Name: Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T21:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 25 s
Description: Öğrenin Aedes aegypti sivrisineklerinde dang virüsü enfeksiyon protokolünü ve viral yük tayini yöntemlerini. Bu teknik genetik direnç mekanizmalarını incelemek ve bulaş kontrol stratejileri geliştirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

A. C6/36 hücre hattı virüs yayma. <ol><li> Hücreler 75 cm 2 balonuna confluency% 80 büyüyecek; </li><li> 3-4 ml cam şişe içinde kalan medya çıkarın; </li><li> 0.5 ml stok virüs atın ve yukarıdaki hücre içine, hücre başına 1,5 virüs partikülleri enfeksiyon çokluğu ile ekleyin. 15 dakika boyunca oda sıcaklığında yavaş yavaş balonu çalkalamak. </li><li> % 5 CO 2 ve 37 ° C de 45 dakika inkübe </li><li> 30 ml medya ekleyin ve 5 gün boyunca inkübe edin. </li></ol> B. virüs ve kan karışımı hazırlayın <ol><li> Kazıyıcı ile hücre ayırın ve 50 ml konik tüpler için hücre ve medya aktarımı; </li><li> 10 dakika için 800g Centrifugate; süpernatantı toplamak, ancak hücre pelet süpernatant 1 ml bırakın; </li><li> 37 ° C su banyosu, tekrar 2-3 kez Çözülme sonra kuru CO 2 Yukarıdaki hücre pelletini Dondurma ve; </li><li> Süpernatantı almak ve 3. adımdan itibaren toplanan süpernatant ile birleştirmek, 10 dakika için 800g Centrifugate; </li><li> Plasmodium falciparum ile Anofel sivrisinek enfekte gametocyte kültürü hazırlanması için aynı prosedürü (adım 3) tüm insan kanı toplamak; </li><li> Adım 4 virüs süpernatant ile yukarıdaki bütün insan kanı eşit miktarda birleştirin ve insan serum eklemek (tüm hacminin% 10). </li><li> 37 ° C su banyosunda 30 dakika için, insan kanı ve Dang virüsü yukarıdaki karışımı inkübe </li></ol> C. Besleme sivrisinek Bu prosedür, sivrisinek Plasmodium falciparum enfeksiyonlar için bölümünde tarif edilmiştir ne hemen hemen aynıdır . Biz 7 gün tahlil midgut enfeksiyon, tükürük kan besleme 14 gün sonra enfeksiyon. Virüs ile temas halinde gelen tüm materyaller% 75 etanol ve% 10 çamaşır suyu ile tedavi edilir. D. Testi sivrisinek doku virüs titresi <ol><li> İki ya da üç gün sivrisinek doku diseksiyonu önce, hücre% 80 tahlil yapılır gün confluency ulaşmak gibi bir 24 plaka C6/36 hücre büyümesi; </li><li> Sivrisinekler, 4 anestezi ° C, kurban ve 1 dakika boyunca% 75 etanol onları iliklerine steril su yüzüne çıktı. Sonra sivrisinek diseksiyon mikroskobu altında midgut veya tükürük bezi diseksiyonu önce iki kez steril su ile yıkandı. Bu adım, altındaki tüm prosedürü, steril bir ortamda böyle bir biyolojik güvenlik kabini olarak yürütülmesi gerekmektedir. Bu dokular 150 ul medya içeren bir tüpe aktarılır ve 90 saniye boyunca bir Kontes pelet havaneli motor ile homojenize; </li><li> Homojenat 10 ul 990 ul medya ekleyerek 1:100 dilüsyon olun; </li><li> Daha 1: 10, 96 plaka, orta 1:100 ve 1:1000 dilüsyon; </li><li> 24 plaka medya çıkarın ve buna karşılık gelen her iyi yukarıdaki dört dilüsyonları her 100 ul eklemek; </li><li> Plaka, sonra% 5, 45 dakika boyunca inkübe oda sıcaklığında 15 dakika boyunca yavaş yavaş sallayın CO 2 ve 37 ° C; </li><li> Her iyi methycellulose kaplama (1%) 1 ml ekleyin; </li><li> 37 ° plakaları inkübe ° C, 5 gün için% 5 CO 2 ; </li><li> Burada adımları steril bir ortamda gerek yoktur, ancak her zaman başka bir patojen bakım alınmalıdır. Her plaka methycellulose bindirme atın ve aşırı ortamı çıkarmak için blot </li><li> Her bir kuyu için metanol / aseton fiksatif (1:1) 1 ml ekleyin. 1 saat 4 ° C&#39;de tutun; </li><li> Fiksatif dökün ve 1X PBS ile bir kez yıkayın; </li><li> % 5 dut virüsüne karşı primer antikor 1:1000 dilüsyon olun; </li><li> 1 saat için her 37 inkübe, iyi ° C 200 ul seyreltilmiş hiper-immün sıvı ekleyin; </li><li> 1 X PBS ile hiper-immün sıvı ve yıkama plakası çıkarın </li><li> % 5 fitil (100 ml 1 X PBS 5g toz yağsız süt) keçi anti-fare konjuge 1:1000 dilüsyon (KPL Kedi # 074-1806) hazırlayın ve sonra her bir kuyunun 200 ul ekleyin ve inkübe 1 saat için 37 ° C; </li><li> Substrat aşağıdaki gibi hazırlayın: çözünmüş sonra, 1 X PBS 20 ml 1 tablet (Sigma Kedi # D5905) 3&#39;-diaminobenzidin terrahydrochloride eklemek ve daha sonra% 30 hidrojen peroksidaz 8 ul eklemek </li><li> Her bir kuyunun 200 ul yukarıdaki substrat ekleyin. 10 dakika oda sıcaklığında bekletin. </li><li> Substrat çıkarın ve iyi 1ml distile su ekleyerek reaksiyonu durdurmak </li><li> Kuruması için su ve leke plakaları kapalı dökün </li><li> Virüs parçacık sayımı </li></ol>

<table><tbody><tr><td>İnkübatör</td><td></td><td></td><td></td><td>%5 CO2, 37oC ile</td></tr><tr><td>50 ml konik tüpler</td><td></td><td></td><td></td><td>plastik</td></tr><tr><td>pipet ucu</td><td></td><td></td><td></td><td>doku kültürü için</td></tr><tr><td>pipetman</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetleri</td><td></td><td></td><td></td><td>cam, steril</td></tr><tr><td>su banyosu</td><td></td><td></td><td></td><td>37C</td></tr><tr><td>santrifüj</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>sirkülasyonlu su banyosu</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>cam membran besleyiciler</td><td></td><td></td><td></td><td>besleyicilere uygun kauçuk tüplerle birlikte</td></tr><tr><td>sivrisinek kapları</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>%75 etanol</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>%10 çamaşır suyu</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü plakaları</td><td></td><td></td><td></td><td>6 kuyucuklu, 24 kuyucuklu ve 96 kuyucuklu plakalar</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td></td><td></td><td></td><td>cam</td></tr><tr><td>Lamlar</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ince uçlu pens</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td><td>1X, steril</td></tr><tr><td>diseksiyon mikroskobu</td><td>Mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C6/36 hücreleri</td><td>hücreler</td><td></td><td></td><td>Virüs propagasyonu için</td></tr><tr><td>C6/36 besiyeri</td><td></td><td></td><td></td><td>%10 ısı ile inaktive edilmiş FBS, %1 L-glutamin ve temel olmayan amino asitler ile %1 (h/h) Penisilin-Streptomisin içeren MEM.</td></tr><tr><td>3&amp;rsquo;-Diaminobenzidin tetrahidroklorür</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5905</td><td>20 ml 1 X PBS içinde 1 tablet, çözülür ve ardından 8 &amp;#x03BC;l %30 hidrojen peroksit eklenir</td></tr><tr><td>%30 hidrojen peroksit</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A. aegypti</td><td>Hayvan</td><td></td><td></td><td>sivrisinek</td></tr></tbody></table>

dang enfeksiyonlar sivrisinekler (a. aegypti) ve enfeksiyon fenotip belirlenmesi için protokol

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Bu prosedürün amacı, bir laboratuvar durumu dang virüsü ile enfekte Aedes sivrisinek ve sivrisinek dokularda enfeksiyon ve virüs dinamik incelemek için. Bu protokol rutin özellikle vektör yetkinlik belirlemek mümkün roman ana faktörlerin belirlenmesi, sivrisinek-virüs etkileşimleri çalışmak için kullanılır. Tüm deney bir BSL2 laboratuarda yapılmalıdır. Plasmodium falciparum enfeksiyonları için uygun kıyafetleri, eldiven ve laboratuvar önlüğü dahil olmak üzere her zaman takılmalıdır. Deney sonra, virüs ile temas halinde gelen tüm malzemeler, normal yıkama ile devam etmeden önce% 75 etanol ve ağartılmış tedavi edilmesi gerekir. Tüm diğer malzemeler atarak onları önce otoklava gerekir.

Dang virüsü için potansiyel refrakter olarak bir gen tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde viral enfeksiyonların önlenmesinde rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, dang sivrisinek enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı virüs büyüyor ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol

Bu prosedürün amacı, laboratuvar koşullarında Aedes sivrisineğini dengue virüsü ile enfekte etmek ve ...'nın enfeksiyon düzeyini ve dinamiğini incelemektir.

Ben George Dimopoulos; şimdi size Aedes GTI sivrisineğinin dengue virüsü ile nasıl enfekte edileceğine dair bir prosedür göstereceğiz. İlk yapmamız gereken şey, virüsü bir Aedes albopictus hücre hattında çoğaltmaktır. Benim adım Jose Luis Ramirez ve ous Laboratuvarı'nda doktora öğrencisiyim.Bu prosedür için; doku kültürü önlemli bir kabini ve 37 °C'ye ayarlanmış bir CO2 inkübatörü bulunan BSL 2 seviyesinde bir tesise ihtiyaç duyacağız. 50 ml plastik konik tüplere, insan serumuna, 37 °C'de bir benmariye ve bir santrifüje ihtiyacımız vardır.96 kuyucuklu plakalar ile diğer standart moleküler biyoloji ve biyokimya reaktifleri ve sarf malzemelerine ihtiyacımız var. Burası bir BSL 2 tesisindeki standart bir doku kültürü önlemidir ve ilk adım, 75 santimetrekarelik bir flask içerisinde %80 konfluense ulaşmış hücreleri çıkarmaktır. Bu, %10 ısı ile aktive edilmiş fetal bovine serum, %1 L-glutamin ve temel olmayan amino asitler ile desteklenmiş MEM besiyeridir.Şimdi hücrelere Dengue virüsü ekleyeceğiz. Virüs stokunu -80 °C dondurucudan çıkardık ve 37 °C'lik bir inkübatörde çözdürdük. Hücre başına yaklaşık 1,5 virüs partikülü konsantrasyonu elde etmek için hücrelere yaklaşık 0.5 mL stok virüs ekliyoruz.Ardından hücreler, yaklaşık 15 dakika boyunca düşük bir sallama hızında çalkalayıcıya yerleştirilir. Sonrasında hücreler, yaklaşık 45 dakika boyunca CO2 inkübatörüne konur. Sıcaklık 37 °C, CO2 konsantrasyonu ise %5'tir. 45 dakikalık inkübasyonun ardından hücreler dışarı çıkarılır, 30 ml besiyeri eklenir ve ardından hücreler tekrar inkübatöre yerleştirilerek beş gün daha inkübe edilir.Şimdi enfeksiyon için virüs partiküllerini hazırlayacağız. Öncelikle, hücreleri bir kazıyıcı yardımıyla flasktan ayırmamız ve ardından medya ile birlikte 50 ml'lik konik bir tüpe aktarmamız gerekiyor. Şimdi, hücreleri çöktürmek için 12,000 RPM'de 10 dakika boyunca santrifüj ediyoruz.Bu şişenin dibinde peleti görebilirsiniz. Ardından, virüsün hücrelerden salınmasını sağlamak amacıyla süpernatanı uzaklaştıracağız ve hücrelerle birlikte sadece 1 ml bırakacağız. Bunları donduracağız.Bu işlem hücreleri parçalayacaktır; ardından hücreleri çözeceğiz, tekrar donduracağız ve bu prosedürü üç ila dört kez tekrarlayacağız; dondurma işlemi kuru buz üzerinde gerçekleştirilir. Dondurma işleminden sonra, hücre peleti çözünmesi için 37 °C'lik bir su banyosuna yerleştirilir ve ardından tekrar kuru buz üzerinde dondurulur. Her dondurma adımı arasında, hücreleri vorteksleyerek süspanse ederiz. Şimdi, virüs içeren süpernatantı topluyor ve bunu, yine virüs partikülleri içeren önceki santrifüjden elde edilen süpernatanta ekliyoruz.Bu virüs preparatı artık eşit miktarda tam insan kanı ve serumu ile birleştirilmeye hazırdır. Burada virüs preparatını, %15 insan serumu ile takviye edilmiş tam insan kanı ile birleştirdik. Bu kan-virüs çözeltisi, şimdi sivrisinekleri beslemek ve onları enfekte etmek için kullanılacaktır.Bu kanı bir membran besleyiciye ekleyeceğiz ve bu membran besleyici, sivrisineklerin bulunduğu bir kabın üzerine yerleştirilecek; ardından sivrisineklerin bu kanla yaklaşık 25 dakika boyunca beslenmelerine izin vereceğiz. Membran besleyiciyi sabitlemek için üzerine bir klips yerleştirdik. Bu klips, besleyiciyi temel olarak ağın üzerine bastırarak sabitler; şimdi kanı besleyiciye ekleyeceğiz.Bazı durumlarda, sivrisineklerin doğal olarak sıklıkla karanlıkta beslenmeleri nedeniyle bu deney karanlıkta yapıldığında daha iyi sonuç verebilir. Bu durum elbette sivrisinek kolonisinin nasıl koşullandırıldığına bağlıdır. Sivrisinekler yaklaşık 25 ila 30 dakika boyunca beslenmişlerdir; artık membran besleyiciyi çıkarıp dekontaminasyon için güvenli bir kaba yerleştirebiliriz.Kan beslemesinden sonra, beslenememiş sivrisineklerin beslenenlerden ayrılması gerekir. Bunu yapmak için, kanla beslenen sivrisineklerin bulunduğu küçük kapları beş ila 10 dakika boyunca soğuk odaya koyarak sivrisinekleri etkisiz hale getirdik. Görülebileceği üzere, sivrisinekler soğukta zaten hareketsizleşmiş durumdadır.Kapağı açıyoruz ve sivrisinekleri, sürekli soğuk kalmalarını ve kaçmalarını önlemek için bir buz kovası üzerinde tutulan küçük bir petri kabına aktarıyoruz. Bunların enfekte sivrisinekler olduğunu ve bu nedenle serbest kalmamaları için tüm önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın. Sivrisinekler soğuk odaya alındıktan sonra, onları oda sıcaklığında tutulan normal insektaryuma transfer ediyoruz; ancak sivrisinekleri her zaman buz kovası içinde tutulan petri kabına koyuyoruz, böylece sürekli uyuşuk kalmalarını sağlıyoruz.Beslenen sivrisineklerin, beslenmeyenlerden nasıl ayırt edilebileceğini görebilirsiniz. Beslenenlerin içinde kan vardır. Tamamen şişmişlerdir.Bazıları kısmen kanla beslendiği için tamamen şişmiş değildirler. Karınlarında az miktarda kan bulunur, ancak diğerlerinin karınlarında çok fazla kan vardır. UNFI olanların karınlarında hiç kan yoktur, bu sayede beslenmiş olanlar ile beslenmemiş olanları çok kolay bir şekilde ayırt edebilirsiniz.Şimdi bu sivrisinekleri petri kabından balmumu astarlı karton bardaklara aktaracağız. Bir sonraki adım, sivrisineklerdeki dengue virüsü enfeksiyonunu analiz etmektir. Sivrisineğin orta bağırsağındaki virüs enfeksiyonunu analiz etmek istiyorsak, kan öğününü aldıktan yaklaşık yedi gün sonra sivrisinekleri diseke etmeliyiz.Tükürük bezindeki virüs enfeksiyonunu analiz etmek istiyorsanız, sivrisinekleri kan beslemesinden yaklaşık 14 gün sonra disseke etmelisiniz; Jose şimdi size sivrisinekten bağırsağın nasıl disseke edileceğini gösterecek. Sivrisinekler şu anda buz üzerinde anesteziye alınmıştır ve yaklaşık bir dakika boyunca %70 ethanol içinde inkübasyon yoluyla öldürüleceklerdir. Ardından, sivrisinekleri birbirini izleyen iki su banyosuna aktarırız.Her biri bir dakika. Bu işlem, sivrisineklerdeki etanolü uzaklaştırmak içindir. Şimdi sivrisinekleri mikroskop lamları üzerinde PBS içinde disseke edeceğiz.Bir gyp time sivrisineğinden orta bağırsağı çıkarmanın en iyi yolu, sivrisineği kanatlarının üzerine ters şekilde yerleştirmek, karın kısmını bir pensle, göğüs kısmını ise başka bir pensle tutup sivrisineği çekmektir. Şu anda Jose sivrisineği ikiye ayırıyor ve bağırsak, sivrisineğin karnı ile göğüs kısmı arasında görünecektir. Bağırsak, sivrisineğin üst kısmında belirmiş olan yarı saydam dokudur.Şimdi, diseke edilen bağırsağı bir hücre hattı besiyerine aktaracağız ve virüs partiküllerini bağırsaktan izole etmek için doku kültürü kabinine götüreceğiz. Diseke edilen orta bağırsakları doku kültürü odasına getiriyoruz ve virüs partiküllerini serbest bırakmak için bir havan eliyle homojenize ediyoruz. Orta bağırsak homojenizasyonundan sonra, virüs partiküllerinin 1'e 100 oranında seyrelmesini sağlamak için homogenata besiyeri ekliyoruz.Ardından, bunu 1/10, 1/100 ve 1/1000 oranlarında daha fazla seyreltmeye devam ediyoruz. 96 kuyucuklu plakada, 24 kuyucuklu bir plaka içerisinde %80 konfluens düzeyine ulaşmış Alba picto hücre hattı hazırladık. Daha sonra, hiatus alba picto hücrelerinin süpernatantını uzaklaştırıyoruz ve her bir seyreltmedeki virüs partiküllerinin konsantrasyonunu belirlemek amacıyla bu hücrelere seyreltilmiş virüs partiküllerini ekliyoruz.Bu, virüsün enfeksiyon düzeyini belirlememize olanak sağlayacaktır. Sivrisinek orta bağırsağındaki hücreler, ardından oda sıcaklığında 15 dakika boyunca yavaşça çalkalanır. Sonrasında hücreler, 37 °C'lik CO2 inkübatöründe 45 dakika boyunca bekletilir.Ardından her bir kuyucuğa 1 ml %1 metil selüloz kaplama ekliyoruz ve plaka tekrar 37 °C CO2 inkübatöründe beş gün boyunca inkübe ediliyor. Beş günlük inkübasyonun ardından, her kuyucuğa 1 ml aseton metanol fiksatifi ekliyoruz. Daha sonra plakayı bir buzdolabında 4 °C'de bir saat boyunca inkübe ediyoruz.Ardından, fiksatifi uzaklaştırır ve her kuyucuğu bir kez PBS ile yıkarız. Sonrasında, %5'lik kan solüsyonu içerisinde anti-dengue primer antikorunun 1/1000 oranında dilüsyonunu hazırlarız. Daha sonra, bu antikor solüsyonundan 200 µL ekleriz.Her bir kuyucuğa ekleme yapın. Teşekkürler. Ardından, plakayı 37 °C'de bir saat boyunca inkübe ediyoruz. Sonrasında, hiperimmün sıvıyı uzaklaştırıyoruz ve her bir kuyucuğu bir kez XPBS ile yıkıyoruz.Ardından, aynı prosedürü ikincil bir antikor ile tamamen aynı şekilde tekrarlıyoruz. Protokole uygun olarak 20 ml substrat hazırlıyoruz ve bunu bir kaba ekliyoruz. Daha sonra, her bir kuyucuğa 200 microliters substrat ekliyoruz.Ardından, substratı uzaklaştırarak reaksiyonu durdururuz ve her kuyucuğa 1 ml distile su ekleriz. Sonra plakadaki suyu boşaltırız ve plakanın kurumasını bekleriz. Her renkli nokta bir virüs plağını temsil eder ve bu plakları sayarak, homojenize ettiğimiz sivrisineğin orijinal orta bağırsağında bulunan virüs partiküllerinin sayısını tahmin edebiliriz.Sizlere, aegypti sivrisineğinde dengue virüsü enfeksiyonunun nasıl gerçekleştirileceğine dair prosedürü göstermiş olduk. Bu protokol, virüsün sivrisinek hücre hattında üretilmesini içerir. Virüs partikülleri daha sonra hücre hattından saflaştırılıp izole edilir, ardından insan tam kanı ile karıştırılarak sivrisineklere besletilir.Virüs sivrisinekleri enfekte edecektir ve enfeksiyon gerçekleştikten sonra, sivrisineğin orta bağırsak dokusunun nasıl izole edileceğini ve bu orta bağırsağın enfeksiyon düzeyinin nasıl belirleneceğini size gösterdik. Temel olarak orta bağırsağı homojenize ediyor ve virüs partiküllerini bu orta bağırsaktan serbest bırakmak için prosedürü uyguluyoruz. Ardından, orta bağırsağın enfeksiyon düzeyini, yani sivrisinek orta bağırsağını enfekte eden virüs partiküllerinin sayısını belirlemek amacıyla, bu virüs partiküllerini sivrisinek hücre hattını yeniden enfekte etmek için kullanıyoruz.

protocol-for-dengue-infections-mosquitoes-aegypti-infection-phenotype

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü James laboratuar tarafından dsRNA kadın dang virüs limanı A. aegypti sivrisinek, içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. , Enjeksiyon iğneleri kalibre, enjeksiyon kurulum manipüle ve toraks içine enjekte dsRNA tekniği gösterilmiştir.

Bayan A. aegypti Sivrisinek içine dsRNA enjeksiyon

Sıtma için potansiyel bir gen refrakter olarak tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde Plasmodium enfeksiyonları önlemede rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, sivrisinek Plasmodium enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Gametocyte kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı hazırlamak ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol

Alphavirus uyum sistemlerini kullanarak in vitro ve erişkin sivrisinek floresan gazetecilere ifade etmek için yöntemler açıklanmıştır. Bu teknik, yerine ya da ek olarak bir muhabir ilgi herhangi bir protein ifade etmek için adapte olabilir.

Alphavirus uyum Sistemi: Sivrisinek Vektörler Enfeksiyon görselleştirme için Araçlar

A açıklanmıştır sivrisinek hemocytes toplamak ve leke henüz doğru yöntem basitleştirilmiş. Bizim metodumuz Aedes sivrisinek hemocytes temiz hazırlıkları izole etmek için yüksek enjeksiyon teknikleri doğruluk ile perfüzyon sadeliği birleştirir. Bu yöntem çalışmaları gerektiren türleri hemocytes bilgi ve bolluk kolaylaştırır.

Yellow Fever Sivrisinek Hemocytes Toplama ve Boyama için Protokol Aedes aegypti</em

Sıtma bulaştıran sivrisinekler, yalnızca moleküler teknikler kullanılarak tespit edilebilen epidemiyolojik olarak önemli bir dizi özelliğe sahiptir. MALDI-TOF tabanlı bir SNP genotipleme platformu kullanarak, sıtma vektörlerinin birden fazla temel özelliğini (tür, böcek ilacı direnci, parazit enfeksiyonu ve konakçı seçimi) aynı anda tespit etmek için bir test geliştirdik.

Sıtma verici Sivrisinekler için bir çok algılama Deneyi

İnsan sıtma parazitlerine kemirgen sıtma parazitlerinin yaşam döngüsü ve biyolojisinin çarpıcı benzerlikleri nedeniyle, kemirgen sıtma modelleri sıtma araştırmaları için vazgeçilmez hale gelmiştir. Burada, vahşi tip ve transgenik kemirgen sıtma türlerinin fenotipeksi analizinde kullanılan en önemli tekniklerden bazılarını standardize ettik.

Kemirgen Sıtma paraziti Asexual ve cinsel kan aşamaları ve sivrisinek aşamaları phenotypic Analizi

Geçerli Zika, chikungunya ve dang virüs karmaşık numune hazırlama ve pahalı araçları gerektirir ve düşük kaynak ortamlarda kullanmak zor tespit etmek için teşhis multiplexed. Algılamak ve yüksek duyarlılık ve özgüllük ile bu virüs ayırt etmek için hedef özgü strand displaceable probları ile izotermal amplifikasyon kullanan bir tanı gösteriyoruz.

Çoğaltılmış izotermal amplifikasyon Zika, Chikungunya ve dang 1 tespit etmek için teşhis platformu dayalı

Sunulan protokol, Aedes aegypti sivrisinek popülasyonlarının Zika gibi belirli bir virüs için vektör yeterliliğini bir muhafaza ortamında belirleyebilir.

Zika Virüsü Kullanan Aedes aegypti Sivrisineklerinde Vektör Yetkinlik Analizleri

Kültür mikrosporidian parazit Edhazardia aedisiçin bir protokol . Parazit aedes aegypti sivrisinek bir nesil sonraki larva aşamasında yatay transfer ve yetişkin aşamasında dikey iletim takip yoluyla geçit edilir. Canlı sporoplazmlar enfekte yumurtalarda uzun süreli hayatta kalırlar.

Aedes aegypti Sivrisinekmikrosporidian Parazit Edhazardia aedis yayılması

Standart membran besleme testi (SMFA), potansiyel sıtma önleyici bileşiklerin değerlendirilmesi ve tanımlanması için altın standart olarak kabul edilir. Bu yapay besleme sistemi, bu tür bileşiklerin Plasmodium falciparum parazitinin yoğunluğu ve prevalansı üzerindeki etkilerini daha fazla değerlendirmek için sivrisinekleri enfekte etmek için kullanılır.

Anofellerde Plasmodium falciparum Enfeksiyonunun Tespiti için Standart Membran Besleme Testi

Oral beslenme ve intratorasik enjeksiyon enfeksiyonunu içeren bu metodoloji, midgut ve / veya tükürük bezi bariyerlerinin arbovirüs enfeksiyonu üzerindeki etkisini etkili bir şekilde değerlendirebilir.

Yetişkin Sivrisineklerde Oral Beslenme ve Mikroenjeksiyon ile Deneysel Viral Enfeksiyon

Öğrenin Aedes aegypti sivrisineklerinde dang virüsü enfeksiyon protokolünü ve viral yük tayini yöntemlerini. Bu teknik genetik direnç mekanizmalarını incelemek ve bulaş kontrol stratejileri geliştirmek için kullanılır.

Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol

Daha fazla video keşfet