Name: Hücre Kültürü sırasında Hücre Sayısını Belirleme Scepter Hücre Sayıcı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Öğrenin Scepter Hücre Sayıcı ile hücre kültüründe otomatik hücre sayımı yapmayı. Bu el tipi cihaz, hücre çapı ve hacmini izleyerek deney tekrarlanabilirliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Hücre Sayım Önemi <ol><li> Sayma hücreleri in vitro hücre kültürü için gerekli ama sıkıcı bir adımdır. </li><li> Tutarlı hücre konsantrasyonu deneysel tekrarlanabilirlik ve doğruluk sağlar. </li><li> Hücre sayımı, hücre sağlığı ve proliferasyon oranı ekim sonraki deneyler, transfeksiyon veya enfeksiyon hücreleri, ölümsüzleşme ya da dönüşümün değerlendirilmesi, izlenmesi, ve hücre tabanlı deneyleri için hazırlanan için önemlidir. </li><li> Rağmen, hücre sayımı, hız ve doğruluk için ihtiyacı,% 71, hemasitometre kullanarak ankete sayısı hücreleri 400 araştırmacı. Hemocytometry ucuz olmasına rağmen, bu zahmetli ve yanlış sayımı sonuçları kullanıcı önyargı ve yanlış kullanım, tabi. </li><li> Hemocytometry içinde hata kaynakları şunlardır: düzensiz hücre dağılımı örnek, örnek çok fazla veya çok az sayıda hücre, belirli bir hücre belirlenen sayma alanı içinde düşüp düşmediğini olarak öznel kararlar, hemasitometre kirlenmesini, kullanıcıdan kullanıcıya varyasyon hemasitometre doldurma oranı, ve değişim. </li><li> Manuel sayma ile ilgili bezginlik hafifletmek için, araştırmacıların% 29, otomatik hücre sayım cihazları kullanarak hücre sayımı. Ancak, pek çok araştırmacı, bu büyük tezgah üstü aletleri ile ilgili fiyat, bunların kullanımı için bir engel. </li><li> Scepter hücre sayıcı, nispeten düşük bir maliyetle otomasyon ve Coulter sayma doğruluğu sunan otomatik bir el cihazdır. </li><li> Sistemi, algılama, sinyal işleme, veri depolama ve grafik ekran, analog ve dijital donanım bir arada kullanarak bir minyatür formatında empedans tabanlı parçacık algılama Coulter prensibi kullanmaktadır. </li><li> Tek sensör alt mikron ve alt pikolitrelik çözünürlük hücre büyüklüğü ve hücre hacmi ayrımcılık sağlayan bir microfabricated, hücre-algılama bölgesi ile tasarlanmıştır. </li><li> Scepter hücre sayacı hassas sıvı taşıma kanalları ve elektronik ile geliştirilmiş, grafik, bir histogram olarak hücre nüfus istatistiklerinin görüntüler. </li></ol> 2. Sayma Tek hücreli bir Süspansiyon hazırlanması <ol><li> Scepter hücre sayacı kullanmak için, hücreleri tek bir hücre süspansiyonu seyreltilmesi ile başlayın, fosfat tamponlu salin. ML başına 10,000-500,000 hücre konsantrasyonu en uygunudur. </li><li> 1.5 mL mikrofuge'de tüp seyreltilmiş hücrelerinin 100 mcL aktarın. </li></ol> 3. Hücre sayar Scepter kullanarak gerçekleştirme <ol><li> Scepter hücre sayıcı, cihazın arkasındaki geçiş tuşunu basılı tutarak açın ve görünmesi için ekrandaki yönergeleri bekleyin. </li><li> İstendiğinde, bir sensör, cihazın önüne doğru bakan elektrot algılama paneli ile Scepter birimin sonuna kadar takın. </li><li> Scepter sensörleri elektronik bir algılama bölgesi ve entegre hücre algılama elektrotlar, hassas bir kalıp örnekleme odasının oluşur. Sensörler mümkün alt mikron çözünürlüklü hücre boyutu ayırımcılık ve alt pikolitrelik çözünürlükte hücre hacmi. </li><li> Tutarlı sensörü mühendislik, eşit örnek hacmi sayılır ve doğru boyutu ölçümleri yapılmış olduğunu garanti eder. </li><li> Sonra sensör aşağıdaki gibi ekrandaki yönergeleri göre sayım sürecinin her adımında gerçekleştirmek eklenir: </li><li> Ekranın okuduğunda "başlamak için pistonu aşağı tutarak," piston bastırın. Ekran sonra "batığın sensörü." Okuyacak Hücre süspansiyonu çözüm içine sensör ve sensör içine hücre süspansiyonu aspire pistonu serbest Batmak. </li><li> Piston bir elektrik sinyali olarak görür ve örnek artı ölü hacim sensör içine çekecektir. Pipetleme gibi daldırma hızı veya doğruluğu önemli değildir. Bu işlem birkaç saniye sürer. Hazır olduğunda, cihaz bip sesi gelecektir ve "Örnek yüklü" ekranda görüntülenir. </li><li> Bir kez numune sonra mikro yoluyla, hücre boyutu ve hücre hacmi değerlendirmek için algılama bölgesi üzerinden çizilmiş sensör içine yüklenir. 50 mcL örnek sayılır sonra Sensör sayımı durdurmak için araç söyler. </li><li> Sayımı tamamlandıktan sonra, cihazın ekranında "Komple Kont. Sensörünü çıkarın ve atın lütfen." Okuyacak Istemi izleyin ve sensörünü çıkarın ve atın. </li><li> Cihaz, daha sonra, hücre boyutu veya çapı, ekranda bir histogram yanı sıra mL başına hücre konsantrasyonu gösterecektir. </li></ol> 4. Veri Analizi <ol><li> Sayımı tamamlandı ve histogram enstrüman görüntülendikten sonra, düğmeyi basarak kapıları geçerlidir. "Otomatik yolluk" veya histogram profiline göre otomatik olarak kapı ya da "son kullanma" ya da önceki sayısı kapılarını kullanmak için seçin. </li><li> Seçimin ne olursa olsun, kapıları elle ince ayar verileri taşınmış olabilir. Sol kapı seçin ve kaydırma tekrar düğmeyi itin, istediğiniz gibi kapı hareket etmek ggle. </li><li> Sonra sağ kapı etkinleştirmek ve sağ kapı yere geçiş ilerlemek için tekrar geçiş tuşuna basın. Tekrar tıklayın, yeni bir hücre konsantrasyonu, ortalama hücre hacmi ve çapı görünecektir. </li><li> Geçiş tarihi arasındaki ekran geçmek için iki tarafa taşınmış olabilir, süre, ortalama hücre boyutunu ve ortalama hücre hacim. </li><li> Cihazın kendisi 72 histogramlar kadar saklanabilir. Bir kişisel bilgisayara veri yüklemek için, ekran, USB kablosu portu üzerinden cihaz takın. </li><li> PC üzerinde, çift "connect" tıklayın sonra yazılımı başlatmak için Scepter Yazılım Uygulaması tıklayın. Tüm sayıları otomatik yazılım bağlantı noktası olacaktır. </li><li> Scepter Uygulama Yazılımı hacmi veya çapı iki kültürün nüfus dağılımı ayrıntılı histogram görüntüler. İndirilen dosya daha sonra, ham veriler, belirli bir hücre çapları veya hücre hacimleri bidonları gözükecektir Microsoft Excel, ihraç edilebilir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar <ol><li> Ondokuz farklı hücre hatları sayma hazırlanmış ve teorik başlangıç ​​konsantrasyonları bir Coulter Sayaç kullanılarak belirlenmiştir. Bu hücre süspansiyonları daha sonra teorik hücre konsantrasyonları hücre süspansiyonları elde seyreltilir. </li><li> Scepter hücre sayacı sonra hücre konsantrasyonlarını belirlemek için kullanılmıştır. Şekil 1, 5, teorik olarak hücre konsantrasyonu ile birlikte 5 temsilci hücre hatları için ölçüldü dilüsyonları gösterir. </li><li> R2 değerleri ile gösterilir doğrusallık yüksek derecede, Scepter sayma, geniş bir doğrusal çalışma aralığında, test edilen hücre hatları için güvenilir bir yöntem olduğunu göstermektedir. </li><li> Scepter sayma genel göreceli doğruluğu, Coulter Sayma elde sayıları ile karşılaştırıldığında hangi Scepter sayma elde edilen veriler Şekil 2'de gösterilmiştir. </li><li> Scepter hücre sayıları günlük, günlük Coulter sayar karşı çizilen ve tüm hücre hatları üzerinden test, Scepter sayıları Coulter sayar maç gösterir. </li><li> 19 hücre hatları sayar Z2 Coulter Sayaç, Scepter hücre sayacı, Vi-Cell ya da sayısız sistem otomatik olarak görüntü tabanlı sayaç, ve bir hemocytemeter kullanılarak yapıldı. </li><li> Sayımlar, aynı hücre süspansiyonu ve aynı dilüsyonları başlayan kullanarak, üreticinin talimatlarına göre yapılmıştır. Şekil 3'te gösterilen sonuçlar, söz konusu hücre konsantrasyonları yüksek doğrusallık teorik hücre konsantrasyonları yakından maç Scepter sayarak ölçülen göstermektedir. </li><li> Yüzde değişim katsayısı, ya da CV, her sayım sistemi için her bir hücre hattı her seyreltme için hesaplandı. Şekil 4 hücre konsantrasyonu ve sayım yöntemi ile ilgili 19 hücre hatları üzerinden ortalama% özgeçmişleri gösterir. </li><li> Çalışma aralığı içinde, Scepter hücre sayacı, küçük bir standart sapma ve varyasyon küçük ortalama katsayılar, vizyon temelli hemasitometre sayma daha hassas. </li><li> Scepter sayma hemocytometry on kat daha hızlı ve daha hızlı çok diğer otomatik sayaçlar. Şekil 5, SF9, MCF7 ve HEK293 hücreleri bu video açıklanan yöntemleri kullanarak sayıldı. </li><li> Hücre konsantrasyonunu ölçmek için gerekli ortalama süre kaydedildi. Hemocytometry örnek başına sadece bir kez yapıldı. </li><li> Scepter hücre boyutu dayalı ölçümler yapar. Böylece hücresel morfoloji herhangi bir değişiklik histogram yakalanabilir. Sağlıklı kültürleri, sağlıksız hücreleri, lyse ve sola doğru bir kayma histogram (Şekil 6, sol panel) neden güzel bir çan şeklindeki Gauss dağılımı gösterir. </li><li> Benzer şekilde,% 50 ölü hücreleri nüfusunun% 50 canlı hücreleri ile karışık olduğu, histogram vardiya de (Şekil 6, sağ panel) gözlenmiştir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Şekil 1"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Şekil 2"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Şekil 3"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Şekil 4"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Şekil 5"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Şekil 6"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Şekil 7">

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

Kathleen Ongena, Chandreyee Das, Janet L. Smith, Sonia Gil ve Grace Johnston, bu yazıda kullanılan aletleri üreten Millipore tarafından istihdam edilmektedir.

Scepter hücre sayıcı performans, diğer sayım yöntemleri sonuçları karşılaştırıldığında, bu yeni el, otomatik hücre sayıcı geniş bir çalışma aralığı boyunca hassas, hızlı ve güvenilir hücre sayımı sunar sonucuna varmışlardır. Scepter sayma işlevselliği sensör ucu ve Coulter ilkesine dayalı karmaşık sayım enstrümantasyon içine gömülü hassas mühendislik teknolojisinin bir sonucu. Performans kalitesi, hızını artırmak ve hücre tabanlı testlerin tekrarlanabilirliği geliştirmek için bir yöntem olarak sayma Scepter göstermektedir. El formatı hücre kültürü kaputu hızlı bezginlik sayma hakkı sağlar.

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzeme Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorum </td></tr><tr><td> 40 mikron Scepter Sensörler Scepter 2.0 Taşınabilir Otomatik Hücre Sayıcı </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> 60 mikron Scepter Sensörler Scepter 2.0 Taşınabilir Otomatik Hücre Sayıcı </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Scepter Sensörler, 60 mikron </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 50 Pack sensörler </td></tr><tr><td> Scepter Sensörler, 40 mikron </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 50 Pack sensörler </td></tr><tr><td> Universal Güç Adaptörü </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Scepter O-Ring Seti </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 O-ring ve bir filtre kapak </td></tr></tbody></table>

hücre kültürü sırasında hücre sayısını belirleme scepter hücre sayıcı

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Hücrelerinin sayımı, genellikle in vitro hücre kültürü için gerekli ama sıkıcı bir adımdır. Tutarlı hücre konsantrasyonu deneysel tekrarlanabilirlik ve doğruluk sağlar. Hücre sayımı, hücre sağlığı ve proliferasyon oranı ekim sonraki deneyler, transfeksiyon veya enfeksiyon hücreleri, ölümsüzleşme ya da dönüşümün değerlendirilmesi, izlenmesi, ve hücre tabanlı deneyleri için hazırlanan için önemlidir. Hücre sayımı özellikle hücresel yanıtları kantitatif ölçümler için, doğru, tutarlı ve hızlı olması önemlidir. Hücre sayımı, hız ve doğruluk için bu ihtiyacı olmasına rağmen, 400 araştırmacıların% 71 hemasitometre kullanarak hücrelerin sayısı 1 inceledi . Hemocytometry ucuz olmasına rağmen, bu zahmetli ve yanlış sayımı sonuçları kullanıcı önyargı ve yanlış kullanım, tabi. Hemocytometers hücre süspansiyonları belirtilen cilt olarak yüklenir ve mikroskop altında sayılır özel optik cam yapılır. Hemocytometry içinde hataların kaynakları şunlardır: düzensiz hücre dağılımı örnek, örnek çok fazla veya çok az sayıda hücre, belirli bir hücre belirlenen sayma alanı içinde düşüp düşmediğini olarak öznel kararlar, hemasitometre kirlenmesini, kullanıcıdan kullanıcıya varyasyon ve hemasitometre varyasyon oranı 2 doldurma. Manuel sayma ile ilgili bezginlik hafifletmek için, araştırmacıların% 29, otomatik hücre sayım cihazları kullanarak hücre sayımı, bu vizyon tabanlı sayaçlar, Coulter prensibi kullanarak hücrelerin tespit sistemleri, ya da akış sitometri 1 . Çoğu araştırmacılar için bir otomasyon sistemi kullanılarak ana engel, bu büyük benchtop aletleri 1 ile ilişkili fiyat . Scepter hücre sayıcı, nispeten düşük bir maliyetle otomasyon ve Coulter sayma doğruluğu sunan otomatik bir el cihazdır. Coulter, algılama için analog ve dijital donanım bir arada kullanarak minyatür bir formatta empedans tabanlı parçacık algılama 3 prensip, sinyal işleme, veri depolama ve grafik ekran kullanmaktadır . Tek ucu alt mikron ve alt pikolitrelik çözünürlük hücre büyüklüğü ve hücre hacmi ayrımcılık sağlayan bir microfabricated, hücre-algılama bölgesi ile tasarlanmıştır. Hassas sıvı taşıma kanalları ve elektronik ile geliştirilmiş, Scepter hücre sayacı grafiksel bir histogram olarak görüntülenen hücre nüfus istatistikleri raporlar.

Scepter Hücre Sayıcı, hücre sayımı, hücre çap ve hacim izlemek ve hücresel popülasyonların sağlık ve kalite kontrol etmek için kullanılan bir kültürden diğerine kullanılabilir bir el otomatik bir cihazdır.

Hücre Kültürü sırasında Hücre Sayısını Belirleme Scepter Hücre Sayıcı

Hücre sayımı, in vitro hücre kültürü için genellikle gerekli ancak zahmetli bir adımdır. Tutarlı hücre konsantrasyonları, deneylerin tekrarlanabilirliğini sağlar ve ...

Scepter hücre sayıcı, hücreleri saymak, hücre çapını ve hacmini izlemek ve hücresel popülasyonların sağlığını ve kalitesini kontrol etmek için kullanılan el tipi otomatik bir cihazdır. Geliştirilmiş doğruluk, kullanım kolaylığı ve düşük hücre sayım maliyeti dahil olmak üzere diğer sayım yöntemlerine göre önemli avantajlar sunar. Scepter'ı kullanarak, hücreleri tek kullanımlık sensöre aspire etmek için grafik ekranındaki talimatları izleyin.Ardından hücreler sayılır ve cihaz, bir bilgisayara yüklenip analiz edilebilen hücre konsantrasyonlarını ve istatistiklerini raporlar. Merhaba, ben Sonya. Millport'ta araştırma bilimcisiyim ve bugün size Scepter'ın nasıl kullanılacağını göstereceğim.Hücre sayacı Hücre sayımı, in vitro hücre kültürü için gerekli ancak zahmetli bir adımdır. Tutarlı hücre konsantrasyonları, deneysel tekrarlanabilirliği ve doğruluğu sağlar. Hücre sayımları; hücre sağlığının ve proliferasyon hızının izlenmesi, ölümsüzleştirilmiş veya transforme edilmiş hücrelerin sonraki deneyler, transfeksiyon veya enfeksiyon için ekim miktarının belirlenmesi ve hız ile doğruluk gereksinimine rağmen hücre tabanlı assay'lerin hazırlanması açısından önemlidir.Hücre sayımında, ankete katılan 400 araştırmacının %71'i hücreleri bir hemositometre kullanarak saymaktadır. Hemositometri düşük maliyetli olsa da zahmetlidir; kullanıcı yanlılığına ve hatalı kullanıma açıktır, bu da yanlış sayımlarla sonuçlanır. Hemositometrideki hata kaynakları arasında örnekteki düzensiz hücre dağılımı ile örnekteki hücre sayısının çok fazla veya çok az olması yer alır.Belirli bir hücrenin tanımlanmış sayım alanı içinde kalıp kalmadığına dair sübjektif kararlar. Manuel sayımla ilişkili sıkıcılığı azaltmak için hemositometrenin kontaminasyonu, kullanıcılar arası varyasyon ve hemositometre dolum hızındaki varyasyon. Araştırmacıların %29'u hücreleri otomatik hücre sayım cihazları kullanarak saymaktadır.Ancak çoğu araştırmacı için, bu büyük masaüstü cihazlarla ilişkili maliyetler, bunların kullanımının önünde bir engel teşkil etmektedir. Scepter hücre sayıcı, Coulter sayımının otomasyonunu ve doğruluğunu, kullanımı kolay el tipi bir formatta ve nispeten düşük bir maliyetle sunan otomatik, el tipi bir cihazdır. Sistem; algılama sinyal işleme, veri depolama ve grafik ekran için analog ve dijital donanım kombinasyonunu kullanan minyatür bir formatta, empedans tabanlı partikül tespitine dayalı Coulter prensibini uygulamaktadır.Tek kullanımlık sensör, hassas sıvı taşıma kanalları ve elektroniklerle desteklenmiş, hücre boyutu ve hücre hacmine göre alt mikron ve alt pikolitre çözünürlükte ayrım yapılmasına olanak tanıyan mikro fabrikasyonlu bir hücre algılama bölgesiyle tasarlanmıştır. Scepter hücre sayıcı, hücre popülasyon istatistiklerini kullanım için bir histogram şeklinde grafiksel olarak görüntüler. Scepter hücre sayıcı işlemi, hücrelerin fosfat tamponlu salin içinde tek hücre süspansiyonunun seyreltilmesiyle başlar.Mililitre başına 10.000 ila 500.000 hücrelik bir konsantrasyon optimaldir. Seyreltilmiş hücrelerden 100 µL'yi 1,5 mL'lik bir mikro tüpe aktarın. Cihazın arkasındaki düğmeye basılı tutarak Scepter hücre sayıcısını açın ve ekrandaki talimatların görünmesini bekleyin.İstendiğinde, elektrot algılama paneli cihazın önüne bakacak şekilde bir sensörü scepter ünitesinin ucuna takın. Scepter sensörleri, elektronik bir algılama bölgesine ve entegre hücre algılama elektrotlarına sahip, hassas kalıplanmış bir örnekleme odasından oluşur. Sensörler, hücre boyutunun alt mikron çözünürlükte ve hücre hacminin alt pikolitre çözünürlükte ayırt edilmesini mümkün kılar.Tutarlı sensör mühendisliği, eşit örnek hacimlerinin sayılmasını ve doğru boyut ölçümlerinin yapılmasını sağlar. Sensör takıldıktan sonra, sayım sürecinin her adımını ekrandaki talimatlara uygun olarak şu şekilde gerçekleştirin. Ekranda, pistonu basılı tutun yazısı göründüğünde pistonu bastırmaya başlayın; ardından ekranda sensörü daldırın yazısı belirecektir, bu aşamada sensörü hücre süspansiyon çözeltisine daldırın ve hücre süspansiyonunu sensör içine aspire etmek için pistonu serbest bırakın.Piston bir elektrik sinyali görevi görür ve örneği ölü hacimle birlikte sensörün içine çeker. Pipetlemeden farklı olarak, pistonun indirilme hızı veya hassasiyeti önemli değildir. Hazır olduğunda bu işlem birkaç saniye sürecektir.Cihaz bip sesi çıkaracak ve ekranda örnek yüklendi (sample loaded) yazısı görünecektir. Örnek sensöre yüklendiğinde, hücre boyutunu ve hücre hacmini değerlendirmek için algılama bölgesinden geçirilir. Ardından mikrokanallar aracılığıyla 50 µL örnek sayıldığında, sensör cihaza sayımı durdurması için sinyal gönderir.Sayım tamamlandıktan sonra, cihaz ekranında count complete yazısı görünecektir. Lütfen sensörü çıkarın ve atın. Yönergeleri takip ederek sensörü çıkarın ve atın.Cihaz daha sonra ekranında hücre boyutu veya çapının bir histogramını ve mililitre başına hücre konsantrasyonunu görüntüleyecektir. Sayım tamamlanıp histogram cihazda görüntülendikten sonra, geçiş düğmesine basarak kapıları (gates) uygulayın; histogram profiline göre kapıyı otomatik olarak ayarlamak için "auto gating"i veya önceki sayımın kapılarını kullanmak için "use last" seçeneğini belirleyin. Seçimden bağımsız olarak, kapılar hassas ayar yapmak için manuel olarak hareket ettirilebilir.Verileri ayarlayın, sol kapıyı seçmek için geçiş düğmesine tekrar basın ve kapıyı istediğiniz şekilde hareket ettirmek için düğmeyi kaydırın. Ardından, sağ kapıyı etkinleştirmek için geçiş düğmesine tekrar basın ve sağ kapıyı yerleştirmek için düğmeyi kaydırın. Tekrar tıklayın.Yeni bir hücre konsantrasyonu, ortalama hücre hacmi ve çapı görüntülenecektir. Tarih-saat, ortalama hücre boyutu ve ortalama hücre hacmi arasındaki görüntüleme geçişini yapmak için düğme her iki yöne de hareket ettirilebilir; cihazın kendisine kadar 72 histogram kaydedilebilir. Verileri bir kişisel bilgisayara yüklemek için cihazı USB kablo portu aracılığıyla bağlayın, bilgisayarın ekranında görüntüleyin.Yazılımı başlatmak için scepter yazılım uygulamasına çift tıklayın. Ardından bağla (connect) seçeneğine tıklayın. Tüm sayımlar otomatik olarak yazılıma aktarılacaktır.Scepter uygulama yazılımı, kültürün popülasyon dağılımını hacim veya çap cinsinden detaylandıran histogramı görüntüler. İndirilen dosyalar daha sonra Microsoft Excel'e aktarılabilir; burada ham veriler, belirlenen hücre çapı veya hücre hacmi aralıklarında (bin) görüntülenir. Sayım için 19 farklı hücre hattı hazırlanmış ve teorik başlangıç konsantrasyonları bir hücre sayacı kullanılarak belirlenmiştir.Bu hücre süspansiyonları daha sonra teorik hücre konsantrasyonlarını elde etmek için daha fazla seyreltilmiştir. Hücre konsantrasyonlarını belirlemek için scepter hücre sayacı kullanılmıştır. Bu şekil, beş temsili hücre hattı için ölçülen beş seyreltmeyi ve bunlarla birlikte teorik hücre konsantrasyonunu göstermektedir.R-kare değerlerinin gösterdiği yüksek doğrusallık derecesi, scepter sayımının test edilen hücre hatları için geniş bir doğrusal çalışma aralığında güvenilir bir yöntem olduğunu kanıtlamaktadır. Scepter sayımının genel bağıl doğruluğu, scepter sayımından elde edilen verilerin coter sayımından elde edilen sayılarla karşılaştırıldığı bu bölümde gösterilmiştir. Scepter hücre sayımlarının logaritması, coter sayımlarının logaritmasına karşı grafiğe dökülmüş olup, test edilen tüm hücre hatlarında scepter sayımlarının coter sayımlarıyla eşleştiğini göstermektedir.19 hücre hattının sayımı bir Z two coulter sayıcı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Scepter hücre sayıcı, V cell veya count test sistemi gibi otomatik görüntü tabanlı bir sayıcı ve hemo TER sayımları, aynı başlangıç hücre süspansiyonu ve özdeş dilüsyonlar kullanılarak üretici talimatlarına göre yapılmıştır. Bu şekilde gösterilen sonuçlar, scepter sayımı ile ölçülen hücre konsantrasyonlarının yüksek lineerite ile teorik hücre konsantrasyonlarıyla yakından eşleştiğini kanıtlamaktadır.Her bir hücre hattının her bir dilüsyonu için yüzde varyasyon katsayısı veya CV hesaplanmıştır. Burada gösterilen her bir sayım sistemi için, çalışma aralığındaki hücre konsantrasyonu ve sayım yöntemine göre 19 hücre hattı üzerinden ortalama yüzde CV değerleri verilmiştir. Scepter hücre sayıcısı, daha küçük standart sapmalar ve daha küçük ortalama varyasyon katsayıları sergileyerek hemo sitometre sayımından daha hassas sonuçlar vermektedir.Scepter ile sayım, hemo sitometriden 10 kat daha hızlıdır ve diğer otomatik sayıcılardan da daha hızlıdır. Burada SF nine, MCF seven ve HC 2 93 hücreleri, bu videoda açıklanan yöntemler kullanılarak sayılmıştır. Hücre konsantrasyonunu ölçmek için gereken ortalama süre kaydedilmiştir.Hemositometrinin her örnek için yalnızca bir kez gerçekleştirildiğine dikkat edin. Scepter, ölçümleri hücre boyutuna göre yapar. Bu nedenle, hücresel morfolojideki tüm değişiklikler histogramda yakalanabilir.Sağlıklı kültürler güzel bir çan şekilli Gaussian dağılımı sergilerken, sağlıksız hücreler ise histogramın sola kaymasına neden olur. Benzer şekilde, %50 ölü hücre popülasyonu %50 canlı hücre ile karıştırıldığında da histogram kaymaları gözlemlenmiştir. Araştırmacıların hücre sayım yönteminde devrim yaratan Millipore'un yeni Scepter hücre sayıcısının nasıl kullanılacağını size göstermiş oldum.

determining-cell-number-during-cell-culture-using-scepter-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Canlı hücreler tam sayısının Bilgi, birçok doku kültürü manipülasyonlar için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki ayrım ve hemasitometre kullanarak hücrelerin miktarını nasıl açıklamaktadır. Insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar olsa da, diğer hücre türleri için kullanılabilir.

İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma

Kültür hücre sayısını belirleyen kültür koşullarının standardizasyonu ve doğru kantitatif deneyler önemlidir. Bu video, hücreleri bir hemasitometre kullanarak nasıl sayılır göstermektedir.

Doku ve Hücre Sayım ve Canlılık Belirlenmesi

Moxi Z minyatür otomatik hücre sayıcı patentli ince film sensör teknolojisi ve boyutlandırma gerçekleştirmek için özel bir yazılım algoritması ve parçacıkların geniş bir ebat aralığında sayma gibi kümil potasyum başlatıcısı varlığında genel sağlık belirlemek için Coulter İlke birleştiren yeni bir enstrümandır memeli hücre kültürleri. Bu protokol, hücre kültürlerinin sağlık sayma ve değerlendirme için bir aracın kullanılması açıklanmaktadır.

Moxi Z Mini Otomatik Hücre Sayacı Kullanımı Memeli Hücre Sayımı, Hücre Boyutu ve Hücre Sağlık Belirlenmesi

Bu protokol, meme kanseri hücre dizilerinde hücre proliferasyonunu analiz etmek için üç farklı yöntemin kullanımını açıklar. Bu, geleneksel hücre sayımı, lüminesans tabanlı hücre canlılığı ve bir hücre görüntüleyici kullanımı yoluyla hücre sayımının kullanımını içerir. Her biri, hücre proliferasyonunun tekrarlanabilir ölçümü için avantajlar sunar.

Meme Kanseri Hücre Hatlarında Hücre Proliferasyonunu belirlenmesi için üç Farklı Yöntemlerle Karşılaştırılması

Bu makale, iki yeni açık kaynaklı ImageJ eklentisi aracılığıyla hemositometre ve migrasyon/invazyon mikrograflarının miktar tayinini açıklamaktadır: Hücre Konsantrasyonu Hesaplayıcısı ve migrasyon tahlili Sayacı.  Ayrıca, görüntü alma ve kalibrasyon protokollerini açıklar ve eklentilerin giriş gereksinimlerini ayrıntılı olarak tartışır.

ImageJ Eklentileri Kullanma Hücre Sayım Usul Otomatik Niceleme ve Analizi

Geçerli protokol kanser hücre göç ve gerçek zamanlı olarak tek bir platformda işgali araştırma, kolayca tekrarlanabilir ve zamanı verimli bir seçenek hücre hareketlilik ve morfoloji çalışmaya sağlayan entegre bir yöntemini açıklar.

Otomatik bir canlı hücre Imager kullanarak basit geçiş/işgali iş akışı

Meme epitel hücreleri ve endotel hücreleri arasındaki çapraz konuşma, meme kanserinin ilerlemesine, tümör büyümesine ve metastaz yapmasına önemli ölçüde katkıda bulunur. Bu çalışmada meme kanseri hücrelerinden vasküler ve/veya lenfatik endotel hücreleri ile birlikte sferoidler yapılmış ve meme kanseri araştırmaları için in vitro sistem olarak uygulanabilirliklerini ortaya koymaktadır.

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Bu protokol, fotoototrofik şeker salgılayan siyanobakteriler ve heterotrofik mayalar dahil olmak üzere ko-kültürlerin kurulumu ve kantitatif izlenmesi için kapsamlı bir kılavuz sağlar.

Heterotrofik Mayayı Fototrofik Şeker Salgılayan Siyanobakterilerle Birleştiren Ko-Kültürlerin Birleştirilmesi ve Miktar Tayini

Bu makale, Brillouin mikrospektroskopisi kullanılarak 3D bir matriks içinde yaşayan sferoidlerin mekanik karakterizasyonu için bir protokolü tanımlar. Bu tamamen optik yöntem, mikro ölçekli çözünürlük ve nicel mekanik özelliklerle küresel görselleştirmeyi mümkün kılar. Bu yaklaşımın mekanik fenotipleme için etkileri vardır; örneğin, tümör sferoidlerinin patolojik durumlarını 3D mikro ortamda belirlemek.

Brillouin Spektroskopisi Kullanılarak Sferoidlerin Mekanik Haritalanması

Kanser metastazını incelemek için heteroselüler karışmayı yakalayan 3D kanser modellerine kritik bir ihtiyaç vardır. Çalışmamız, invazyon ve hücresel mekansal dağılımları incelemek için kullanılabilecek iskele ve iskelesiz bir ortamda heteromultisellüler stromal-epitel oluşumunu sunmaktadır.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Öğrenin Scepter Hücre Sayıcı ile hücre kültüründe otomatik hücre sayımı yapmayı. Bu el tipi cihaz, hücre çapı ve hacmini izleyerek deney tekrarlanabilirliğini artırır.

Hücre Kültürü sırasında Hücre Sayısını Belirleme Scepter Hücre Sayıcı

Daha fazla video keşfet