Name: Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 10 s
Description: Öğrenin Plasmodium falciparum ile sivrisinek enfeksiyonu protokolünü; gametosit kültürü hazırlama, membran besleme ve midgut diseksiyonu yöntemlerini keşfedin. Bu teknik sıtma bulaş dinamiklerini incelemek için güvenilir bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

A. gametocyte kültürünün hazırlanması: <ol><li> Taze insan kanı ve bir su banyosunda 37 o C serum getirin. </li><li> Davlumbaz, steril koşullar altında, bir eppendorf tüpe 1 ml ılık kan pipetlemeyin. 2200 rpm&#39;de 5 dakika santrifüj kan dönerler. Eritrositler pelet olmalıdır; açık serum çıkarın ve atın. Gametocytes için tüm kan elde etmek için yeni serum 3 kez eşit hacmi ile erythocytes yıkayın. </li><li> CO 2 inkübatör veya mumluklar gametocyte kültürü al. Bu kültür, kültür 16 gün sivrisinek RPMI medya beslenen üzerinde muhafaza edilmelidir. Gametocytemia (% kültür 16 gün) belirlemek için bir damla kan ile bir cam slayt üzerinde ince bir yayma ve bir Geimsa leke gerçekleştirmek. Parazit kültürünün bir alanda gamet sayısını belirler. 2 aralığında genellikle% 4. Istenen final% gametocytemia (% 0.3 -1) hedeflere ulaşmak için gerekli bütün kan hacmini hesaplayın. </li><li> , Bir pipetlemeyin kullanarak gametocyte kültür medya çoğu çıkarın özen rahatsız veya parazitler emmek (medya pembe / kırmızı ışık olacak parazitler siyah olarak görünecektir) değil. Medya ve parazitlerin 15 ml şahin tüpe geri kalanı pipetleyin. 2200 rpm&#39;de 5 dakika santrifüj Spin. Parazitler ve eritrositler pelet, kaldırmak ve rahatsız edici parazitler olmadan supernatant medya atın. </li><li> Önceki hesaplamalara göre istenilen son gametocytemia vermek için hazırlanmış tam kan hacmi (adım A2) ile parazitler birleştirin. Pipetleyin iyice karıştırın. (~ 1 dakika) </li></ol> Bu sivrisinek yem örnek. Bir su banyosunda 37 ° C&#39;de tutun. B. Beslenme sivrisinek: <ol><li> Anofel sivrisinek (~ 30-50) bir lastik bant veya fincan ile birlikte karton kapak güvenli file örgü ile kaplı wax kaplı karton bardak içine koyun. Biz bu adımı için bir pil ile çalışan aspiratör kullanın. </li><li> Kauçuk borular her iki tarafında cam besleyiciler memeleri ekleyerek sirkülasyon su banyosu hazırlayın. Bir dizi gibi çok sayıda besleyici olarak bağlayın; serisinin bir ucunu su banyosu (besleyiciler ile suyu iter parçası) sirkülatör boru ile bağlanmış olması gerekir, serinin diğer ucunu kauçuk boru oluşmalıdır dolaşan su banyosu içine boşaltmak için izin banyo batık. Su, yaklaşık 37 o C su banyosuna geri besleyiciler dolaşan ve kadar banyo açın . Bu kan sıcak tutmak ve parazitler canlı tutmak esastır. </li><li> Membran (gergin parafilm küçük kareler), besleyici açılış için sıkı bir şekilde yapışması basıncı kullanarak, cam membran besleyici etrafında uzanan hazırlayın. Bu membran cilt taklit eder. </li><li> Bir besleyici membran her sivrisinek fincan ve kelepçeler veya bant kullanarak güvenli besleyiciler üzerine yüzü aşağı yerleştirin. Sivrisinek fincan içinde erişebilmesi için membran net ile aynı hizada oturmak gerekir. </li><li> Besleyici boyun dikkatle pipet parazit kan unu (adım A5), kan sivrisinekler kan erişebilmesi için membran başvurarak, rezervuar içine boyun aracılığıyla tüm yol gider emin olun. Biz yaklaşık 200 ul besleyici ortalama kan kullanabilirsiniz, ancak bu değişebilir. </li><li> Sivrisinek beslemek için izin ver. Biz onlara ≈ 30 dakika boyunca beslemek için izin (theexperiment bağlı olarak, değişken; en deneyler için, bazen kaç zaten karın kan içeriğine bakarak yemek almış izleme.) </li><li> Beslemeden sonra, sivrisinek bardak besleyiciler çıkarın. Su banyosu kapatın ve tüp besleyiciler kesmek. </li><li> Membran çıkarın ve% 10 çamaşır suyu ve su ile durulayın dekontamine besleyiciler emmek. Büyük bir biohazard yuvasına küçük bir biyolojik tehlike çanta ve mevduat içine yerleştirin (membranlar, kağıt havlu, eldiven, vb.) Malzeme kirlenmiş. </li><li> Buzdolabı veya soğuk oda bardak koyarak sivrisinek anestezisi. Bir kez sivrisinekler tamamen anestezi, bir buz kovasının içine gömülü bir petri aktarabilirsiniz. Sıralama sivrisinek, kan yemeğin herhangi bir işaret için karınlarına dikkatle incelemeniz ve yem etmedi bu atın. Bazı sivrisinek, diğerleri yutulur kan dar bir bant göstermek ise tamamen tıkanmış olacak &quot;beslenen&quot; olarak kabul edilir. Geri beslenen sivrisinekler karton bardak içine koyun. </li><li> Sivrisinek bir şeker yemek (10% sakaroz batırılmış bir parça pamuk) sağlayın ve 7 gün boyunca, normal insectary şartlar altında inkübe edin. Her gün, sivrisinekler ölüm oranı açısından takip edilmelidir. Ayrıca, pamuk, gıda yoksun böylece, sakaroz ıslak olmalıdır. Bu sivrisinek nemli tutmak için, distile su ile ıslatılmış kağıt havlu eklemek için, henüz daha iyidir. Bu sivrisinek, P. falcipraum bulaşmış, tüm bakım sivrisinek yok ESCAP böylece alınmalıdıre fincan. , Küçük bir cagefor çifte koruma bardak koymak en iyisidir. </li></ol> C. sivrisinek midguts Diseksiyon ve ookist yükleri tahmin: <ol style="margin-top: 0in"><li style="tab-stops: list .5in"> Pille çalışan bir aspiratörü kullanarak karton bardak aspire sivrisinek (adım B). Anestezisi sivrisinek, çıkarılabilir aspiratör rezervuar içinde, soğuk oda hareket ya da gömme rezervuar, en az 5 dakika veya sivrisinek durdurma hareketli kadar buz. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Rezervuar buz gömülü bir cam petri anestezi sivrisinek aktarın. Sivrisineklerin tek bir katmana yayılmış ve, plastik bir petri kapak ile kapatın. Tabağına ağırlanamaz Sivrisinekler rezervuar, soğuk oda veya buz geri kalır. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Ince uçlu forseps kullanarak, bir diseksiyon mikroskobu altında monte edilmiş bir cam slayt üzerinde bulunan 100 ul PBS çanak tek bir sivrisinek aktarmak. Soğutulmuş petri kapsamındaki diğerleri bırakın. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Ince uçlu forseps kullanarak, toraks ve posterior karın sivrisinek tutun. Midgut maruz kadar ayrı vücut çekin. Gut.The gut fazla doku çıkarmak için forseps kullanın, bir beyaz gibi, vücut kesesi gibi görünüyor. % 0.2 Merkürokrom 5-10 ul 12-iyi bir cam slayt ve batırmayın iyi bir gut.Mount gut fazla doku çıkarın. Squash diğer sivrisinekler için 12-iyi slayt kadar nemli kağıt towel.Continue karkas ve atın doludur. Bir cam lamel ile monte cesaret örtün. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Işık mikroskobu altında soluk / açık pembe bağırsak dokusu karşı parlak pembe leke yuvarlak ookistleri arıyorsanız, cesaret inceleyin. Ookistleri Sayısı kayıt ve sonraki örnek devam edin. Tüm deneysel tedaviler tüm sivrisineklerin devam edin. </li><li style="tab-stops: list .5in"> Bittiğinde, slayt temiz bir kağıt havlu ile silin. Küçük biohazard torbaya, cesareti ile kağıt havlu ve karkaslar ile kağıt havlu koyun ve çöp kutusuna atın. Eldiven prosedür boyunca giyilir. Bakım enfekte sivrisinek kaçmasına izin alınır. </li></ol>

<ol><li>Avila, S. L., Ferreira, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+diagnosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Malaria diagnosis: a review.</a> Braz J Med Biol Res. 29 (4), 431-443 (1996).</li>
<li>Bell, A. S., Ranford-Cartwright, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+real-time+PCR+assay+for+quantifying+Plasmodium+falciparum+infections+in+the+mosquito+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A real-time PCR assay for quantifying Plasmodium falciparum infections in the mosquito vector.</a> Int J Parasitol. 34 (7), 795-802 (2004).</li>
<li>Collins, K. M., Hochberg, L. P., Ryan, P. R., Collins, W. E., Wirtz, R. A., Ryan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Plasmodium+malariae+infection+in+mosquito+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Trop+Med+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Quantification of Plasmodium malariae infection in mosquito vectors.</a> Ann Trop Med Parasitol. 98 (5), 469-472 (2004).</li>
<li>Czeher, C., Labbo, R., Djibrilla, A., Here, L., Arzika, I., Duchemin, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELISA+study+of+oocyst-sporozoite+transition+in+malaria+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">ELISA study of oocyst-sporozoite transition in malaria vectors.</a> Parasite. 13 (3), 257-261 (2006).</li>
<li>Haghdoost, A. A., Mazhari, S., Bahadini, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+the+results+of+light+microscopy+with+the+results+of+PCR+method+in+the+diagnosis+of+Plasmodium+vivax%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vector+Borne+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparing the results of light microscopy with the results of PCR method in the diagnosis of Plasmodium vivax.</a> J Vector Borne Dis. 43 (2), 53-57 (2006).</li>
<li>Patsoula, E., Spanakos, G., Sofianatou, D., Parara, M., Vakalis, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-step%2C+PCR-based+method+for+the+detection+and+differentiation+of+Plasmodium+vivax%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Trop+Med+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A single-step, PCR-based method for the detection and differentiation of Plasmodium vivax.</a> Ann Trop Med Parasitol. 97 (1), 15-21 (2003).</li>
<li>Osta, M. A., Christophides, G. K., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mosquito+genes+on+Plasmodium+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Effects of mosquito genes on Plasmodium development.</a> Science. 303 (5666), 2030-2032 (2004).</li>
<li>Srinivasan, P., Abraham, E. G., Ghosh, A. K., Valenzuela, J., Ribeiro, J. M., Dimopoulos, G., Kafatos, F. C., Adams, J. H., Fujioka, H., Jacobs-Lorena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+Plasmodium+and+Anopheles+transcriptomes+during+oocyst+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of the Plasmodium and Anopheles transcriptomes during oocyst differentiation.</a> J Biol Chem. 279 (7), 5581-5587 (2004).</li>
</ol>

Plasmodium enfeksiyon ve enfeksiyon fenotip belirlenmesi bazı farklılıklar olabilir ve farklı laboratuvarlar, değişik teknikler takip edebilirsiniz.

sivrisinekler ve enfeksiyon fenotip belirlenmesi plasmodium falciparum enfeksiyonlar protokol

Protocol for Plasmodium falciparum Infections in Mosquitoes and Infection Phenotype Determination

Sıtma için potansiyel bir gen refrakter olarak tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde Plasmodium enfeksiyonları önlemede rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, sivrisinek Plasmodium enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Gametocyte kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı hazırlamak ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol

Bir genin sıtma için potansiyel olarak refrakter olduğu belirlendiğinde, ... içindeki Plasmodium enfeksiyonlarını önlemedeki rolü açısından değerlendirilmelidir.

Ben, Johns Hopkins Halk Sağlığı Okulu'ndaki Sıtma Araştırma Enstitüsü'nden George Dimopoulos; şimdi size Anopheles gambiae sivrisineklerinin Plasmodium falciparum parazitleri ile nasıl enfekte edileceği ve sivrisinek orta bağırsaktaki enfeksiyon fenotipinin nasıl belirleneceği konusunda bir prosedür göstereceğiz. Bu prosedür için gerekli temel ekipmanlar arasında parazit kültürü için bir CO2 inkübatörü bulunmaktadır. Alternatif olarak, eğer CO2 inkübatörünüz yoksa, bir mum kavanozu kullanabilirsiniz.Ayrıca, elbette bir böcek evi ile diseksiyon mikroskopları ve ışık mikroskopları gibi standart moleküler biyoloji ve hücre biyolojisi ekipmanlarına ihtiyacımız var. Su banyolarına, bir sivrisinek membran besleme sistemine ve santrifüjlere ihtiyacımız var.Merhaba, benim adım ISH ve Dr. George Depos'un laboratuvarındayım. Ben bir doktora sonrası araştırmacıyım. Benim adım Lindsay Garver ve ben bir doktora öğrencisiyim.Plazma enfeksiyonunun ilk adımı, plazma kültürünün hazır olmasıdır. Karbondioksit inkübatörünüz yoksa, altı kuyucuklu plakayı ve içine yerleştirilmiş gato set kültürünü koyabileceğiniz bir mum kavanozu kullanabilirsiniz; mumu yakın ve ardından kavanozu mühürleyin. İlk adım, taze insan kanı ve serumunu hazırlayıp, önce çözünmeleri ve aynı zamanda ısınmaları için 37 °C'lik bir benmariye yerleştirmektir çünkü gerçekten sıcak kan ve sıcak seruma ihtiyacınız vardır.Kanı hazırlamak için, taze insan kanının bir kısmını ayrı bir tüpe aktarmanız gerekir. Taze kan, eritrositleri çöktürmek için beş dakika boyunca 2000 RPM hızda santrifüjlenmelidir. Santrifüj işlemi tamamlandıktan sonra, üstteki berrak sıvı atılmalı ve RBC olan kırmızı peletler insan serumu ile üç kez yıkanmalıdır.Peletin üzerine eşit hacimde insan serumu ekliyoruz, karıştırıyoruz ve beş dakika boyunca 2000 RPM hızında tekrar santrifüj ediyoruz. Bu adım üç kez tekrarlanır. Son olarak, ganote kültürüne eklenmeye hazır eritrosit peletleri elde edilir.CO2 inkübatöründe bulunan plasmodium kültürü, 16 gün boyunca RPM1 mediumu içerisinde tutulmalı ve 16. günde enfeksiyon işlemi için hazır hale getirilmelidir. Plasmodium kültürü ile çalışıldığından, her adımda dikkatli olunmalıdır. İlk adım olarak, parazitler BSL-2 laboratuvarında yetiştirilmeli ve işlemler bir steril kabin (hood) içerisinde gerçekleştirilmelidir.Tüm pipet uçları ve tüm eppendorf tüpleri biyotehlike kutusuna atılmalıdır; diğer solüsyonlar ve pipetmanlar ise %10'luk çamaşır suyu ile yıkanmalıdır ve işlem sırasında eldiven ile laboratuvar önlüğü giyilmelidir. 16. gün kültürü için lam üzerine küçük bir damla kan alınmalı, yayma yapılmalı ve ardından Giemsa boyama uygulanarak ışık mikroskobu altında incelenmelidir.16 günlük gametosit kültüründen GAMMAT yüzdesini belirleyebiliriz. Kuyu dibinde kolayca çöken parazitleri rahatsız etmemeye veya vakumlamamaya dikkat ederek medyanın çoğunu uzaklaştırın, ardından kalan medya ve parazitleri pipetle çekin. Kırmızı kan hücreleri içindeki parazitleri karıştırarak parazitleri ayırın; ardından bunlar, beş dakika boyunca 2000 RPM hızda döndürmek üzere bir santrifüje yerleştirilir.Santrifüjden sonra, parazitler eritrositlerle birlikte çökecektir. Üst faz RPMI besiyeridir ve dipteki pelet parazitleri içerir. Eritrositlerle birlikte, RPMI olan üst fazı uzaklaştırın.Paraziti ve kırmızı kan hücrelerini rahatsız etmemek için besiyeri bakımına dikkat edilmelidir. GIMs 10 ile belirlenen GATOT yüzdesi genellikle %2 ile %4 arasındadır. Santrifüj sonrası kırmızı kan hücreleri ve parazitler hazır olduğunda, bunlar birlikte karıştırılır ve eklenmesi gereken kan hacmi nihai gatot yüzdesi ile belirlenir. Bu oran kesin olmalı ve genellikle %0,3 ile %1 arasındadır; bu karışım fyis sivrisineklerinin beslenmesi için kullanılacaktır.Presidium S Enfeksiyonu için bu, sivrisineklerin membranla beslenmesi için kullandığımız cam bir besleyicidir. Kanı gördüğünüz küçük delikten içeri aktarırız ve kan burada muhafaza edilir. Alt kısmın yan tarafında, 37 °C'ye ayarlanmış olan su banyomuza bağlı iki nozul bulunur.Beslemeyi gerçekleştirmek için besleyiciyi hazırlamak amacıyla, küçük bir parça affil alırız. Parçayı iki ucundan ve dört yanından gerdiririz, ardından cam besleyicinin açık tarafına yerleştirerek cildi taklit eden ince bir membran tabakası oluştururuz. Buna membranla besleme denir.Bu, suyu 37 °C'de tutan ve aynı zamanda kanın 37 °C'de sıcak kalmasını sağlamak için suyu cam besleme düzeneği boyunca dolaştıran bir sirkülasyonlu su banyosudur. Cam besleme düzeneğini küçük kapilerler aracılığıyla sirkülasyonlu su banyosuna bağlıyoruz ve suyun dolaşması için su banyosunu çalıştırıyoruz; su ve kan iki ayrı bölmede oldukları için asla birbirine karışmazlar. Bu, phis Gambi sivrisineklerini içeren küçük bir kaptır.Başlangıçta, cam besleyici kafese yerleştirilir ve film tabakası olan membran, ağla aynı seviyeye gelecek şekilde cam besleyicinin üzerine bir ağırlık konur. Parazit içeren, gerekli gambotto yüzdesine sahip yaklaşık 200 µL kan, kanın tamamen aşağı indiğinden ve sivrisineklerin kana erişebildiğinden emin olunarak besleyiciye eklenir.Besleme işlemi yaklaşık 30 dakika boyunca sürdürülür. Besleme tamamlandığında, cam besleyici %10 çamaşır suyunda iyice yıkanır; geri kalan membranlar ve bantlar sökülerek biyotehlike kutusuna atılır. Kan beslemesinden sonra, beslenmeyen sivrisinekler beslenenlerden ayrılmalıdır.Bunu yapmak için, kanla beslenmiş sivrisinekleri içeren küçük kapları beş ila 10 dakika boyunca soğuk odaya koyarak sivrisinekleri sersemlettik. Görüldüğü üzere, sivrisinekler soğukta zaten hareketsizleşmiş durumdadır. Kapağı açıyoruz ve sivrisinekleri, süreç boyunca soğuk tutulmaları ve kaçmalarını önlemek amacıyla bir buz kovası üzerinde tutulan küçük bir petri kabına aktarıyoruz.Unutmayın, bunlar plasmodium enfekte olmuş sivrisineklerdir, bu nedenle kaçmalarını önlemek için her türlü önlem alınmalıdır. Sivrisinekler soğuk odaya indirildikten sonra, onları oda sıcaklığında tutulan normal böcek odasına transfer ederiz; ancak sivrisinekleri her zaman buz kovasında tutulan bir petri kabına koyarız, böylece her zaman hareketsiz kalırlar. Beslenmiş sivrisineklerin beslenmemiş olanlardan nasıl ayırt edilebileceğini görebilirsiniz.Beslenenlerin içinde kan var. Onlar tamamen şişmiş durumda. Bazıları ise kanla kısmen beslendikleri için tamamen şişmemişler.Bazılarının karın bölgelerinde az miktarda kan bulunurken, diğerlerinin karın bölgelerinde çok fazla kan vardır. Beslenmemiş olanların karın bölgelerinde hiç kan yoktur, bu nedenle beslenmiş ve beslenmemiş olanları çok kolay bir şekilde ayırt edebilirsiniz. Burada, kanla beslenmiş yetişkin dişi sivrisinekler görülmektedir; bu sivrisinekleri petri kabından balmumu kaplı karton bardaklara aktaracağız.Kanla beslenen sivrisinekleri kaplara yerleştirdikten sonra, inkübe edeceğiniz sonraki yedi gün boyunca %10 sükrozla beslenebilmeleri için kaplara %10 sükroza batırılmış küçük bir pamuk parçası ve kabın içindeki nemi korumak için küçük, katlanmış bir kağıt havlu yerleştirdik ve petrol kabı ile kapattık. Plazmodium ile enfekte olan sivrisinekler başka bir küçük kafese konulmuştur, böylece çift korumaya sahip olurlar ve kanla beslemeden yedi gün sonra kafesi, 27 °C sıcaklıkta ve %80 nemde tutulan BSL-3 laboratuvarına yerleştireceğiz. Böcek odasında çift kafesli kutuda tutulan sivrisinekler, böcek odasından çıkarılarak sivrisinekleri bayıltmak için soğuk odaya götürülürler.Sivrisinekler etkisiz hale getirildikten sonra, bir buz kovası üzerinde tutulan bir petri kabına aktarılırlar. Şimdi sivrisinekleri diseke etmeye hazırlanıyoruz. Orta bağırsağı diseke edeceğiz ve kisti arayacağız.İlk adım, diseksiyon mikroskobuna yerleştirilmiş bir lam üzerine yüz mikrolitre PBS eklemektir. Bir sonraki adımda, ince uçlu bir pens kullanılarak, petri kabındaki tek bir sivrisinek diseksiyon mikroskobuna yerleştirilmiş lam üzerindeki PBS'ye aktarılır.Diğerleri soğutulmuş petri kabında bırakılır. Sivrisinekleri dissekt etmek için, sivrisinekleri bir forsepsle toraks kısmından, diğer forsepsle ise arka abdomen kısmından tutun. Ardından, orta bağırsak açığa çıkana kadar vücut kısmını yavaşça çekin.Beyaz bir kese gibi görünmektedir; fazla dokuları ve diğer vücut kısımlarını uzaklaştırmak için pens kullanın. Evet, bu beyaz kese benzeri yapıda olan ve os içeren orta baştır. Şimdi bu orta bağırsagı 12 kuyucuklu cam lam üzerine aktaracağız ve orta bağırsağı sabitlemek için 5 ila 10 µL 0.2% micro pro içine daldıracağız, ardından lamı geri alacağız.Kapak lamıyla birlikte, bu adımı tüm enfekte sivrisinekler için gerçekleştiriyoruz. Bağırsak parlak pembe görünmektedir ve oosit yükünü saymak için bu lamı bir ışık mikroskobuna aktaracağız. Şu anda enfekte sivrisineklerden diseke edilen orta bağırsağa bakıyoruz.Orta bağırsak pürüzsüz bir gövdeye benzer ve rom boyaması ile çok hafif pembemsi bir renk alırlar; O SST ise soluk pembe bağırsak dokusuna karşı parlak pembe görünmelidir. Ancak bu orta bağırsaklar enfekte sivrisineklerden alınmış olmasına rağmen herhangi bir sst göstermemektedirler, dolayısıyla enfekte olmamış olabilirler. Eğer bir orta bağırsak enfekte olsaydı, S küçük, parlak pembe bir daire şeklinde görünürdü ve bazen tek bir orta bağırsak içerisinde 22 500'e kadar çok sayıda lag bulunabilir.Bu prosedür, insan kanının plasmodium rum parazitleri ile enfekte edilmesini, bu enfekte kanın Gambiya sivrisineklerine verilmesini, bu sivrisineklerin orta bağırsağının diseke edilmesini ve enfekte orta bağırsaklardaki OSIS sayımlarının belirlenmesini içermektedir. Bu teknik önemlidir çünkü laboratuvar ortamında kopyalayabildiğimiz insan sıtması bulaşmasına en yakın yaklaşımdır.

protocol-for-plasmodium-falciparum-infections-mosquitoes-infection

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Dang virüsü için potansiyel refrakter olarak bir gen tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde viral enfeksiyonların önlenmesinde rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, dang sivrisinek enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı virüs büyüyor ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Dang Enfeksiyonlar Sivrisinekler (A. aegypti) ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi için protokol

Kemirgen sıtma parazitleri Genetik haçlar sivrisineklerin genetik olarak iki farklı parazitler besleyerek yapılmaktadır. Rekombinant döl sivrisinek enfekte farelerde ısırık izin sonra fare kandan klonlanmış. Bu video genetik haçlar üretmek nasıl...

Kemirgen Sıtma Parazitler Genetik Haç üretimi için protokol

Sıtma bulaştıran sivrisinekler, yalnızca moleküler teknikler kullanılarak tespit edilebilen epidemiyolojik olarak önemli bir dizi özelliğe sahiptir. MALDI-TOF tabanlı bir SNP genotipleme platformu kullanarak, sıtma vektörlerinin birden fazla temel özelliğini (tür, böcek ilacı direnci, parazit enfeksiyonu ve konakçı seçimi) aynı anda tespit etmek için bir test geliştirdik.

Sıtma verici Sivrisinekler için bir çok algılama Deneyi

Deneysel serebral sıtmanın bir fare modelini tarif ediyoruz ve manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak inflamatuar ve mikrovasküler patolojinin in vivo olarak nasıl izlenebileceğini gösteriyoruz.

Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanarak Deneysel Serebral Sıtma Bir Modelinde Ödem Gelişimi ve Mikrovasküler Patolojinin İn Vivo Takibi

İnsan sıtma parazitlerine kemirgen sıtma parazitlerinin yaşam döngüsü ve biyolojisinin çarpıcı benzerlikleri nedeniyle, kemirgen sıtma modelleri sıtma araştırmaları için vazgeçilmez hale gelmiştir. Burada, vahşi tip ve transgenik kemirgen sıtma türlerinin fenotipeksi analizinde kullanılan en önemli tekniklerden bazılarını standardize ettik.

Kemirgen Sıtma paraziti Asexual ve cinsel kan aşamaları ve sivrisinek aşamaları phenotypic Analizi

Sıtma parazitlerinin sivrisinek aşamaları üzerinde ayrıntılı araştırmalar, etkili bulaşma engelleme stratejileri tasarlamak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol, enfeksiyöz gametositlerin etkili bir şekilde nasıl kültüreılacağını ve daha sonra bu gametositlerin sivrisineklere nasıl beslendiğini gösterir P. falciparumsivrisinek aşamaları .

Plazmodium falciparum Yapay Membran Besleme Yoluyla Gametosit Kültürü ve Sivrisinek Enfeksiyonu

Bu protokol, sivrisineklerde tükürük bezi sporozoitlerini tespit etmek için sandviç enzime bağlı bir immünosorbent testini tanımlar. Kolayca bulunabilen monoklonal antikorları kullanan yöntem, Plasmodium falciparum veya Plasmodium vivax taşıyan sivrisineklerin uygun maliyetli, yüksek verimli tespitini sağlar. Yöntem, vektör araştırmaları da dahil olmak üzere sıtma bulaşma araştırmaları için uygundur.

Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi Kullanılarak Anofel Sivrisineklerinde Plasmodium Sporozoitlerin Tespiti

Standart membran besleme testi (SMFA), potansiyel sıtma önleyici bileşiklerin değerlendirilmesi ve tanımlanması için altın standart olarak kabul edilir. Bu yapay besleme sistemi, bu tür bileşiklerin Plasmodium falciparum parazitinin yoğunluğu ve prevalansı üzerindeki etkilerini daha fazla değerlendirmek için sivrisinekleri enfekte etmek için kullanılır.

Anofellerde Plasmodium falciparum Enfeksiyonunun Tespiti için Standart Membran Besleme Testi

Sıtma, enfekte sivrisinekler tarafından Plasmodium'un sporozoit aşamasının aşılanması yoluyla bulaşır. Transgenik Plazmodyum , sıtmanın biyolojisini daha iyi anlamamızı sağladı ve sıtma aşısı geliştirme çabalarına doğrudan katkıda bulundu. Burada, transgenik Plasmodium berghei sporozoitleri üretmek için aerodinamik bir metodolojiyi açıklıyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Plasmodium berghei Sporozoitlerinin Üretilmesi

Kimyasal genetik, bir kapı bekçisi kalıntısının, hedef lokusta farklı bir yan zincir içeren bir amino asit ile değiştirilmesini içerir. Burada, cdpk1'in hipomorfik bir alelini içeren mutant bir parazit oluşturduk ve mutant arka planda parazit tarafından benimsenen telafi edici yolları belirledik.

Bitki Benzeri Kinazların Hipomorfik Alelini Barındıran Mutant Bir Sıtma Parazitinde Telafi Edici Yolların Gelişimini Anlamak

Plasmodium cinsel gelişimi sivrisinek orta bağırsağında meydana gelir. Parazitin cinsel aşamalarını hedeflemek, bulaşmayı engellemek için umut verici bir stratejidir. Zigot oluşumundan sonra nanolusiferaz eksprese eden transgenik bir P. berghei olan Ookluc'u geliştirdik ve iletim bloke edici bileşiklerin yüksek verimli taramasını sağladık. Bu makale, Ookluc kullanarak tarama yöntemlerini detaylandırmaktadır.

Ookluc: İletim Bloke Edici Bileşikleri Tanımlamak için Bir Plasmodium berghei Hattı

Öğrenin Plasmodium falciparum ile sivrisinek enfeksiyonu protokolünü; gametosit kültürü hazırlama, membran besleme ve midgut diseksiyonu yöntemlerini keşfedin. Bu teknik sıtma bulaş dinamiklerini incelemek için güvenilir bir yöntem sunar.

Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol

Daha fazla video keşfet