JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:37 dk. • August 7th, 2025
Mutasyona uğramış alfa-sinükleini aşırı eksprese eden dopaminerjik nöronlar içeren sıçan embriyolarından elde edilen birincil orta beyin kültürü ile başlayın.
Arıtma kuyucuklarındaki ortamı, test bileşiğini içeren taze ortamla ve kontrol kuyularındaki ortamı düz ortamla değiştirin. Sonra kuluçkaya yatırın.
Kontrolde, alfa-sinüklein, dopaminerjik nöronlarda toksik agregatlar oluşturarak nörit retraksiyonuna neden olur ve nöronal ölüme yol açar.
Tedavide, test bileşiği alfa-sinüklein ile etkileşime girer, agregasyonunu önler, nörit yapısını korur ve nöroproteksiyon sağlar.
Hücreleri sabitleyin ve geçirgenleştirin, ardından spesifik olmayan bağlanma bölgelerini engelleyin.
Dopaminerjik nöronlar için ek etiketleme ile tüm nöronları etiketlemek için birincil antikorlarla inkübe edin.
Hücreleri yıkayın ve birincil antikorlara özgü florofor etiketli ikincil antikorlar ekleyin.
Ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu kullanarak, diferansiyel olarak etiketlenmiş dopaminerjik nöronları sayın, ardından nörit uzunluğunu ölçmek için konfokal bir mikroskoba geçin.
Kontrollere kıyasla tedavide sağlam nöritlere sahip daha yüksek dopaminerjik nöron sayısı, test bileşiğinin nöroprotektif potansiyelini doğrular.