Bir fare modelinde stabil genetik modifikasyon için virüslerin stereotaksik enjeksiyonu

Stereotaksik bir çerçevede açıkta kalan bir kafatası ile anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın.

Şırınga tutucusunu, iğne ucu bir kafatası referans noktası olan bregma ile aynı hizaya gelene kadar indirin.

Önceden belirlenmiş stereotaksik koordinatları kullanarak,

esas olarak nöral kök hücreler veya NSC'ler içeren nörojenik bir niş olan

ventriküler-subventriküler bölgeyi veya

V-SVZ'yi bulun ve bu bölgeyi işaretleyin.

Şırıngayı çıkarın ve beyin hasarını önlemek için dikkatlice küçük bir delik açın.

Steril bir şırıngayı transgeni taşıyan virüslerle doldurun ve iğneyi beyin yüzeyinin üzerine yerleştirin.

Şırıngayı yeniden konumlandırın ve ucu beynin en içteki yüzey katmanına değene kadar indirin.

V-SVZ'ye ulaşmak için beyne nüfuz edin, virüsü yavaşça enjekte edin, kısa bir süre tutun ve ardından şırıngayı geri çekin.

V-SVZ'de virüs, membran füzyonu yoluyla NSC'lere girer. RNA'sının tersi DNA'ya kopyalanır.

Bu DNA daha sonra NSC genomuna entegre olur ve NSC'lerin kararlı genetik modifikasyonunu sağlar.

Anestezi uygulandıktan sonra, altı ila sekiz haftalık bir fare kulakları arasındaki alanı tıraş eder. Ardından, iyot povidon veya% 70 etanol gibi bir iyodofor kullanarak cildi dezenfekte edin.