ile kornea arasında minimum temas bulunur.Tomo kapak ile kornea arasında ince bir jel köprüsü CCD kamera canlı görüntüsünde görünür. Tomo kapak ile kornea arasında çok fazla basınç varsa, CCD kamera üzerinden korneada düzleşmiş bir görünüm oluşur. Canlı görüntü ve sapmalar CCM görüntüsünde belirir.Hastayı ayarladıktan sonra HR üç lazer kamerasını açın; ekran üzerinde görüntüleme penceresi görünecektir. Tomo başlığını ve lazer ışığını hastanın korneası üzerinde konumlandırmak için CCD görüntüsünü kullanın. CCM'de görüntü yakalama için üç seçenek bulunmaktadır.Sıralı tarama, ayarlanabilir bir kare hızıyla 100 adede kadar görüntünün alınmasını sağlar. Saniyede 1 ile 30 arasında bir kare hızı seçilir. Buna bağlı olarak, süresi 3 ile 100 saniye arasında olan bir video kaydedilebilir.Hacim tarama modunda, kamera ardışık odak düzlemlerinde otomatik olarak 40 görüntüden oluşan bir seri alır. Toplam 85 mikrometre derinlik taranabilir ve iki ardışık görüntü arasındaki odak mesafesi yaklaşık 2,1 mikrometredir. Son seçenek, bu deneyde kullanılacak olan kesit modudur.Bu mod, ayak anahtarına her basıldığında elde edilen ve kaydedilen net tekil görüntülerle optimal görüntülemeyi sağlar. Bu mod, korneanın merkezindeki Bowman tabakası da dahil olmak üzere tüm kornea tabakasından görüntü almak için kullanılır. Yeterli sayıda görüntü alındıktan sonra, sekans ve hacim modları da dahil olmak üzere diğer modlar kullanılabilir.Birkaç taramadan sonra, epitel hücre tabakasını odağa getirip ardından derinlik değerini sıfıra ayarlamak için sıfırlama düğmesine tıklayarak, lensin odak düzlemi değiştirilip kornea hücre tabakasının derinliği kornea yüzeyine göre ölçülebilir. İnceleme tamamlandıktan sonra, görüntüleme penceresindeki kamera güç düğmesine tıklayarak kamerayı kapatın. Hastaya, lokal anestezinin etkisi geçene kadar gözlerini ovuşturmaması gerektiğini bildirin.Kameradaki tomo kapağını çıkarıp atın ve ardından mikroskop lensini distile su ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubukla temizleyin. Şimdi, mevcut incelemeleri gözden geçirmek ve analiz etmek için bir görüntünün nasıl analiz edileceğini ve sinir lifi parametrelerinin nasıl nicelleştirileceğini görelim. Öncelikle, veri tabanı penceresinden uygun hasta kaydını seçin.Görüntü görüntüleme penceresi, seçilen hastaya ait mevcut kornea incelemelerinin genel bir görünümünü sunar. Farklı günlerde gerçekleştirilen incelemeler, ayrı ziyaret sekmelerinde saklanır. Üç farklı tarama türü, üç farklı simge ile temsil edilir. Heidelberg Eye Explorer'ın görüntü görüntüleme penceresindeki HRT üç kornea ziyaret sekmesi.Kornea görüntüsünü incelemek için uygun görüntü simgesine çift tıklayın ve ardından daha ileri analizler için ilgili görüntüleri dışa aktarmak amacıyla şimdi göster (show now) butonuna basın, araç çubuğundaki dışa aktar (export) seçeneğine tıklayın ve ardından görüntüleri kaydetmek için klasörü seçin. Bu araştırmanın ana odak noktası Bowman tabakası ve kornea sinirleri olduğu için sadece bu tabakaya ait görüntüler analiz edilecektir. Her denek için korneanın farklı derinliklerinden Bowman tabakasından beş ila altı kare seçilir.Görüntü analizi, grubumuz tarafından geliştirilen CCM Image Analysis Tools adlı yazılımın 0.64 versiyonu ile gerçekleştirilir. Kornea sinirleri için temel parametreler, kare başına düşen ana sinir sayısı olarak tanımlanan sinir lifi yoğunluğu yazılımı ile ölçülür. Sinir dal yoğunluğu ise kare başına düşen toplam ana dal sayısıdır.Sinir lifi uzunluğu, çerçeve sinir lifi başına ana sinirlerin ve ana dalların toplam uzunluğudur. Kıvrımlılık, çerçeve başına ana sinirlerin kıvrımlılığıdır. Bir CCM görüntüsünü açmak için dosya menüsüne gidin ve ardından aç'ı seçin.Görüntü yüklendikten sonra, boyut ve türü kontrol panelinin sol üst köşesindeki görüntü bilgi kutusunda görüntülenir; varsayılan ölçek ise görüntü bilgisinin düzenleme satırında gösterilir. Ölçek farklıysa, düzenleme satırındaki sayıyı değiştirin. Görüntüyü analiz etmeye başlamak için, kontrol panelinin sağ üst köşesindeki metrik kutusundan ölçmek istediğiniz parametreyi seçin.Sayfanın altındaki sonuç kutusunda, NFD ve MBD gerçek bir sayı olarak sunulur. NFL milimetre cinsinden, tortuosity ise bir tortuosity katsayısı olarak sunulur. Sonuçlar bir Excel sayfasına aktarılabilir.Excel sayfasını açtığınızda sonuçlar; NFD için milimetrekare başına sayı, NFL için milimetrekare başına milimetre ve NFT için tortuozite katsayısı şeklinde sunulacaktır. Bu ölçümleri yapmak için önce her bir ana siniri, ardından her bir ana sinir dalını işaretleyerek başlayın. Son olarak, çerçevedeki her bir sinirin üzerinden geçerek iz sürün.Daha yüksek doğruluk için dijital bir kalem kullanılabilir. Bu prosedür uygulanırken teknik doğru şekilde icra edilirse, uzmanlaşıldığında işlem bir dakika içinde tamamlanabilir. Detaylandırılan talimatlara uymak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, kornea konfokal mikroskopi ile korneanın hareket tabakasından nasıl çalışılacağı ve görüntüler alınacağı ile periferik nöropatiye, özellikle de diyabetik nöropatiye sahip hastalarda bu tabakadan alınan görüntülerin nasıl nicelleştirileceği ve analiz edileceği konusunda iyi bir anlayış kazandığınızı umuyoruz. Ayrıca, CCM ile çalışmanın uzmanlık gerektirdiğini ve prosedürün göz muayenesi konusunda eğitim almış profesyoneller tarafından yürütülmesinin önerildiğini unutmayın.

corneal-confocal-microscopy-novel-non-invasive-technique-to-quantify

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Ağrılı nöropatiler (PN) olarak nosiseptif intraepidermal sinir lifleri (IENFs) değişiklikleri incelemek için, doğrudan nosiseptif IENFs gözlenen üç boyutlu morfolojik değişiklikleri incelemek olabilir protokolleri geliştirmiştir. IENFs üç boyutlu analiz PN İESL morfolojik değişiklikleri değerlendirmek için bir potansiyele sahiptir.

İnsan Cilt Biyopsiler içinde Nosiseptif İntraepidermal Sinir Elyaf üç boyutlu görüntüleme

Dinamik boyuna görüntüleme ve muhabiri transgenik farelerin sinir uçlarının selektif lazer lezyon için protokol sunulmuştur.

Cilt Tek Sinir Endings Vivo İki-Foton Mikrokopisi

Nöromüsküler kavşak (NMJ), bazen sinaptik yetmezlikle sonuçlanabilen çeşitli durumlarda değişir. Bu rapor, bu tür yapısal değişiklikleri ölçmek için floresan mikroskobu tabanlı yöntemleri açıklamaktadır.

Nöromusküler Kavşak: Ölçme Synapse Boyut, Konfokal Floresan Mikroskobu kullanılarak sinaptik Protein Yoğunluk Parçalanma ve Değişiklikler

Bu iletişim kuralı görselleştirmek ve sinir özgü mitokondri ölçmek için üç boyutlu (3D) görüntüleme ve çözümleme teknikleri kullanır. Teknikleri bir floresan sinyal başka bir floresan sinyalinden gelen verilerin bir alt kümesini yalıtmak için kullanıldığı diğer durumlar için geçerlidir.

Üç boyutlu görüntüleme ve mitokondri içinde insan Intraepidermal sinir lifleri analizi

Tam alan optik koherens mikroskopisinin kornea donör stromasının yüksek kalitede değerlendirilmesi için bir yöntem olarak kullanımını tanımladık. Bu protokol, sağlık veya hastalığın göstergesi olan özellikleri tanımlamak için kullanılabilir ve donör dokuların taranmasını ve seçimini ve dolayısıyla keratoplasti sonuçlarını iyileştirmeyi amaçlar.

Kornea Greftlerinde Stromal Özelliklerin Histoloji Benzeri Analizi için Tam Alan Optik Koherens Mikroskopisi

Nöromüsküler kavşak bileşenlerini doğru bir şekilde tespit edebilme yeteneği, patolojik veya gelişimsel süreçler nedeniyle mimarisindeki değişikliklerin değerlendirilmesinde çok önemlidir. Burada, nicel ölçümler yapmak için kullanılabilecek tam montajlı nöromüsküler kavşakların yüksek kaliteli görüntülerini elde etmek için basit bir yöntemin tam bir açıklamasını sunuyoruz.

Tüm Mount Nöromüsküler Kavşakların İmmünofluoresan ve Morfometrik Analizleri için Tek İskelet Kas Liflerinin Diseksiyonu

Bu protokol, SMA ve ColQ ile ilişkili CMS'nin fare modellerindeki patolojik değişiklikleri ölçmek için kullanılan kombine konfokal ve STED mikroskopisi ile nöromüsküler kavşakların morfometrik analizi için bir yöntemi açıklamaktadır.

Farelerde Nöromüsküler Kavşakların Kombine Konfokal ve Süper Redüksiyonlu Mikroskopi ile Karakterizasyonu

Kornea duyarlılığı testi, kornea sinirlerinin sağlığı hakkında bilgi sağlar ve oküler yüzey hastalıklarının teşhisine yardımcı olur. Kornea hassasiyetini kalitatif olarak değerlendirmek için göz sağlığı sağlayıcıları tarafından klinik ortamlarda kolayca kullanılabilecek kısa bir protokol sunuyoruz.

Oftalmolojik ve Optometrik Hastalar için Kornea Duyarlılığı Test Prosedürü

Kapillaroskopi, mikrovasküler sistemin doğrudan, ucuz ve non-invaziv görüntülenmesi için erişilebilir bir araçtır. Bu protokolün amacı, araştırmacıların farelerin tırnak yataklarında periferik mikrovasküler morfolojinin görselleştirilmesi için kapillaroskopi kullanmalarını sağlamaktır.

Kapillaroskopi Kullanılarak Farelerde Çivi Yatağı Mikrovasküler Morfolojisinin İnvaziv Olmayan Görüntülenmesi

Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.

İn vivo Kuru Göz Tanı ve Tedavisinde Konfokal Mikroskopi: Görüntüleme Protokolleri ve Yorumlamaya Odaklanma

Öğrenin kornea konfokal mikroskopi ile periferik nöropatilerde küçük sinir lifi hasarını non-invaziv olarak nicelendirmeyi. Bu yöntem erken tanı ve hastalık şiddetinin belirlenmesine yardımcı olur.

Kornea Konfokal Mikroskop: Periferik Nöropatiler Küçük Fiber Patoloji belirlememize • Bir Roman Non-invaziv Tekniği

Daha fazla video keşfet