Bir sıçan modelinde omurilik onarımı için kendi kendine birleşen peptitlerin ve nöral öncü hücrelerin enjekte edilmesi

Servikal omurilik yaralanması olan anestezi uygulanmış bir fareyi stereotaktik bir çerçeveye sabitleyin.

Lezyon bölgesi, aksonal büyümeyi ve fonksiyonel iyileşmeyi engelleyen infiltre immün hücreler, glial hücreler ve fibroblastlar ile çevrili hasarlı aksonlar ve sıvı dolu boşluklardan oluşur.

Omurganın üzerindeki cildi dezenfekte edin ve kesin. Omuriliğin dış kaplaması olan dura'yı ortaya çıkarmak için kasları inceleyin.

Omurilik lezyon bölgesini ortaya çıkarmak için skar dokusunu duradan çıkarın.

Lezyonun üzerine, kendiliğinden birleşen peptitler (SAP'ler) içeren bir mikroşırınga yerleştirin ve

bunları orta hattın bir tarafındaki lezyon çekirdeğine enjekte edin.

Eşit dağılım için enjeksiyonu karşı tarafta tekrarlayın.

Daha sonra, NPC sağkalımını artırmak için iltihaplı lezyon çekirdeğinden kaçınarak lezyonu çevreleyen bölgelere nöral öncü hücreler (NPC'ler) enjekte edin.

Enjekte edildikten sonra, SAP'ler, hücre dışı matrisi taklit eden ve boşlukları köprüleyen bir iskeleye kendi kendine monte edilir. İskele, doku yeniden şekillenmesi için NPC'nin hayatta kalmasını ve nöral hücrelere farklılaşmasını destekler.

Enjeksiyon, omurilik yaralanmasından 14 gün sonra yapılır. Ameliyata başlamadan önce, SAP'leri steril suda hacim başına% 1 ağırlıkta hazırlayın ve bir Hamilton şırıngasına bağlı 100 mikrometre cam kılcal damarı çözelti ile doldurun.

Hamilton şırıngasını stereotaksik çerçeveye takın. Fareyi uyuşturduktan sonra, kafayı stereotaksik çerçeveye yapıştırın ve ameliyat bölgesini daha önce olduğu gibi povidon iyot ve% 70 alkol ile dezenfekte edin. Bir kez daha, cildi açtıktan sonra, vertebral kas çiftini dikkatlice inceleyin ve ekartörleri yerleştirin.

Yara dokusunu duradan çıkarmak ve lezyon bölgesini yeniden ortaya çıkarmak için 15 numaralı bir neşter kullanın. Ardından durayı dikkatlice açmak için keskin bir iğnenin ucunu kullanın. Son olarak, stereotaktik olarak, cam kılcal damarı travmatize omuriliğe iki milimetre derinliğe yerleştirin ve SAP'leri enjekte edin.

SAP'leri enjekte ettikten sonra, enjekte edilen çözeltiyi yerleştirmek için doku gerilmesine izin vermek için kılcal damarın çıkarılmadan önce bir dakika boyunca enjeksiyon bölgesinde kalmasına izin verin. Ardından enjeksiyonu bir sonraki bölgede tekrarlayın. Burada, NPC'ler, yetişkin bir DS kırmızı faresinin paraventriküler bölgesinden izole edildi ve daha önce yayınlanmış prosedürlere göre yetiştirildi.

Mikro enjeksiyondan hemen önce, NPC'leri büyüme ortamında, hücre nakli için mikrolitre başına 50 kez 10 ila üçüncü canlı hücrelere kadar seyreltin ve bir Hamilton şırıngasındaki bir cam kılcal damara yükleyin. NPC'ler, SAP'lerin enjeksiyonundan hemen sonra enjekte edilir. Bunu yapmak için, Hamilton şırıngasının cam kılcal damarını yaralanma bölgesinin 0,2 milimetrelik bir rostraline ve omuriliğin sırt yüzeyinin 1,5 milimetre altına yerleştirin.

Dakikada yaklaşık 0,5 mikrolitre oranında iki mikrolitre hücre süspansiyonu enjekte edin. İlk enjeksiyon tamamlandıktan sonra, kılcal damarın daha önce olduğu gibi bir dakika omurilikte kalmasına izin verin. Ardından kılcal damarı geri çekin, bitişik bir bölgeye taşıyın ve enjeksiyon prosedürünü tekrarlayın. Bir dakika bekledikten sonra, daha önce olduğu gibi, kılcal damarı geri çekin ve iki milimetre boyunca yaralanma bölgesine doğru hareket ettirin.

Bu konumda iki adet iki mikrolitrelik enjeksiyon yapın.