Name: Dinamik Kelepçe Tekniği ile Sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlar NMDA Reseptör İletkenlik Uygulama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-21T15:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Öğrenin, dinamik kelepçe tekniğiyle sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlarına NMDA reseptör iletkenliği uygulamayı. Bu yöntem, canlı nöronlarda reseptör aktivasyonunun elektriksel etkilerini hassas şekilde incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma MH084494 (CJL) ve MH079276 ve NS060658 (CAP) tarafından desteklenmiştir.

1. Dilim Hazırlık <ol><li> Titreşen bir mikrotom kullanarak beyin dilim kesin. University of Texas at San Antonio Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu uygun bir titreşimli mikrotom (Microm HM 650V) kullanarak bir izofluran anethetized Sprague-Dawley sıçan (Charles River Laboratuvarları) 240 mm yatay orta beyin dilimleri hazırladı. </li><li> Kaydetmek için hazır olana kadar bir kuluçka odasında dilim tutun. (ACSF; mM) 32 ° C'ye kadar ısıtılır ve yapay beyin omurilik sıvısı ile dolu bir inkübasyon kabı kullanın: 126 NaCl, 2.5 KCl, 1.25 NaH 2 PO 4, 4 MgCl 2, 2, CaCl 2, 10 dekstroz, 25 NaHCO 3 , 1.3 askorbik asit, 2.4 sodyum piruvat ve 0.05 glutatyon. </li></ol> 2. Elektrofizyolojik Kayıt <ol><li> 35 bir yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) ° C perfüze olduğu hücre içi kayıt donatmak için dilim aktarın. Biz bu 2mm MgCl 2 ve glutatyon atlandı hariç, 1.2 'de aynı aCSF kullanabilirsiniz . Yatay hazırlanan dilim için, genellikle orta hat boyunca dilim iki eşit parçaya böler. </li><li> Hedef nöron gözünüzde canlandırın. Biz bir degrade kontrast görüntüleme sistemi ile bireysel substantia nigra dopaminerjik nöronların görüntülendi. </li><li> Elektronik bir elektrot çektirmenin kullanarak bir elektrot çekin. Biz 4-10 M P97 Mikropipet çektirmesi (Sutter Instrument Company) kullanarak bir ucu direnci ile elektrotlar çekin. </li><li> İstenen iç çözümü ile bir elektrot doldurun. 138 K-glukonat, 10 Hepes, 2 MgCl 2, 0.2 EGTA, 0.0001 CaCl 2, 4, Na-ATP, 0.4 Na-GTP: Biz içeren bir çözüm (mM) kullanın. Iç çözüm 1M KOH ve 270-275 mOsms bir ozmolarite 7.3 pH ayarlandı. </li><li> Istenilen nöron üzerine gigaohm mühür olun. Rüptürü ile mühür emme. Bu, bir bütün hücre kayıt teşkil eder. Multiclamp 700B amplifikatör yapılandırma kullanılmıştır. Amplifikatör sonra 'I = 0' kelepçe modunda konulmalıdır. </li></ol> 3. Dinamik Kelepçe İletkenlik Uygulama <ol><li> RTXI (www.rtxi.org) dinamik kelepçe bilgisayarda idam edildi. NMDA reseptör içeren özel bir yazılı modeli belleğe yüklenir. Gerçek zamanlı olarak hücre içine enjekte edilecek akım aşağıdaki denklemle hesaplanır: Ben NMDA =-g NMDA * [1 / (1 ​​+ (Mg / 3,57) * e (-V m * 0.062))] * (V m - E NMDA) g NMDA istenilen iletkenlik (NS; varsayılan) 0 nS, [Mg] E NMDA, NMDA reseptör (0 mV) ters potansiyel magnezyum konsantrasyonu (aşağıdaki örnekte 1.5 mM), ve V m membran potansiyeli amplifikatör (milivolt) ölçülen hücre. </li><li> Dinamik kelepçe bilgisayardan çıkış, analog-dijital dönüştürücü ile amplifikatör Komutanlığı girişine bağlanmış oldu. </li><li> Amplifikatör, 'BM' kelepçe modunda yerleştirildi. </li><li> İstediğiniz NMDA reseptör iletkenlik RTXI (örneğin 40nS) içine girin. Aksiyon potansiyelleri fazik patlaması göreceksiniz. Alternatif olarak, analog bir çıkış (Şekil 1A, 'g (t)') ile bir iletkenlik RTXI için verilebilir. Volt Siemens sinyal dönüştürmek için uygun bir ölçekleme faktörü RTXI içinde kullanılması gerekir. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 1A, iletkenlik, dinamik kelepçe kullanarak bir uygulama için başarılı bir kurulum gösterilmiştir. Bu kurulum kullanarak, substantia nigra pars compacta dopaminerjik nöron bir bütün hücre somatik kayıt yaptı. Dopaminerjik hücreler tipik olarak bir kalp pili gibi deseni ile düşük fiyatla kendiliğinden ateş. Aksiyon potansiyelleri bir patlama dinamik kelepçe (Şekil 1B) ile NMDA reseptör iletkenlik fazik uygulama tarafından uyarılmış olabilir. <img src="/files/ftp_upload/2275/2275fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: Uygulama, dinamik klemp tekniği kullanarak bir NMDA reseptör iletkenlik . A. Donanım ayarları, hücre içi kayıt teçhizat ve dinamik kelepçe bilgisayar arasındaki bağlantıları gösteren. Aksiyon potansiyelleri B. patlama substantia nigra pars compacta dopaminerjik nöron bir bütün hücre kayıt 40nS NMDA reseptör iletkenlik uygulama tarafından uyarılmış.

<ol><li>Robinson, H. P., Kawai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+digitally+synthesized+synaptic+conductance+transients+to+measure+the+integrative+properties+of+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Injection of digitally synthesized synaptic conductance transients to measure the integrative properties of neurons.</a> J Neurosci Methods. 49, 157-165 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp%3A+artificial+conductances+in+biological+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp: artificial conductances in biological neurons.</a> Trends Neurosci. 16, 389-394 (1993).</li>
<li>Sharp, A. A., O'Neil, M. B., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+clamp%3A+computer-generated+conductances+in+real+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Dynamic clamp: computer-generated conductances in real neurons.</a> J Neurophysiol. 69, 992-995 (1993).</li>
<li>Prinz, A. A., Abbott, L. F., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+clamp+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dynamic clamp comes of age.</a> Trends Neurosci. 27, 218-224 (2004).</li>
<li>Deister, C. A., Teagarden, M. A., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intrinsic+neuronal+oscillator+underlies+dopaminergic+neuron+bursting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">An intrinsic neuronal oscillator underlies dopaminergic neuron bursting.</a> J Neurosci. 29, 15888-15897 (2009).</li>
<li>Lobb, C. J., Wilson, C. J., Paladini, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+role+for+GABA+receptors+on+the+firing+pattern+of+midbrain+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A dynamic role for GABA receptors on the firing pattern of midbrain dopaminergic neurons.</a> J Neurophysiol. 104, 403-413 (2010).</li>
</ol>

Burada gösterilen dinamik klemp tekniği deneyci bir reseptör aktivasyonu elektrik etkilerini taklit etmek için izin vererek, geleneksel akım enjeksiyon tekniği üzerine geliştirir. Bu video, dopaminerjik nöron spontan aktivite için bir NMDA reseptör aktivasyonu, uyarılmış yani aksiyon potansiyelleri bir patlama efektleri ekleyebilirsiniz göstermiştir. Donanım / yazılım uygulama esnekliği nedeniyle, çeşitli uzantıları kullanılabilir. Enjekte edilen akım işareti, bir nöron aktif reseptör etkileri kaldırılır bir senaryo temsil, pozitif negatif geçirilebilir. Diferansiyel denklemler şeklinde bir dizi temsil Model nöronlar, aynı zamanda sayısal olarak çözüldü ve deneyci küçük ağlar araştırmak için izin olabilir.

<table><tbody><tr><td>K-glukonat susuz</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; X 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etilen glikol-bis(B-amino&amp;#8211;etil eter)-N,N,N&amp;rsquo;,N&amp;rsquo;-tetraasetik asit</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgATP</td><td>Reaktif</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaGTP</td><td>Reaktif</td><td>MP Biomedicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, Susuz</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Reaktif</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CholCl</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Askorbik Asit</td><td>Reaktif</td><td>Acros Organics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutatyon</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX51WI Mikroskop (40x objektifli)</td><td>Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 A/D dönüştürücü</td><td>Ekipman</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CV-7B kafa katlı Multiclamp 700B</td><td>Ekipman</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown Mikropipet Çekici</td><td>Ekipman</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfil şırınga iğneleri</td><td>Ekipman</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Ekipman</td><td>Siskiyou, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monitör</td><td>Ekipman</td><td>Triview</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dinamik kelepçe tekniği ile sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlar nmda reseptör İletkenlik uygulama

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Nörobilimadamları beyin iletişim nöronların nasıl araştıran beyin fonksiyonu çalışma. Birçok araştırmacı, deneysel-kontrollü giriş yanıt olarak bir veya daha fazla nöronların elektriksel aktivite değişiklikleri bekliyoruz. Nöronların elektriksel aktivite cam mikropipetler yama klemp teknikleri kullanılarak izole beyin dilimleri kaydedilebilir. Geleneksel olarak, deneyciler kaydedilen hücre nöronal membran üzerinde bulunan alıcılar tarafından dilim, ya da farmakolojik manipülasyon diğer hücreleri veya aksonal bağlantıları kalan pipet, elektrik stimülasyonu ile akım direkt enjeksiyon nöronal giriş taklit edebilir. Doğru akım enjeksiyon kayıt yerinde (genellikle soma) yüksek temporal hassas önceden belirlenmiş bir akım dalga geçme avantajı vardır. Ancak, fiziksel olarak hiçbir iyon kanalları açılır gibi nöronal membran direnci değişmez. Şu enjeksiyon genellikle dikdörtgen darbeler istihdam ve böylece iyon kanallarının kinetik modeli değildir. Son olarak, mevcut enjeksiyon iyon kanallarının açılması ile oluşan hücre içindeki kimyasal değişimler taklit edilemez. Reseptörler fiziksel, elektriksel veya farmakolojik stimülasyon ile aktif hale getirilebilir. Deneyci dilim elektrik stimülasyonu ile reseptör aktivasyonu iyi temporal hassasiyete sahiptir. Reseptör aktivasyonu ve stimülasyon üzerine aktive ne olduğunu tam bir doğa Ancak, sınırlı uzaysal hassas bilinmemektedir. Bu ikinci sorun, belirli farmakolojik ajanları tarafından kısmen kontrol altına alınabilir. Ne yazık ki, farmakolojik ajanların aktivasyon zaman ders tipik olarak yavaş ve kaydedilen hücre üzerine girişleri mekansal hassasiyet bilinmemektedir. Inceleme için, bkz. Prinz et; dinamik klemp tekniği bir deneyci hücre membran potansiyeli (Robinson ve Kawai 1993, Sharp ve ark, 1993a, b gerçek zamanlı geri bildirim dayalı doğrudan hücre içine geçen akımı değiştirmek için izin verir. diğerleri, 2004). Bu bir deneyci bir reseptör aktivasyonuna yanıt olarak kayıt yerinde meydana gelen elektriksel değişimleri taklit etmek için izin verir. Gerçek zamanlı değişiklikleri uygulanan mevcut donanım uygulanan matematiksel bir denklem tarafından belirlenir. Biz son zamanlarda, substantia nigra pars compacta (; Lobb ve ark, 2010. Deister ve ark, 2009) dopaminerjik nöronlarda NMDA reseptörlerinin fazik aktivasyonu nesil aksiyon potansiyelleri patlamaları araştırmak için dinamik klemp tekniği kullanmıştır . Bu video, dopaminerjik nöron bir NMDA reseptör iletkenlik uygulamak için gerekli prosedürleri göstermektedir.

Bu video, sıçan beyin dilim tam hücre yapılandırması kaydedilen bir dopaminerjik nöron içine iletkenliği nasıl uygulanacağını göstermektedir. Bu teknik, dinamik kelepçe denir.

Dinamik Kelepçe Tekniği ile Sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlar NMDA Reseptör İletkenlik Uygulama

Sinirbilimciler, beyindeki nöronların nasıl iletişim kurduğunu inceleyerek beynin işleyişini araştırırlar. Birçok araştırmacı, ...daki değişiklikleri incelemektedir.

Sinirbilimciler, beyindeki nöronların nasıl iletişim kurduğunu araştırarak beynin işlevini incelerler. Burada, dinamik klem tekniği kullanılarak deneysel olarak kontrol edilen bir iletkenlik uygulandığında, tek bir nöronun elektriksel aktivitesindeki değişiklikler tetiklenir. İlk olarak, ince sarmal beyin dilimleri kesilir ve yapay serebrospinal sıvı ile doldurulmuş bir inkübasyon odasında saklanır.Ardından bir kesit, patch clamp kayıt düzeneğine aktarılır. Bir nöron seçilir ve kayıt amplifikatörüne bağlı bir dinamik klempleme bilgisayarı kullanılarak bir kayıt elektrodu ile patch yapılır. Hücreye bir NMDA reseptör iletkenliği uygulanır.Elde edilen kayıtlar, NMDA reseptörlerinin aktivasyonunun, dopaminerjik nöronların burstler oluşturabilmesini sağlayan hücresel mekanizmalardan biri olduğunu gösteren bir aksiyon potansiyeli burstü sergilemektedir. Bu tekniğin, doğrudan akım enjeksiyonu veya farmakolojik tedavi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, deneysel olarak tanımlanmış bir reseptörün aktivasyonunun yaşayan bir nöronun elektriksel aktivitesi üzerindeki etkilerini kesin olarak belirleyebilmemizdir. Anestezize edilmiş bir Bragg dolly sıçanın beyni hızla çıkarıldıktan sonra, titreşimli bir mikrotom kullanılarak 240 micrometer kalınlığında yatay beyin kesitleri hazırlandı.Kesitler alındıkça, kayıt deneylerini gerçekleştirme zamanı gelene kadar, bunları yapay beyin omurilik sıvısı ile doldurulmuş 32 °C'lik bir inkübasyon odasına yerleştirmek için bir transfer pipeti kullanın. Hücre içi kayıt düzeneği; gradyan kontrast görüntüleme için ayarlanmış objektiflere sahip bir mikroskop, bir monitör, bir perfüzyon sistemi, bir multi clamp 700 B amplifikatörü, bir analogdan dijitale dönüştürücü, bir mikro manipülatör ve kafa ünitesinden oluşur. Bir Mac Pro bilgisayar, veri toplama yazılımı olan Axo Graph X ve multi clamp commander yazılımını çalıştırır; hücre içi kayıt düzeneğinin ve Mac Pro bilgisayarın yanında, dinamik klempleme tekniği ile birlikte kullanılacak olan analogdan dijitale dönüştürücüsüyle beraber gerçek zamanlı Linux çalıştıran bir Sun Microsystems bilgisayar bulunur.Hücre içi kayıt düzeneği, yaklaşık 35 °C sıcaklıkta yapay beyin omurilik sıvısı perfüzyonu gerçekleştirmelidir. Kayıt yapılacak kesit yatay olarak hazırlandıysa, bir transfer pipeti kullanarak kesiti yapay beyin omurilik sıvısı içeren bir Petri kabına yerleştirin ve bir kesme aleti kullanarak kesiti orta hat boyunca ikiye bölün. Ardından, elektrofizyolojik kayıtlar yapmak için bir pipet yardımıyla kesiti hücre içi kayıt düzeneğine aktarın.40 x objektifi kullanarak buradaki hedef nöronu görüntüleyin; tek bir substantia nigra dopaminerjik nöronu görülmektedir. İki adet uzanan dendritli, eliptik şekilli somayı not edin. Elektronik bir P 97 mikro pipet çekici kullanarak 4 ile 10 mega ohm uç direncine sahip elektrotlar çekin.Ardından, bir mikro dolum şırınga iğnesi kullanarak bir elektrodu iç çözelti ile doldurun. Doldurulmuş elektrodu, küçük bir tüp parçasıyla yarı hücreye bağlı bir şırınga kullanarak, amplifikatörün kafa aşamasına bağlı olan yarı hücrenin içine yerleştirin. Kayıt elektroduna az miktarda pozitif basınç uygulayın.Görsel kılavuzluk altında, elektrodu hedef nörona doğru indirin. Hücre yüzeyinde bir çöküntü görülecektir. İstenen nöron üzerinde bir giga seal oluşturmak için düşük miktarda negatif basınç uygulayın.Mühürlemeden sızdırmazlığı bozmak için ağızla vakum uygulayın. Bu işlem, tüm hücre kaydı (whole cell recording) aşamasını oluşturur. Sızdırmazlık bozulduktan sonra, amplifikatörü akım enjekte edilemeyen akım kenetleme (current clamp) moduna getirmek için multi clamp commander yazılım arayüzünü kullanın.Bu hücreye bir NMDA iletkenliği uygulamak için, öncelikle dinamik klemper bilgisayarında RTXI yazılımını çalıştırın. Ardından, hafızaya NMDA reseptörü içeren özel olarak yazılmış bir model yükleyin. Model RTX hafızasına yüklendiğinde, G-N-M-D-A'nın sıfır nanosiemens olarak ayarlandığı ve istenen iletkenliğin nanosiemens cinsinden olduğu burada gösterilen denklem kullanılarak hücreye enjekte edilecek akımı gerçek zamanlı olarak hesaplayacağım.Semens varsayılan olarak MG magnezyum konsantrasyonudur. E-N-M-D-A, NMDA reseptörü için sıfır milivolta ayarlanmış geri dönüş potansiyelidir ve VM, amplifikatörden milivolt cinsinden ölçülen hücrenin membran potansiyelidir. Şimdi standart BNC kablosu ile dinamik klemper bilgisayarından gelen çıkışı, bir analog-dijital dönüştürücü aracılığıyla amplifikatörün komut girişine bağlayın.Multi Clamp Commander yazılım arayüzünü kullanarak amplifikatörü standart akım kenetleme (current clamp) moduna getirin. RTXI, Axo Graph X veri toplama yazılımından gelen bir voltaj sinyalinden istenen GFT iletkenliğini alacak şekilde ayarlanmıştır. Burada, hücreye bir saniyelik 40 nano Siemens iletkenlik basamağının uygulandığı basit bir AXO Graph X protokolü yürütüyoruz.Bu videoda açıklanan düzenek kullanılarak kondüktans basamağına yanıt olarak bir aksiyon potansiyelleri patlaması uyarılmıştır; substantia nigra pars compacta'daki dopaminerjik bir nörondan tüm hücre somatik kaydı gerçekleştirilmiştir. Dopaminerjik hücreler tipik olarak pacemaker benzeri bir paternle düşük hızlarda spontan olarak ateşleme yapar. Dinamik klemple NMDA reseptör kondüktansının fazik uygulamasıyla bir aksiyon potansiyelleri patlaması uyarılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, izole bir beyin kesitindeki canlı bir dopaminerjik nörona NMDA iletkenliğinin nasıl uygulanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bununla birlikte, bu teknik standart elektrofizyolojik yöntemler kullanılarak kaydı yapılabilen herhangi bir hücre tipi için kullanılabilir. Benzer şekilde, dinamik klempe geniş bir reseptör tipi yelpazesinin elektriksel etkilerini taklit etmek için genişletme yapılabilir.Bu videonun, dinamik klem tekniğinin ne olduğunu ve laboratuvarımızda bunu nasıl kullandığımızı göstermede faydalı olduğunu umuyoruz. İzlediğiniz için teşekkürler.

application-nmda-receptor-conductance-rat-midbrain-dopaminergic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Amperometrik tekniği spontan dopamin oksitlenmeye tarafından üretilen oksidatif akımı algılayarak tek bir hücreden dopamin salınımını ölçer. Eşzamanlı gerilim kelepçe ve amperometri metodolojisi dopamin taşıyıcısı ve dopamin ters taşıma Bu faaliyetin düzenleyici rolünün genel "faaliyet" arasındaki mekanistik ilişki bulunmaktadır.

Eşzamanlı Gerilim-kelepçe ve Amperometri ile Dopamin Film Tek Hücre Ölçümü

In situ yama kelepçe kayıtları bozulmamış devresi nöronların elektrofizyolojik karakterizasyon için kullanılır. MSS küçük ve sağlam bir kılıf ile çevrili olduğundan Drosophila genetik model yama klemp ise zordur. Bu makale sonraki yama klemp kayıtları için kılıf ve temiz nöronlar kaldırmak için prosedürü açıklar.

Hazırlanması<em&gt; Drosophila</emIçin&gt; Orta Nöronlar<em&gt; In situ</em&gt; Patch Sıkma

Bu video, dendritik membran yüzeyinden yama kelepçesi kaydı için bir tekniği göstermektedir. Bu, dopaminerjik nöronlardaki dendritlerin ve altta yatan voltaj kapılı iyon kanallarının elektriksel özelliklerini doğrudan incelemeye yardımcı olur.

Bir Beyin Dilimindeki Dopaminerjik Nöronun Dendritinden Yama-Kelepçe Kayıtları

Bu video, medial prefrontal korteks (mPFC) aksonlarını optogenetik olarak uyararak ve LEC'deki piramidal nöronların yanıtlarını kaydederek lateral entorinal kortekste (LEC) sinaptik verimliliği inceleme prosedürünü göstermektedir. Bu yöntem, sinaptik plastisiteyi incelemek için yama-kelepçe kayıtlarını ışık stimülasyonu ile sinaptik aktivasyon ile birleştirir.

Sıçan Beyin Dilimlerinde Sinaptik Olayların Optogenetik Stimülasyonu ve Elektrofizyolojik Kaydı

Bu video, reobaz ve membran potansiyelini ölçmek için yama kelepçesi tekniği kullanılarak dorsal kök gangliyonlarındaki duyusal nöron uyarılabilirliğinin incelenmesini ve nöronların artımlı akım enjeksiyonlarına tepkilerini analiz etmeyi göstermektedir.

Sağlam Sıçan Dorsal Kök Gangliyonlarında Tüm Hücre Yama Kelepçesi Kayıtları

Bu video makalede hücre gövdeleri yama kurulum, usul ve nasıl tüm montaj fare retinae ganglion hücrelerinden dinamik kelepçe kayıtları uygulamaya göstermektedir. Bu teknik, eksitatör ve inhibitör sinaptik girdi kesin katkısının incelenmesi ve nöronal spike için göreceli büyüklüğü ve zamanlaması sağlar.

Fare Retina Ganglion Hücreleri Synaptic ve Yapay iletkenlikleri Dinamik Kelepçe Uygulama

Afferent duyusal nöronlar, duyusal bilgileri çevreden merkezi sinir sistemine gönderir. Spesifik afferent nöronların tanımlanması, fizyolojilerinin anlaşılmasına yardımcı olacaktır. Afferent nöronları tanımlamak için bir retrograd etiketleme yöntemi tanımladık ve bu nöronlardaki voltaj kapılı iyon kanallarını yama kelepçesi elektrofizyolojisi ve immünositokimya kullanarak inceledik.

Ifade İyon Kanallarının Çalışması için özel Duyusal Nöron Populasyonlarının Belirlenmesi

Burada tarif edilen hücre-bağlı patch-clamp tekniği ile, bir iyon kanalının güncel kayıt uzun uzanır elde edilmesi için bir işlemdir. Bu yöntem, gerçek zamanlı olarak, gözlemlemek için izin veren, biyolojik sinyali altında yer open-close kanal konformasyonlarının desen. Bu veriler rahatsız biyolojik membranların kanal özellikleri hakkında bilgilendirmek.

Tek kanallı bir hücre-bağlı Patch-clamp kayıt

Bu el yazması, yama kelepçesi kayıtları için sağlam dorsal kök gangliyonlarının nasıl hazırlanacağını açıklar. Bu hazırlık, nöronlar ve uydu glial hücreler için mikro çevreyi korur, böylece ayrışmış DRG nöronları kullanılarak görülen fenotipik ve fonksiyonel değişikliklerden kaçınır.

Yetişkin Rats gelen bozulmamış Dorsal Kök Ganglia üzerinde Patch Kelepçe Kayıtlar

Hücre altı yama-klemp kayıtları, dendritlerin fonksiyonel özelliklerini araştırma imkanı sunar. Ancak bu ince yapılara küçük çapları nedeniyle kolayca erişilememektedir. Burada açıklanan protokol, dopamin nöronlarının dendritlerinden in vitro dilimler halinde kararlı ve güvenilir kayıtların toplanmasını kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.

Nigral Dopamin Nöronlar somatodendritik Domain hücre içi Patch-kelepçe Kayıtlar

Dinamik kelepçe elektrofizyolojisi, nöronal ateşleme eksiklikleri ile iyon kanalı disfonksiyonu arasında nedensel bağlantılar kurabilir. Fare serebellar Purkinje nöronlarında dinamik kelepçe yöntemlerini ve protokollerini açıklıyoruz, faydalı kaynaklara ve teknik hususlara dikkat çekiyoruz. Temsili bir çalışmada, tekrarlayan ateşlemeyi kurtarmak için Tsc1-/- Purkinje nöronlarına modellenmiş sodyum iletkenliği ekliyoruz.

Otizmle İlişkili Bozulmuş Nöronal Uyarılabilirliği Araştırmak için Dinamik Kelepçe Yöntemleri

Öğrenin, dinamik kelepçe tekniğiyle sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlarına NMDA reseptör iletkenliği uygulamayı. Bu yöntem, canlı nöronlarda reseptör aktivasyonunun elektriksel etkilerini hassas şekilde incelemenizi sağlar.

Dinamik Kelepçe Tekniği ile Sıçan orta beyin dopaminerjik nöronlar NMDA Reseptör İletkenlik Uygulama

Daha fazla video keşfet