JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:37 dk. • August 29th, 2025
Hipokampal nöronları, yalnızca tasarımcı ilaçları veya DREADD'ler tarafından aktive edilen tasarımcı reseptörlerini eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş bir fare ile başlayın.
Bu tasarlanmış reseptörler, endojen moleküllere yanıt vermezken sentetik test ilaçlarına seçici olarak yanıt verir.
Stresi en aza indirmek ve işleme alıştırmak için fareyi düzenli olarak fırçalayın.
Ardından, doğru ilaç dozajını hesaplamak için fareyi tartın.
Fareyi tutarken, sirkadiyen bozulmasını önlemek için loş kırmızı bir ışık kullanın.
Hareketsiz hale getirmek için fareyi hafifçe tırnatın.
Bir pipet kullanarak, test ilacı çözeltisini alın ve ucunda bir damlacık oluşturun. Şimdi göze yaklaşın
ve damlacığı yüzeyine bırakın.
Fareyi ev kafesine geri koyun. İlaç dağıtımını birkaç kez tekrarlayın.
İlaç gözden emilir ve beyne girer.
Daha sonra kan-beyin bariyerini geçer ve hipokampal bölgeye ulaşır. Daha sonra, DREADD reseptörlerine bağlanır ve nöronları aktive ederek hassas, invaziv olmayan nöromodülasyon sağlar.
Enjeksiyondan dört hafta sonra başlayan tekrarlayan CNO uygulaması için, göz damlalarının uygulanmasından üç ila dört gün önce her fareyi günde üç dakika karıştırarak hayvanları kullanmaya alıştırın. Fareler işlemeye alıştığında, vücut ağırlığı konsantrasyonunun kilogramı başına bir miligram CNO elde etmek için verilecek uygun CNO miktarını belirlemek için her bir fareyi tartın.
Etkin olmayan fazda ışıklar sönmeden iki saat önce, hazırlanan CNO çözeltisinden bir ila üç mikrolitre bir P10 mikropipetine yükleyin ve fareyi tırmalama yoluyla hareketsiz hale getirin. Pipet ucunda sabit bir damlacık oluşana kadar solüsyonu yavaşça dışarı atın ve pipet ucunu farenin gözüne değdirmeden solüsyon verilene kadar damlacığı dikkatlice korneaya yaklaştırın. Ardından, CNO damlasını bir sonraki hayvanın gözüne uygulamadan önce fareyi ev kafesine geri koyun.
CNO'nun fare aktif fazı sırasında verilmesi gereken durumlarda, uygun hayvan kullanımı ve CNO teslimatı için loş bir kırmızı ışığın varlığından emin olun.