JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:30 dk • August 29th, 2025
Açıkta kalan bir siyatik siniri olan bir ısıtma yastığına yerleştirilen anestezi uygulanmış bir yenidoğan sıçanı ile başlayın.
Sinirin distal bölgesini kaldırın ve bir boya ile karıştırılmış bir plazmit DNA çözeltisi enjekte edin. Boya, plazmit dağıtımının izlenmesine yardımcı olur.
Elektrot kolları arasında küçük bir boşluk bırakarak sinirin etrafına cımbız tipi bir elektrot yerleştirin.
Akım iletimi için bu boşluğa tuzlu su ekleyin.
Schwann hücrelerinde geçici zar gözenekleri oluşturan sinir liflerini çevreleyen bir elektrik darbesi uygulayın. Ardından, elektrot konumlarını ters çevirin ve ikinci bir elektrik darbesi uygulayın. Bu, gözeneklerden plazmit DNA girişini arttırır.
Elektroporasyondan sonra, hücre zarı plazmidi yeniden kapatır ve hapseder.
Bölgeyi temizleyin, cilt kesisini kapatın, dezenfekte edin ve farenin iyileşmesine izin verin.
Daha sonra, plazmit DNA çekirdeğe yer değiştirir ve Schwann hücre DNA'sına entegre olarak başarılı gen transferini sağlar.
Açıkta kalan siniri kaldırmak için bir iğne kullanarak sinirin distal tarafını nazikçe çekin. Cam mikro pipeti sinirin distal bölgesine yerleştirin ve sinir yeşil görünene kadar hafif pozitif basınç uygulayarak DNA solüsyonunu enjekte edin. Daha sonra, sinirden yaklaşık bir ila iki milimetre uzağa cımbız tipi bir platin elektrot yerleştirin.
Elektrot ve sinir arasındaki boşluğu% 0.9 sodyum klorür çözeltisi ile doldurun. Bir elektroporatör kullanarak enjeksiyon bölgesine elektrik darbeleri uygulayın. İlk darbe setinden sonra elektrodu ters çevirin ve başka bir darbe seti uygulayın.
Daha sonra, elektroporasyon bölgesini %0.9 sodyum klorür çözeltisi ile temizleyin. Elektroporasyondan sonra, insizyonu siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın. Daha sonra yarayı povidon iyot ile temizleyin.
Yüz maskesini hayvandan çıkarın ve anesteziden tam iyileşme sağlamak için en az bir saat elektrikli ısıtıcıda tutun