Hücre Kültürü sırasında Hücre Sayısını Belirleme Scepter Hücre Sayıcı

Asa hücre sayacı, hücreleri saymak, hücre çapını ve hacmini izlemek ve hücresel popülasyonların sağlığını ve kalitesini kontrol etmek için elde taşınan otomatik bir cihazdır. Gelişmiş doğruluk, kullanım kolaylığı ve hücreleri saymak için düşük maliyet dahil olmak üzere diğer sayma yöntemlerine göre önemli avantajlar sunar. Asayı kullanarak, hücreleri tek kullanımlık sensöre aspire etmek için grafik ekranındaki talimatları izleyin.

Hücreler daha sonra sayılır ve cihaz, bir bilgisayara yüklenebilen ve analiz edilebilen hücre konsantrasyonlarını ve istatistiklerini raporlar. Merhaba, ben Sonya. Ben Millport'ta bir araştırma bilimcisiyim ve bugün size asayı nasıl kullanacağınızı göstereceğim.

Hücre sayacı Hücreleri saymak, in vitro hücre kültürü için gerekli ancak sıkıcı bir adımdır. Tutarlı hücre konsantrasyonları, deneysel tekrarlanabilirlik ve doğruluk sağlar. Hücre sayımları, hücre sağlığını ve çoğalma hızını izlemek, sonraki deneyler, transfeksiyon veya enfeksiyon için ölümsüz veya transformasyon tohumlama hücrelerini değerlendirmek ve hız ve doğruluk ihtiyacına rağmen hücre bazlı tahlillere hazırlanmak için önemlidir.

Hücre sayımında, 400 araştırmacının %71'i bir hemo sitometre kullanarak hücre sayımı yaptı. Hemo sitometri ucuz olsa da, zahmetlidir ve kullanıcı yanlılığına ve kötüye kullanımına tabidir, bu da yanlış sayımlara neden olur. Hemo sitometrideki hata kaynakları arasında numunedeki eşit olmayan hücre dağılımı, numunede çok fazla veya çok az hücre bulunur.

Belirli bir hücrenin tanımlanan sayma alanına girip girmediğine dair öznel kararlar. Hemo sitometrenin kontaminasyonu, manuel sayma ile ilişkili sıkıntıyı hafifletmek için kullanıcı tous varyasyonu ve hemo sitometre dolum hızının varyasyonu. Araştırmacıların %29'u otomatik hücre sayma cihazları kullanarak hücreleri sayıyor.

Bununla birlikte, çoğu araştırmacı için, bu büyük tezgah üstü cihazlarla ilişkili fiyat, kullanımlarının önünde bir engeldir. Asa hücresi sayacı, kullanımı kolay bir el tipi formatta nispeten düşük bir maliyetle koter sayımının otomasyonunu ve doğruluğunu sunan otomatik bir el cihazıdır. Sistem, sinyal işleme, veri depolama ve grafik görüntüleme için analog ve dijital donanımın bir kombinasyonunu kullanarak minyatür bir formatta empedans tabanlı parçacık algılamanın Coter prensibini kullanır.

Tek kullanımlık sensör, hassas sıvı işleme kanalları ve elektronikleri ile geliştirilmiş mikron altı ve alt pikolitre çözünürlükte hücre boyutuna ve hücre hacmine göre ayrım sağlayan mikro fabrikasyon bir hücre algılama bölgesi ile tasarlanmıştır. Asa hücre sayacı, hücre popülasyonu istatistiklerini kullanılacak bir histogram olarak grafiksel olarak görüntüler. Asa hücre sayacı, fosfat tamponlu salin içinde tek bir hücre süspansiyonu hücresinin seyreltilmesiyle başlar.

Mililitre başına 10.000 ila 500.000 hücre konsantrasyonu optimaldir. 100 mikrolitre seyreltilmiş hücreyi 1.5 mililitrelik bir mikrogörüntüleme tüpü tüpüne aktarın. Enstrümanın arkasındaki düğmeyi basılı tutarak asa hücresi sayacını açın ve ekrandaki talimatların görünmesini bekleyin.

İstendiğinde, elektrot algılama paneli cihazın önüne bakacak şekilde asa ünitesinin ucuna bir sensör takın. Asa sensörleri, elektronik algılama bölgesi ve entegre hücre algılama elektrotlarına sahip hassas kalıplanmış bir numune alma odasından oluşur. Sensörler, mikron altı çözünürlükte hücre boyutunu ve alt pikolitre çözünürlükte hücre hacmini ayırt etmeyi mümkün kılar.

Tutarlı sensör mühendisliği, eşit numune hacimlerinin sayılmasını ve doğru boyut ölçümlerinin yapılmasını sağlar. Sensör takıldıktan sonra, sayma işleminin her adımını ekrandaki talimatlara göre aşağıdaki gibi gerçekleştirin. Ekran okuduğunda, pistona basmaya başlamak için pistonu basılı tutun, ekran daha sonra sensörü batırmayı, sensörü hücre süspansiyon çözeltisine daldırmayı ve hücre süspansiyonunu sensöre aspire etmek için pistonu serbest bırakmayı okuyacaktır.

Piston bir elektrik sinyali görevi görür ve numuneyi artı ölü hacmi sensöre çeker. Daldırma hızı veya doğruluğu, pipetlemede olduğu gibi önemli değildir. Hazır olduğunda bu işlem birkaç saniye sürecektir.

Cihaz bip sesi çıkaracak ve sampyüklendi ekranda görüntülenecektir. Numune sensöre yüklendikten sonra, hücre boyutunu ve hücre hacmini değerlendirmek için algılama bölgesinden çekilir. Daha sonra mikro kanallar aracılığıyla, 50 mikrolitre numune sayıldıktan sonra, sensör cihaza sayımı durdurmasını söyler.

Sayım tamamlandıktan sonra, cihaz ekranı sayım tamamlandı mesajını okuyacaktır. Lütfen sensörü çıkarın ve atın. İstemi izleyin ve sensörü çıkarın ve atın.

Cihaz daha sonra ekranında hücre boyutu veya çapının bir histogramını ve mililitre başına hücre konsantrasyonunu gösterecektir. Sayım tamamlandıktan ve histogram cihazda görüntülendikten sonra, geçiş düğmesine basarak kapıları uygulayın, histogram profiline göre kapıyı otomatik olarak ayarlamak veya önceki sayımdaki kapıları kullanmak için otomatik geçitlemeyi seçin veya sonuncuyu kullanın. Seçimden bağımsız olarak, kapılar manuel olarak iyi hale getirilebilir.

Verileri ayarlayın, sol kapıyı seçmek için geçiş düğmesine tekrar basın ve kapıyı istediğiniz gibi hareket ettirmek için geçişi kaydırın. Ardından sağ kapıyı etkinleştirmek için geçiş düğmesine tekrar basın ve sağ kapıyı yerleştirmek için geçişi kaydırın. Tekrar tıklayın.

Yeni bir hücre konsantrasyonu, ortalama hücre hacmi ve çapı görüntülenecektir. Geçiş aynı zamanda ekranı tarih saati, ortalama hücre boyutu ve ortalama hücre hacmi arasında değiştirmek için her iki tarafta da olabilir, 72 histograma kadar cihazın kendisinde saklanabilir. Verileri kişisel bir bilgisayara yüklemek için, cihazı USB kablo bağlantı noktası aracılığıyla PC'deki görüntü ekranına takın.

Yazılımı başlatmak için asa yazılım uygulamasına çift tıklayın. Ardından bağlan'a tıklayın. Tüm sayımlar otomatik olarak yazılıma taşınacaktır.

Asa uygulama yazılımı, kültürün popülasyon dağılımını hacim veya çap olarak detaylandıran histogramı görüntüler. İndirilen dosyalar daha sonra Microsoft Excel'e aktarılabilir, burada ham veriler belirtilen hücre çaplarının veya hücre hacimlerinin kutularında görüntülenecektir. Sayım için 19 farklı hücre hattı hazırlandı ve aculter sayacı kullanılarak teorik başlangıç konsantrasyonları belirlendi.

Bu hücre süspansiyonları daha sonra teorik hücre konsantrasyonlarında hücre süspansiyonları elde etmek için daha da seyreltildi. Asa hücre sayacı daha sonra hücre konsantrasyonlarını belirlemek için kullanıldı. Bu şekil, teorik hücre konsantrasyonu ile birlikte beş temsili hücre hattı için ölçülen beş seyreltmeyi göstermektedir.

R-kare değerleriyle gösterildiği gibi yüksek doğrusallık derecesi, asa sayımının geniş bir doğrusal çalışma aralığında test edilen hücre hatları için güvenilir bir yöntem olduğunu göstermektedir. Asa sayımından elde edilen verilerin, kozant sayımından elde edilen sayımlarla karşılaştırıldığı asa sayımının genel nispi doğruluğu burada gösterilmiştir. Asa hücre sayımlarının günlüğü, coter sayımlarının kütüğüne karşı çizilir ve test edilen tüm hücre hatlarında asa sayımlarının coter sayımlarıyla eşleştiğini gösterir.

19 hücre hattının sayımı, bir Z iki coulter sayacı kullanılarak gerçekleştirildi. Asa hücresi sayacı, V hücresi veya sayım test sistemi gibi otomatik görme tabanlı bir sayaç ve bir hemo TER sayımı, aynı hücre başlatma süspansiyonu ve aynı seyreltmeler kullanılarak üreticinin talimatlarına göre gerçekleştirildi. Bu şekilde gösterilen sonuçlar, asa sayımı ile ölçülen hücre konsantrasyonlarının, yüksek doğrusallığa sahip teorik hücre konsantrasyonlarıyla yakından eşleştiğini göstermektedir.

Her bir hücre hattının her seyreltilmesi için yüzde varyasyon katsayısı veya CV hesaplandı. Burada gösterilen her bir sayma sistemi için, çalışma aralığındaki hücre konsantrasyonu ve sayma yöntemine göre 19 hücre hattı üzerindeki ortalama CVS yüzdesidir. Asa hücre sayacı, hemo sitometre sayımından daha hassastır ve daha küçük standart sapmalar ve daha küçük ortalama varyasyon katsayıları gösterir.

Asa sayımı, hemo sitometriden 10 kat daha hızlıdır ve diğer otomatik sayaçlardan da daha hızlıdır. Burada SF dokuz, MCF yedi ve HC 2 93 hücreleri bu videoda açıklanan yöntemler kullanılarak sayıldı. Hücre konsantrasyonunu ölçmek için gereken ortalama süre kaydedildi.

Hemo sitometrinin numune başına sadece bir kez yapıldığını unutmayın. Asa, hücre boyutuna göre ölçümler yapar. Böylece, hücresel morfolojideki herhangi bir değişiklik histogramda yakalanabilir.

Sağlıklı kültürler, çan şeklinde güzel bir Gauss dağılımı sergilerken, sağlıksız hücreler bitlenir ve histogramda sola doğru bir kaymaya neden olur. Benzer şekilde, %50 ölü hücrelerden oluşan bir popülasyon %50 canlı hücrelerle karıştırıldığında histogram kaymaları da gözlendi. Az önce size kırlangıç için yeni asa hücre sayacını nasıl kullanacağınızı gösterdim, bu da araştırmacıların hücrelerini sayma biçiminde devrim yaratıyor.