Name: İnsan Dil Mantar (Tat) papilla toplayın Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Öğrenin, insan dil mantar papilla biyopsisi tekniğini kullanarak tat duyusu araştırmaları için canlı insan tat dokusu nasıl toplanır. Bu yöntem, moleküler ve hücresel analizlerle insan tat iletim mekanizmalarını anlamayı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma NIH DC03969 R21-01 (JGB) tarafından desteklenmiştir. Biz, teknik yardım için Şekil 4B ve Sayın D. Bayley ve Bayan S. Alarcon gösterilen RT-PCR gerçekleştirmek için, tek bir tat tomurcuğu hücreleri, Dr. Tauf Huque yakalamak için Dr. Fritz Lischka teşekkür ederim. M. Yanina Pepino Tıp NIDAT32 DA07313 Washington Üniversitesi, St Louis, MO (Cottler LB PI) tarafından desteklenen bir adam.

1. Giriş ve Genel Hususlar Genel prosedür ön dilin dorsal yüzeyi kavisli bir bahar mikro kullanarak bu anestezi alan mantarbiçim (tat) papilla bir sayı (6-8) kaldırılması ile takip (1 cm 2) küçük bir alanda, lokal anestezi gerektirir -makas (McPherson-tipi Vannas # SR 5603, Roboz, Rockville, MD). Kaldırıldı mantarbiçim papilla yaklaşık 0.25 mm 3 adet. Her bir papilla ile birlikte çıkarılır çok az olmayan papilla (tat) epitel doku vardır. Yeni papilla 3 ila 5 hafta sonra bu form ve tat tomurcuklarının işleyen (Spielman ve Marka, yayınlanmamış gözlemler) yeniden. Fark, bu küçük miktarda tat malzeme çıkarılmasından sonra gıda tat veya lezzet hiçbir etkisi yoktur. Yetişkin insan dilinde bireysel tat tomurcuklarının sayılır çalışmalar, insan dilin tat tomurcukları yaklaşık 5000 içerdiğini tahmin edilebilir. Bizim prosedürü ortadan kaldırır, bu tat tomurcuklarının en az 20 ila 25 (ortalama ~ insan mantarbiçim papilla başına 3,5-4 tat tomurcukları) 2 ya da toplam% 0.4 . Buna ek olarak cerrahi bu doku kaybı ile ilişkili herhangi bir ağrı var. Bir iğne dil girerken, sadece enjeksiyon yerinde hafif ağrı, tabii ki, hissediyor. Anestezi kapalı yıpranmış sonra, bir günden daha az bir süre bazen hafif bir rahatsızlık, ancak bu rahatsızlık bir deneyimleri olanlar dil yanlışlıkla "ısırma" dan sonra çok daha azdır. Geçtiğimiz birkaç yıl içinde biz anestezi içermez alternatif bir prosedür geliştirdik. Doku alınması için teknik, her ikisi için de aynıdır. Prosedürü tek fark cerrah artık anestezi ele alındı, 1 cm 2 çap alanı ile sınırlı olduğunu. Aksine s / o önde gelen papilla görünen dilin dorsal yüzeyi üzerinde herhangi bir siteyi seçebilirsiniz. Uygulanmasıyla ilişkili ağrı ile kıyaslandığında kaldırıldı papilla toplam sayısı Eğer uygun bir şekilde yerine veya anestezi olmadan, her iki teknikte de 6-8 ile sınırlı, 6-8 mantarbiçim tat papilla kaldırma rahatsızlık daha az bir sorun olarak kabul edilir Lokal anestezi iki işlemlerine tabi bireylerin genel bir araştırma, yani, ve anestezi olmadan, gelecekteki tüm biyopsilerinde lokal anestezi olmadan konularda ezici bir çoğunluğu verirdi gösterdi. Bu tekniği (AIS) ve anestezi olmadan biyopsileri yapılan yazar tarafından öğretilen bazı meslektaşlarıyla geliştirilen cerrah, kendileri üzerinde denenmiş ve rahatsızlık geçicidir ve ısıran bir dili daha az kabul edilmektedir tanıklık var. Sonuç olarak, anestezi olmadan bir papilla kaldırılmasını denemek için istekli olacağını biyopsi olarak kabul bireyler onlarca soruldu ve onlar, onlar anestezi uğrayacaktı çok acı verici olabilir yargıç, tüm olmadan papilla kaldırılması ile devam etmek için mutabık kalmışlardır anestezi. Tüm biyopsi 5-10 dakika daha uzun sürmemelidir. Anestezi istihdam ise 2-3 dakika daha eklenir. Biyopsi genellikle sabah saatlerinde yapılmaktadır. Biyopsi öncesi, gönüllüler başlama saatinden iki saat önce hafif bir yemek yemek için talimat vardır. Biyopsi, yazılı bilgilendirilmiş onam elde edilir. Biyopsi zamanda Dışlama kriterleri (örneğin, gastrointestinal hastalıklar, nörodejeneratif hastalıklar, kanser, kan diskrazisi, lokal anestezikler alerjisi, vb) daha fazla kalp hızı ile birlikte bu tedavi ile kontrol olsun veya olmasın, ciddi kronik hastalığı olan olanlar 60 den 100 ya da daha az; 145 veya daha fazla 100'den az sistolik kan basıncı, diyastolik kan basıncı konusu çalışmaya katılabilir 90 daha fazla 60 veya daha az ve cerrahın görüş. Son olarak, biyopsi işlemi mRNA azalan kalitesi ile sık sık belirttiğimiz gibi, doku bütünlüğü hızla kaybolur doku muayenesi için işlemden geçecektir aynı tesiste yürütülen gerektiğini dikkate almak önemlidir. Bu sorunları en aza indirmek için dil dokusu mümkün olduğunca çabuk işleme tabi tutulmalıdır. 2. Konu Hazırlığı <ol><li> Söz konusu diş sandalye veya koltuk başlığı ile bir koltuk oturmuştur. </li><li> Biyopsi zamanda kalp hızı ve kan basıncı kontrol edin. Kan basıncı, kalp hızı veya sözlü yeterlilik aralığı dışında konusu düşüş, cerrah, o / o bir doktor görmek için acil randevu konuya önerir. </li><li> Ağız kuruluğu, coğrafi dil ya da herhangi bir dil lezyonları göstergelerine dikkat ile, genel doku sağlığı için oral kavite kontrol edin. Dil lezyonları ya da kserostomi dahil olmak üzere, ağız hastalığı belirtileri gösteren herhangi bir konuda çalışma kapsamı dışındadır. Oral cavit tüm enkaz kaldırmak için su ile ağzınızı çalkalayın konuda talimaty Gerekirse dil, anestezi enjeksiyonu sırasında dillerine yapılacak plak veya enkaz kaldırmak için bir tek dil kavgacı, ile temizlenir. Cerrah, oral kavite kadar uzanır dilin ön ¼ eldivenli elini tutmak için steril gazlı bez kullanır. </li><li> Anestezi kullanılması durumunda, 28 gauge bir 1cc Tüberkülin şırınga x epinefrin (1:100,000) ile 0.25 mL lidokain (% 2) içeren ½ 'iğne tek bir sitede sadece dilin ön kısmı dorsal yüzeyinin altında yavaş yavaş enjekte . Anestezi site, daha sonra yapılan çalışmalar ile lidokain bir girişimi engellemek için toplama site distal. Karşılaştırma için, enjekte lidokain miktarı (0.25 ml), normal dental prosedürler sinir bloğu (0.8 mL 1 ml) için verilen miktarın dörtte biri. Ama anestezik enjeksiyon önce iğne yerleştirilmesi sonra, aspirasyon, hiç kan damarı vurdu olduğunu garanti eder. Bu önlem, büyük bir gemi, dorsal yüzeye yakın vurdu olacağını anatomik olası olsa bile alınır. Dorsal yüzeyinde sadece arter, dorsal lingual arter öncelikle doku hasat oluşur anterior üçüncü, daha arka yer küçük kan damarları vardır. Dilin ventral yüzeyinde büyük dilli arterler ve lingual venler kadar 3 anestezi alan dorsal bölgeden kaldırıldı. 1 cm anestezi alanı çevreleyen doku ile karşılaştırıldığında biraz donuk görünür. Bu doku, küçük kan damarlarını sıkıştırmaktadır şişlik nedeniyle. Aynı zamanda epinefrin vazokonstriktif etkisi nedeniyle. Yaklaşık bir dakika sonra, bir sonda, uyuşma için alan testi için kullanılır. Bölgesini uyuşturmak değilse, ikinci bir enjeksiyon (0,1 - 0,2 ml) verilebilir. </li></ol> 3. Dil papilla Kaldırma Tekniği <ol><li> Konunun dil ön çeyreğinde steril gazlı bez içine sarılmış (sağ eli ile biyopsi) (Şekil 1) ve cerrahın sol düzenlenecek. Gazlı bir köşesinde, cerrah, tükürük, dil silmek için izin vermek için açık bırakılır. Dil, gereksiz rahatsızlığa neden olarak, bu yüzden sıkı bir şekilde tutulan, ancak, elbette olmalıdır. Sol elin işaret parmağı ucu doğrudan biyopsi sitenin altında dil altına yerleştirilir. Parmağı yukarıya doğru iterek, dil papilla kolay biyopsi için sopa parmak ucu üzerine gerilmiş olur. </li><li> Biyopsi için papilla seçimi için kriterler: Tat papilla, şekil ve boyutuna göre çevreleyen filliform papilla kolayca ayırt edilebilir. Mantar şeklinde papilla çevresindeki yuvarlak ve biraz izole. Hemen yanlarında filliform papilla (Şekil 2A, mavi oklar) yoksun dairesel bir alan vardır. Bu alan, yaklaşık 1 mm çapında. Mantarbiçim papilla diğer bir ayırt edici özelliği, genç bireylerde en mantarbiçim papilla üst görünür uzun bir kılcal arborization. Arborization yerini mantarbiçim papilla kolaylaştırıyor olsa da, bu papilla tat tomurcuklarının varlığı iyi tahmin zorunda değildir. Bir kural bir ön sonuna doğru hasat başlar ve sonraki doku toplama sitesi obscuring herhangi bir kılcal kanamayı önlemek için dil ucundan daha uzağa hareket. </li><li> Bir iyi bir papilla mikro-makas (McPherson-Vannas, kavisli, keskin kenar kesim 5 mm, tarak, ucu genişliği 0.2 mm toplam uzunluğu 3 "(SC-5603, Roboz) off klibi için kullanılan bir bahar tespit edilmiştir. mikro cerrahi makas etkin bir şekilde kullanmak için bir kesim için bıçak ucu kullanmayın; yerine, bıçak kadar içinde (Şekil 1, büyütülmüş bir görüntü ve Şekil 3) mümkün olduğunca, ters bıçak ile kesiştiği noktaya yakın. papilla kaldırılması bir kesme makası hareket (Şekil 1) elde edilir. hedeflenen papilla görünen açık bıçakları içinde daha fazla, daha etkili kesme makas genel pozisyonu paralel gerektiğini dikkat edilmelidir Dilin dorsal yüzeye sahip. </li><li> Bazen dil cerrah kaldırılması için bir papilla belirlemek için çalışıyor gibi kuru olur. Kuruduktan sonra, açıkça bir mantarbiçim papilla olduğunu görmek için operatör yeteneğini daha zorlu hale gelir ve çok zor papilla üzerinde bıçakların kayması hale getirir. Aşırı kuru bir dil, genellikle hassas bir cerrahi hareket daha kontrol edilebilir hale dil metal bıçak sopa hale getirir. Bu konuda / ağzını kapatın ve tükürük, dil yüzeyi ile temas gelmiş sağlama süreci yardımcı olur. Aşırı ıslak dil ya da iyi değildir. Köşesinde bir dil tutmak için kullandığı gazlı bez kullanılması, bu süreçte yardımcı olur. </li><li> Herhangi bir kılcal damar kanaması meydana gelir, steril gazlı bez ile blot ile tedavi edilir. Genellikle kanama birkaç dakika içinde durur oda ısısında ve ek doku hasat engel değildir. Papilla epitel yüzeyi üzerinde dil uzatmak ve bir mantarbiçim papilla sadece üst 3 / 4 (Şekil 2B) kaldırılmış olduğundan, tat tomurcukları gösteren mantarbiçim bu parçası, küçük kanama bekleniyor. </li><li> Küçük bir Dumont forseps (Pattern tipi) kullanarak, kaldırılan papilla (130 mM NaCl, 5 mM KCI, 1 mM CaCl 2, 1 mM MgCl 2, 1 mM Na-Piruvat, 20 mM HEPES-Na soğutulmuş temel Zil tampon yerleştirilir pH: 7.2 ~ 305 mili osmols osmolalitesi) sonraki manipülasyonları için. Forseps bıçaklar arasında papilla tutam ASLA zorunludur. Doku çok kırılgan ve çok dikkatli ele alınmalıdır. </li><li> Papilla çıkarıldıktan sonra, konu on ila on beş dakika boyunca sandalyede kalır. Her konu kendi anestezi dil ısırma, ama geri kalanı kendi dillerini tutmak için söylenir. Başlık görsel katılan cerrah tarafından izlenmelidir. Anestezi yaklaşık 30-60 dakika eskitmek bekleniyor. Papilla kaldırma site biyopsi sonrası biraz ağrılı olabilir, çünkü, onlar, baharatlı ya da sıcak (sıcaklık) gıdalar, gazlı içecekler ya da aşırı soğuk veya sıcak içecekler farkında olmak için talimat vardır. Bir başka göstergesi tükürük herhangi bir hafif kırmızımsı renklenme normaldir ve pıhtı dağılması üzerine sona erecek konulara verilir. </li><li> Başlık papilla çıkarıldı sitenin değerlendirilmesi için papilla çıkarılmasını takiben 30-40 gün görülür. Bu kez tat papilla tamamen rejenere olması gerekir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Toplanan Doku immünhistokimya, RT-PCR, in situ hibridizasyon, kalsiyum görüntüleme, yama sıkma ve doku kültürü için kullanılan olabilir. Doğru yapıldığında papilla görünümü çapı 0.5-1 mm (Şekil 2B) hakkında, beyaz görünümlü sağlıklı. Immünohistokimya için toplanan papilla mevcut ve yayınlanmış protokolleri 4 dayalı işlenir. Paraformaldehide sabit bir tat papilla tipik bir tat tomurcuğu Şekil 4A gösterilmiştir. Biyopsi papilla da enzimatik tat tomurcuğu hücrelerinin disosiasyon ulaşmak için 5 tedavi edilebilir. Enzimatik ayrılma sonra, hücreler 4C az nemlendirilmiş bir Petri kabındaki 4 saat kadar devam edilebilir. Bu durumda tek hücre PCR (Şekil 4B), Ca-görüntüleme, vb için kullanılabilir Hücreler çeşitli şekillerde, bir tat tomurcuğu hücre beklediğiniz gibi çok ince ve bipolar (Şekil 5A ve 5B). Hücreleri toplamak veya Ca görüntüleme yaparken, mikroskop altında yaklaşık 20 dakika sonra, hücrelerin apoptotik blep (Şekil 6A, 6B, oklar) ve bunların çoğu yuvarlak haline gelişmeye başlar. Şekil 5A ve 5B gösterildiği gibi laboratuarında geliştirilen bir teknik kullanarak, hücreleri, bir yama-pipet kullanarak tek tek kadar tutuklandılar. Yukarıda belirtildiği gibi, papilla regrow 5 ila 8 hafta sonra başlar. Şekil 7A, 8 mantarbiçim papilla sol tarafında bir gönüllünün dil çıkarıldı anestezi kullanılarak bir dil görünümünü ortaya koymaktadır. 8 papilla kapalı snipped hafif kırmızımsı lekeler, dikkat edin. Ameliyattan sonra kanama görülmektedir. Mevcut görüntü, 10 dakika sonra biyopsi alındı. Şekil 7B dil biyopsi 40 gün sonra görülen aynı konuda bir görüntü. Tüm papilla Bildirimi regrown var. Rejenere papilla fonksiyonel olup olmadığını belirlemek için aynı papilla içeren ikinci bir biyopsi kabul etmeye gönüllü istedi. Uygun papilla hasat yeniden planlama doğru bir şekilde tanımlamak için, ilk etapta kaldırıldı ve 40 gün başlangıç ​​biyopsi yazılan sonra aynı gönüllü dil üzerine bindirilmiş olan 8 papilla uygun bir ızgara (Şekil 7C) oluşturulan . Destekli dil kontur ve marj ızgara mesafe, bir kez tanımlanır, aynı papilla birkaç kaldırılır ve immünohistokimya için işlenmiş. Şekil 4A bu papilla biridir. Bir tat tomurcuğu (sarı) ve tip 2 tat hücre transdüksiyon ilişkili enzim Fosfolipaz Cβ2 (PLCβ2), immünopozitif boyama anahat dikkat edin. Bu veriler, burada açıklandığı gibi biyopsisi kullanarak o, mantarbiçim papilla yeterince yer büyük olasılıkla fonksiyonel tat tomurcukları da 40 gün yeniden göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Konunun dil ön çeyreğinde, steril gazlı bez içine sarılmış ve cerrahın sol elde tutulur. Dil sıkıca tutulmalıdır. Sağdaki büyütülmüş görüntü makas ve bıçak ile ilgili olarak papilla konumunu uygun konumunu gösterir. 201/2201fig2.jpg "alt =" Şekil 2 "/&gt; Şekil 2. (A) Mantar papilla mavi oklarla gösterilmiştir. Bunlar biraz çevresi ve onların yakın çevresinde filliform papilla yoksun dairesel bir alan var izole yuvarlak yapılardır. Kaldırıldı bahar ucunda mikro-makas saniye sonra (B) Mantar tat papilla. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Öz, bir ayna ve anestezi kullanılarak mantarbiçim papilla biyopsisi. Içerlek makas genel pozisyonu, dilin dorsal yüzeyi ile paralel olmalıdır göstermektedir. Düzgün ve atraumatically yapılırsa, anestezi hemen hemen tüm gönüllüler tarafından Dolaylı maliyetler. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="Şekil 4a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4a"> Şekil 4 A. İmmünohistokimya bir tat tomurcuğu. Bir mantarbiçim papilla Fosfolipaz β2 antikorları kullanarak Nomarski optik görüntülendi ve kırmızı floresan proteini ile etiketlenen. Anahat tat tomurcuğu ve birkaç etiketli tat hücreleri sarı gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="Şekil 4b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4b"> B. aday ekşi bir tat reseptör RT-PCR, Asit Algılama İyon Kanal 1 (ASIC1). M = işaretleyici. 1 - 4 arasındaki Lanes dört farklı gönüllülerin ASIC1 için tek hücre RT-PCR. Toplandıktan sonra, mantarbiçim papilla enzimatik olarak ayrışmış, hücreleri tek tek kaldırdı ve ASIC1 ifade yapıldı. 2 ve 4 Lanes ASIC1 normal bir ifade vardı. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5. A. Görüntüsü olan tek tat hücreleri, bir yama pipet kullanarak aldı. Büyük bir epitel hücre sol alt köşesinde (5A) görünür. İki kırmızı kan hücreleri de yama pipet üzerinde ve cam varil arkasında görünür. Tat hücresi yaklaşık 30-50 mikron uzunluğunda ve yaklaşık 6 mikron genişliğinde. Referans için, kırmızı kan hücresi, yaklaşık 7-8 mikron çapındadır. B. dört epitel hücreleri ile çevrili bir başka tat reseptör hücre gösterir. Tat hücre net görünüyor. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6. A. Görüntüler hücrelerinin apoptotik blep (tat hücre, oklar bağlı yuvarlak blep gibi hayalet) gelişmeye başladı. Burada görüldüğü gibi onların görünümünü değiştirir B. Hücreler artık hasat edilir. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="Şekil 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7. Hiçbir anestezi ile 8 tat papilla çıkarılmasından sonra on dakika A.. Cerrahi siteleri biraz kırmızımsı lekeler olarak görünür. Kanama fark edilir. B. biyopsi 40 gün sonra aynı dil. Rejenere tüm papilla dikkat edin. Regrown olarak kaldırılır papilla belirlemenize yardımcı olmak için, ızgara sağ tarafında resmi sitesi ile oluşturulan ve sol tarafı görüntü yeniden papilla üzerinde kaydırılır. C. rejenere papilla aynı noktada ortaya çıktı. Rejenere papilla (Bkz. Şekil 4A) fonksiyonel tat hücreleri içerdiği gösterilmiştir immünohistokimya bu grup tekrar papilla Hasat.

<ol><li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+taste+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li>
<li>Miller, I. Anatomy of the peripheral taste system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+I+%22Handbook+of+Olfaction+and+Gustation%22">Handbook of Olfaction and Gustation</a>. Doty, R. I., Dekker, M. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).</li>
<li>Figure 12.67. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Gray%27s+Anatomy%3A+The+Anatomical+Basis+of+Medicine+and+Surgery%22">Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery</a>. , 38th Edition, Churchill Livingstone. New York. (1995).</li>
<li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li>
<li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Biology+of+Taste+and+Olfaction%22%5BJournal%5D)">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. Spielman, A. I., Brand, J. G. , CRC Press. Boca Raton, FL. 329-332 (1995).</li>
</ol>

Bir önemli avantajı, insan hücreleri kullanarak, kendi özgünlüklerini. Burada ayrıntılı olarak açıklanan prosedürü insandan tat reseptör hücrelerinin izolasyonu için dil doku sağlar. Bu tat hücreleri tat bilgisini transdüksiyonu için önemli molekülleri keşfetmek isteyen moleküler çalışmalar için kullanılan, kalsiyum görüntüleme çalışmaları uyaranlara tat hücre aktivitesini izlemek için olabilir Ayrıca, bu yordamı tarafından sağlanan dil doku in situ hibridizasyon gibi immünohistokimya gibi çeşitli teknikleri il...

<table><tbody><tr><td>McPherson-Vannas. Kavisli, keskin kesici kenar 5mm. Tarak, uç genişliği 0.2 mm toplam uzunluk 3&quot;</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5603, Roboz</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Dumont pens</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-4915, Roboz</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan dil mantar (tat) papilla toplayın tekniği

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

Tat duygusu, insan hayatı için kritik öneme sahiptir. Bu vücudu potansiyel yutulur gıda kalitesi hakkında bilgilendirir ve sindirim için sindirim kanalı hazırlamak metabolik süreçleri harekete geçirir. Sabit ilerleme tat transdüksiyon (bir inceleme için, Breslin ve Spector, 2008 1) erken biyokimyasal ve moleküler olayların altında yatan anlayış doğru yapılmaktadır. Ancak, bugüne kadar kaydedilen ilerleme, büyük ölçüde hayvan modellerinde yol açmıştır. Ancak, reseptör özgüllüğü ve reseptör yoğunluğu belirgin farklılıklar, türler arasında değişiklik gösterir, insan tat transdüksiyon sadece insan tat doku kullanarak anlaşılmış olacaktır. Burada tat tomurcukları içeren çapı yaklaşık 0,5 mm yuvarlak pembe anterior yapılar gibi görünür insan mantarbiçim papilla, toplamak için bir biyopsi tekniği açıklar. Bu biyopsi papilla in situ hibridizasyon, immünhistokimya yaşayabilir tat tomurcuğu hücrelerinin izolasyonu ve moleküler biyoloji teknikleri ile, tat-özel yeni proteinlerin belirlenmesi de dahil olmak üzere birçok amaç için kullanılmaktadır.

Bilgi tat transdüksiyon altında yatan moleküler mekanizmaları son zamanlarda büyük ölçüde hayvan modelleri kullanarak, önemli gelişmeler kazanmıştır. Ancak, insan doku memeliler garanti çalışmalar arasında tat duyarlılığı ve özgüllüğü çeşitliliği. Biz insan dil üzerinde papilla yaşam tat hücreleri toplamak için biyopsi tekniği açıklar.

İnsan Dil Mantar (Tat) papilla toplayın Tekniği

Tat alma duyusu insan yaşamı için kritiktir. Vücuda, potansiyel olarak alınacak gıdanın kalitesi hakkında bilgi verir ve metabolik...

Bu prosedürün genel amacı, per pilly'den insan mantarlarını temizlemektir. Bu işlem, öncelikle dilin ön çeyreğine steril bir Gores ped sarılıp sol elle sıkıca tutulmasıyla gerçekleştirilir. Dilin altından sol işaret parmağıyla nazikçe yukarı doğru itilerek, dilin parmak üzerinde gerilmesi ve hedeflenen fungi formm per pill'in açığa çıkarılması sağlanır.Prosedürün ikinci adımı, dilin toplama bölgesinin distalindeki dorsal alana 0,25 mililitre %2 lidokain anestezik enjekte etmektir. Anestezinin etkisini göstermesi için üç dakika bekleyin. Prosedürün üçüncü adımı papillanın çıkarılmasıdır; kesme işlemi, bıçakların çatala yakın en iç segmenti ile gerçekleştirilir.Makas uçlarını açık bir şekilde hedef per pillar üzerine konumlandırın ve çevre dokuyu aşağı doğru iterek hedef papillanın bıçaklar arasından çıkmasını sağlayın, ardından tek ve hızlı bir hareketle kesin. Kesim işlemi için makasın uç kısmını kullanmaktan kaçının. Prosedürün son adımı, kesilen per pillar'ı makas bıçakları ve düz penset kullanarak kaldırmaktır.Kesilen per pillar'ı nazikçe uygun tampon çözeltiye aktarın. Per pillar'ın sıkışmamasına dikkat edin. Hazırlanan örnekler in situ hibridizasyon, immünohistokimya, polimera

technique-to-collect-fungiform-taste-papillae-from-human-tongue

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz insan mantarbiçim tat papilla hücrelerinin uzun süreli kültürlerde izole edilmesi ve sürdürülmesi için tekrarlanabilir bir protokol geliştirmeyi amaçladık. Biyopsi ile elde edilen insan mantarbiçim papilla hücreleri başarıyla canlılık kaybı olmadan daha sekiz pasajlar (12 ay) için kültüre edildi.

İnsan Mantar şeklinde Lezzet papilla hücrelerinin izolasyonu ve Kültürü

Bu videoda, bir murin dilinden circumvallate papilla (CVP) epitelinin izolasyonunu açıklıyoruz.

Fare Modelinden Circumvallate Papilla (CVP) Epitelinin İzolasyonu: CVP Epitelini Fare Dilinden Ayırmak İçin Enzimatik Bir İşlem

Yağ asitleri ve diyet ve yağlı yiyecek tercihleri ​​ile dernek Oral kemo-alış obezite gelişimi ve neden diyet değişiklikleri birçok kişi için zor olabilir ile ilgili mekanizmaların belirlenmesini sağlayabilir.

Oral Yağ Asidi eşikleri, Fat Algı, Yağ Gıda sevme, ve İnsanlardaki Papillalar Yoğunluğu Ölçme

Burada dijital fotoğraflardan mantarbiçim papilla yoğunluğu ölçmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem, Miller &amp; Reedy (1990) tarafından mantarbiçim papilla orijinal açıklayıcı çalışma içine önceliklendirme ve objektif karakteristik ölçümlerini oluşturur.

Mantar şeklinde papilla Amaç Analizi Denver Papilla Protokolü

Bu iletişim kuralı insan tat yanıt-e doğru ölçü ve kısa bir anatomik değerlendirme, kısa lezzet testi ve konunun bildirilen hissi ve tat reseptör genotip kullanarak bir doğrulama yöntem içerir.

Tat sınavı: Bir kısa ve doğrulanan Test

Bu makalede, sürekli olarak bütün ve bozulmamış tat tomurcukları (içlerini saran sinir lifleri dahil) veren ve tat tomurcukları ile çevresindeki papilla içindeki yapılar arasındaki ilişkileri koruyan tüm mantar formu, sirküvallat ve damak tadı tomurcuklarının doku hazırlama, boyama ve analizi için yöntemler açıklanmaktadır.

Mantar Formu, Sirkülasyon ve Damak Tat Tomurcuklarının Bütün Montajlı Boyama, Görselleştirme ve Analizi

Makale, mikroakışkanları dildeki bir intravital görüntüleme penceresine entegre ederek fonksiyonel tat hücresi görüntüleme in vivo için μTongue (dil üzerinde mikroakışkanlar) cihazını tanıtmaktadır.

μTongue: Dil In Vivo için Mikroakışkan tabanlı fonksiyonel görüntüleme platformu

Araştırma için tip 2 diyabetik adacık kaynağı yetersiz. Burada kısmi pankreatektomi geçiren hastalardan izole adacıklar için protokol paylaşın. Bu yaklaşım, tip 2 diyabetik adacıklar elde etmek için eşsiz bir mekan temsil eder ve temel ve klinik çalışmalar için yeterli sayıda non-diyabetik hastalarda klinik olarak uyumlu.

Kısmen Pancreatectomized hastalar İnsan Islets izolasyonu

Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Bu videonun amacı, modifiye edilmiş Bergström iskelet kası biyopsi tekniğini insan denekler üzerinde sunmaktır.

Modifiye Bergström Tekniği İnsan İskelet Kası Biyopsi Prosedürleri

Öğrenin, insan dil mantar papilla biyopsisi tekniğini kullanarak tat duyusu araştırmaları için canlı insan tat dokusu nasıl toplanır. Bu yöntem, moleküler ve hücresel analizlerle insan tat iletim mekanizmalarını anlamayı sağlar.

İnsan Dil Mantar (Tat) papilla toplayın Tekniği

Daha fazla video keşfet