Name: Kültür İlköğretim Motor ve Electrospun Poli-L-lactide Nanofiber Yapı iskeleleri Tanımlı Medya Duyu Nöronlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-15T16:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 3 s
Description: Öğrenin, elektrospun nanofiber iskeleler üzerinde embriyonik gün 15 sıçan duyu ve motor nöronlarının serum içermeyen kültür yöntemini. Bu teknik, sinir rejenerasyonu ve doku mühendisliği araştırmalarında biyouyumlu yapıların geliştirilmesine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NIH K08 EB003996

1. Poli-L-laktik asit (PLLA Çözüm İplik) <ol><li> 9 mL kloroform 0.4 g PLLA kısık ateşte karıştırarak eritin. </li><li> DMF: 09:01 (v / v) kloroform% 4 PLLA (w / v) çözümün nihai konsantrasyonu getirerek, çözüm için 1 ml dimetilformamid ekleyin. </li><li> Künt 23ga metal ucu ile bir polipropilen ya da cam şırınga çözüm yerleştirin. </li></ol> 2. Yüzey Hazırlığı 1 İplik <ol><li> 85:15 PLGA% 8 (w / v) solüsyonu (poli-laktik-ko-glikolik asit), kısık ateşte karıştırarak tarafından kloroform olun. </li><li> PLGA çözümü ile her kapak kayma yüzeyi kaplayan tarafından PLGA Coat temiz cam kapak fişleri. PLGA ince bir film (yaklaşık 30 dakika) kurumasını bekleyin. </li></ol> 3. Elektrospinning 2 <ol><li> Güvenli PLGA kaplı cam kapak, iletken karbon bant ile kolektör sığar. Hizalanmış lifleri için, toplayıcı, motorlu tekerlek. Kollektör rastgele lifleri için, sabit bir plaka. </li><li> Yeri şırınga ucu 20 cm toplayıcı tekerlek ile pompa. Yaklaşık 2 mL / saat pompa seti ve bir tekerleğini kullanarak, 300-400 RPM motor ayarlarsanız. Mümkünse, -2 kV DC kollektör önyargı ve 15 kV metal uç geçerlidir. Iki kutuplu bir güç kaynağına erişim yokluğunda, kollektör zemin. </li><li> Elyaf şırınga ucu jet ve dönen bir tekerlek üzerinde toplamak. Liflerin istenen yoğunluk elde edilinceye kadar iplik devam edin. Swipe bir kağıt havlu ile metal ucu olmayan bir iletken çubuğun ucunda periyodik tıkanmasını önlemek için yapıştırılmış. </li></ol> 4. 1 Moating <ol><li> Ardından iplik, kapak kayma çevresinde PLGA bir çizgi pipetleme hendek electrospun örnekleri. PLGA kurumasını bekleyin. Bu kültür sırasında lifler uyum koruyacaktır. </li></ol> 5. Protein Kaplama <ol><li> Electrospun cam elyaf ve kontrolleri hücre kültürü öncesinde protein kaplı olması gerekir. En az bir saat için bir protein çözüm substratlar Kapak ve daha sonra aşırı bir çözüm aspirat ve aspire substratlar kuruyana kadar devam edin. Olası protein çözümler şunlardır: PLL (poli-L-lisin) (100 mg / ml), laminin (25 mcg / ml) veya fibronektin (50 mg / ml). PLL kullanılması durumunda, substratlar steril su ile durulanır ve ilk kaplama aşağıdaki iki kez kuru olmalıdır. </li></ol> 6. E15 Rat Embriyolar Edinme 3 * Bütün deneyler NIH Hayvanların Kullanımı ve Bakımı, Michigan Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanan Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu doğrultusunda yapıldı. <ol><li> Hazırlanışı: hayvanın gebe olup olmadığını kontrol edin. 3 ml tripsin, 3 mL FBS ve L15 sıcak bir şişe çözülme. Yangın bir Pasteur pipeti lehçe. 30 dakika süreyle% 70 etanol bütün cerrahi aletler dezenfekte edin. </li><li> Kaplama ortamı hazırlayın ve sıcak (bkz. Tablo 1). </li><li> Ötenazi: ketamin / xylazine bir IP enjeksiyon gerçekleştirin. 10-15 dakika bekleyin ve kornea eksikliği olup olmadığını kontrol edin ve geri çekilme refleksleri pedal. Refleksleri sonra, pentobarbital (FatalPlus) bir IC enjeksiyon gerçekleştirin. </li><li> Çadır karın cilt. Karın boşluğu ortaya çıkarmak için, kas ve deri katmanları yoluyla kesin. Bulun rahim ve rahim ağzı ve yumurtalıklar ayırmak. </li><li> Makas ile embriyolar rahim çıkarın ve hemen sıcak L15 içine koyun. (Diseksiyon mikroskobu ve embriyolar altında aşağıdaki işlemler tamamlandı ve disseke kablolarını her zaman sıcak L15 batık olmalıdır.), Kapatma ve çene etrafında forseps aşağıdaki oksipital kemik, kafatası embriyolar başını kesmek. </li></ol> 7. Diseksiyon 3 <ol><li> Bir tarafta embriyo yerleştirin. Bacaklarda ve karın içi organların şerit diğer seti kullanılarak bir dizi forseps ile omurilik koruyun. </li><li> Embriyo açın ve bir set forseps ile sabit tutun. Tüm kablosu maruz kadar, boyundan kuyruk uzunluğu boyunca embriyo Snip. </li><li> Kablosunun sonunda dikkatli bir şekilde tutun ve kaldırmak için kuyruk karşı kendini üzerinden çekin. Kablosu membran ve dorsal kök gangliyon (DRG) bağlı çeker. </li><li> DRG eksplant veya ayrışmış bir duyusal nöron kültürü yapılacak ise, kablo kapalı DRG snip ve L15 sıcak taze yemek aktarabilirsiniz. <ol><li> Eksplant kültür DRG için, 10.2 adıma geçin </li><li> Ayrışmış duyusal nöron kültürü için, 9. adıma geçin. </li><li> Motor nöron kültürü için, DRG adım 7.5 'de membran ile silinecektir </li></ol></li><li> Uzun çorap çıkarmadan benzer kablosunun üst ucunda açgözlü ve aşağı soyma omurilik zarı, çıkarın. Tüm embriyolar için tekrarlayın ve sonra küçük parçalar halinde (2-3 mm) kordonlar doğrayın. </li></ol><pclass motor n>5,6,7 <ol><li> 2-3 dakika süreyle adet pelet 1000 RPM konik ve spin içine doğranmış kablolarını ve L15 dökün. </li><li> Süpernatantı dökün ve tripsin 3 mL pelet kabloları ekleyin. 20 dakika süreyle 37 ° C su banyosunda inkübe edin. </li><li> Konik ve 2-3 dakika süreyle yeniden pelet 1000 RPM dönüş 3 mL FBS ekleyin. </li><li> Süpernatantı ve kat FBS ile bir yangın cilalı Pasteur pipeti dökün. </li><li> Konik bir Pasteur, L15, pipet dolu ve çözüm görünür kümeleri ile homojen olana kadar yavaşça çiğnemek. Kabarcıkları kaçının. </li><li> L15 Optiprep% 9 çözüm hazırlayın. 3 mL Optiprep çözüm her iki embriyo (embriyo bir tek sayı varsa, kadar yuvarlak) bir tüp hazırlayın. </li><li> Tüm tüpler arasında eşit olarak bölünerek homojenize çözüm, Optiprep çözüm üzerine bırakın. Tüpleri 15 dakika için 2000 RPM Spin. </li><li> Üst 2 ml, 50 ml konik her tüp ve havuz dikkatlice toplamak. Optiprep hücreleri durulamak için 5 dakika için 1000 RPM hızında, L15 ve spin konik doldurun. </li><li> Süpernatantı dökün ve kaplama medya (250-500 ul) küçük bir miktar hücrelerin tekrar süspansiyon. Hücreler, canlı hücreleri belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanarak güvenin. 10.1 adıma geç </li></ol> 9 - Duyusal Nöron (SN) İşleme 7 <ol><li> 2-3 dk pelet adet 1000 RPM konik bir tüp ve spin omurilik ve L15 kaldırılır DRG dökün. </li><li> Süpernatantı dökün ve tripsin 3 mL pelet DRG ekleyin. 10 dakika süreyle 37 ° C su banyosunda inkübe edin. </li><li> Konik ve 2-3 dakika süreyle yeniden pelet 1000 RPM dönüş 3 mL FBS ekleyin. </li><li> Süpernatantı ve kat FBS ile bir yangın cilalı Pasteur pipeti dökün. </li><li> Konik bir Pasteur, L15, pipet dolu ve çözüm görünür kümeleri ile homojen olana kadar yavaşça çiğnemek. Kabarcıkları kaçının. </li><li> 5 dakika için 1000 RPM Homojenat Spin. Süpernatantı dökün ve SN kaplama medya (250-500 ul) küçük bir miktar hücrelerin tekrar süspansiyon. Hücreler, canlı hücreleri belirlemek için tripan mavisi dışlama kullanarak güvenin. 10.1 adım devam edin </li></ol> 10 Kaplama ve Kültür <ol><li> : Ayrışmış SN veya MN kültür için <ol><li> Sonra birkaç damla medya substratlar Kapak uygun bir hacimli hücre süspansiyonu ekleyin. Disosiye hücreleri düşük yoğunluklu (25-50 hücre / mm 2) kaplama olmalıdır. Hücrelerin en az bir saat önce, medya ile kuyu sel uyması izin verin. </li></ol></li><li> Eksplant kültür DRG için: <ol><li> Medya birkaç damla substratlar Kapak sonra medyaya DRG ekleyin. Substrat (22x22 mm kapak astar üzerine yaklaşık 4 DRG uyacak) eşit dağılmış, böylece DRG düzenleyin. DRG medya ile kuyuların sel önce en az 4 saat boyunca uyması izin verin. </li></ol></li><li> Kültürler medya değişiklik olmadan 4 gün öncesine kadar devam edilebilir. Besleme medya ile uzun kültürler için, yarım medya değişiklikler yapılmalıdır. Besleme medya kaplama medya eksi L-glutamin aynı kompozisyon. </li></ol> 11. İmmünositokimya 1,5,8 <ol><li> Tespit hücreleri: aspire medya ve 30 dakika süreyle sıcak% 4 PFA (paraformaldehid) ile değiştirin. Sonra 5 dakika 1x PBS 3X yıkar gerçekleştirin. </li><li> Permeabilization Engelleme / blok / perma solüsyonu (% 1,25 1X PBS albümin sığır serumu,% 0.05 Triton X-100 ve% 2,0 'normal keçi serumu) hazırlayın. Aspire PBS ve 30 dakika için örnek blok / perma çözümü uygulamak. Sonra 1X 5 dakika 1x PBS yıkar gerçekleştirin. </li><li> Primer antikor: primer antikor çalışma çözeltisi hazırlayın (% 10 normal keçi serumu,% 1.25 sığır serum albumin,% 0.1 Na azid, 1x PBS ile% 0.05 Triton X-100 ve 10 ml). (Bkz. Tablo 2) primer antikor uygun miktarda ekleyin. Parafilm doğrultusunda birkaç yemekler. Her bir yüzey için parafilm birincil antikor çözüm 200μl boncuk yerleştirin. Substratları haricindekileri, gece primer antikor çalışma çözeltisi hücre tarafı aşağı kayan (oda klimalı ya da özellikle kuru ise, suya doymuş kağıt bir parça çanak çalışma çözeltisi buharlaşma önlemek için bir köşesinde eklenebilir.) . </li><li> İkincil antikor: birincil (çalışma solüsyonu ° 4 saklanan, C toplanan ve yeniden olabilir) substratları çıkarın ve 2X 5 dakika 1x PBS yıkar gerçekleştirmek. 200 ul sekonder antikoru 1:200 sulandırılmış PBS (parafilm astarlı çanak ters) 4 saat süreyle uygulayın. </li><li> Sonra ikincil dan çıkarın 2X 5 dk 1x PBS yıkar gerçekleştirin. Dağı substratlar slaytlarla DAPI veya başka uygun bir nükleer sayaç içeren Altın leke uzatır. </li></ol> 12. Temsilcisi Sonuçlar: Hizalanmış ve rastgele El tipik morfolojiectrospun lifleri Şekil 1'de gösterilmiştir. Biz genellikle bu protokol ile&gt;% 90 nöronlar 7,8 MN saflık elde etmek ve herhangi bir önemli fibroblast büyüme olmadan uzun bir hafta boyunca kültürlerin DRG korumuştur. Şekil 2, 24 saat sonra kültür ve immün cam ve elyaf tipik MN görünüm gösterir. Cam ve elyaf üç gün boyunca kültür immunohistokimyasal DRG Şekil 3'te. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Fiber hizalama, koleksiyoncu seçimi tarafından manipüle . A.)) dönen bir tekerlek toplayıcı ve B. üzerine bükülmüş liflerin Bağlantısızlar rasgele lifler sabit bir plaka toplayıcı üzerine döndü. Ölçek bar = 20 mm. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2) PLL kaplı A. 24 saat sonra kültür TuJ1 (yeşil) ve DAPI (mavi) elyaf ve B. lekeli Temsilcisi motor nöronlar) cam. Ölçek bar = 20 mm. <img src="/files/ftp_upload/2389/2389fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 PLL kaplı A. 3 gün sonra kültür nörofilaman Temsilcisi DRG boyandı (yeşil)) cam ve B.) lifleri. Ölçek bar = 200 mm. <table border="1"><tbody><tr><td> Stok çözelti: </td><td> MN medya: </td><td> DRG / SN medya: </td></tr><tr><td> 10 mg mL -1 albümin </td><td> 12.5 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 10 mg mL -1 apo-transferrin </td><td> 50 ul </td><td> 40 ul </td></tr><tr><td> 50 mg mL -1 β-östradiol </td><td> 2.7 ul </td><td> 2.2 ul </td></tr><tr><td> 0.1 mg mL -1 biotin </td><td> 50 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 16 mg mL -1 katalaz </td><td> Ul 8 </td><td> - </td></tr><tr><td> 15 mg mL -1 D-galaktoz </td><td> 50 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 50 mg mL -1 hidrokortizon </td><td> 3.7 ul </td><td> 2.9 ul </td></tr><tr><td> 0.63 mg mL -1 progesteron </td><td> 0.5 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 16 mg mL -1 putrescine </td><td> 50 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> 50 mg mL -1 selenyum </td><td> 3.4 ul </td><td> 4.1 ul </td></tr><tr><td> 2.5 mg mL -1 süperoksit dismutaz </td><td> 50 ul </td><td> - </td></tr><tr><td> * 500 ng mL -1 sinir büyüme faktörü </td><td> - </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> * 100X PSN </td><td> 0,5 mL </td><td> 0,5 mL </td></tr><tr><td> * B27 </td><td> 1 ml </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> * 2 mM L-glutamin </td><td> 35 ul </td><td> 35 ul </td></tr><tr><td> * Neurobasal </td><td> 50 ml </td><td> 50 ml </td></tr></tbody></table> Tablo 1: kullanımdan hemen önce medyaya (*) bileşenleri oynadı ekleyin. Geri kalan bileşenleri bir stok solüsyonu olarak hazırlanan ve 6,7 ihtiyaç duyulana kadar -20 ° C'de muhafaza edilebilir. <table border="1"><tbody><tr><td> Primer (konsantrasyon) </td><td> Nöronlar: </td><td> Glia: </td><td> Fibroblastlar: </td></tr><tr><td> anti-β-tubulin (TuJ1) (1:1000) </td><td> ✓ </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> anti-nörofilaman (1:1000) </td><td> ✓ </td><td> X </td><td> X </td></tr><tr><td> anti-S-100 (1:250) </td><td> X </td><td> ✓ </td><td> ✓ </td></tr><tr><td> anti-NGFR P75 (1:500) </td><td> ✓ </td><td> ✓ </td><td> X </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Primer antikor seçim araştırmacının hedeflerine bağlıdır. Yukarıda birkaç antikorlar ve laboratuvarda başarı ile kullanılan konsantrasyonları. S-100, Schwann hücreleri ve / veya fibroblastlar kirlenmesine kontrol tanımlamak, ancak glia ve fibroblasts4 ayırt etmek NGFR P75 ile birlikte kullanılmalıdır gerektiğini özellikle yararlıdır. Ayrıca nörofilaman veya TuJ1 amacı bireysel neurites görselleştirmek için ise mükemmel bir seçimdir NGFR P75 lekeleri çok hafifçe neurites fark var. </pclass>

<ol><li>Corey, J. M., Gertz, C. C., Wang, B. S., Birrell, L. K., Johnson, S. L., Martin, D. C., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+electrospun+PLLA+nanofiber+scaffolds+compatible+with+serum-free+growth+of+primary+motor+and+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Biomater%22%5BJournal%5D)">The design of electrospun PLLA nanofiber scaffolds compatible with serum-free growth of primary motor and sensory neurons.</a> Acta. Biomater. 4, 863-875 (2008).</li>
<li>Lin, D. Y., Johnson, M. A., Vohden, R. A., Chen, D., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailored+nanofiber+morphologies+using+modulated+electrospinning+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Mat.+Res.+Soc.+Symp.+Proc%22%5BJournal%5D)">Tailored nanofiber morphologies using modulated electrospinning for biomedical applications.</a> Mat. Res. Soc. Symp. Proc. 736, D3.8.1-D3.8.6 (2003).</li>
<li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBanker%2C+G+%22Culturing+Nerve+Cells%22">Culturing Nerve Cells</a>. , MIT Press. Chapter 19 (1998).</li>
<li>Kameda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+glial+progenitor+markers+p75NTR+and+S100+protein+in+the+developing+mouse+parathyroid+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Expression of glial progenitor markers p75NTR and S100 protein in the developing mouse parathyroid gland.</a> Cell Tissue Res. 327, 15-23 (2007).</li>
<li>Corey, J. M., Lin, D. Y., Mycek, K. B., Chen, Q., Samuel, S., Feldman, E. L., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aligned+electrospun+nanofibers+specify+the+direction+of+dorsal+root+ganglia+neurite+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Aligned electrospun nanofibers specify the direction of dorsal root ganglia neurite growth.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 83, 636-645 (2007).</li>
<li>Vincent, A. M., Mobley, B. C., Hiller, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IGF-I+prevents+glutamate-induced+motor+neuron+programmed+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">IGF-I prevents glutamate-induced motor neuron programmed cell death.</a> Neurobiol. Dis. 16, 407-416 (2004).</li>
<li>Russell, J. W., Windebank, A. J., Schenone, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor-I+prevents+apoptosis+in+neurons+after+nerve+growth+factor+withdrawal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor-I prevents apoptosis in neurons after nerve growth factor withdrawal.</a> J. Neurobiol. 36, 455-467 (1998).</li>
<li>Gertz, C. C., Leach, M. K., Birrel, L. K., Martin, D. C., Feldman, E. L., Corey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+neuritogenesis+and+maturation+of+primary+spinal+motor+neurons+in+response+to+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Accelerated neuritogenesis and maturation of primary spinal motor neurons in response to nanofibers.</a> Dev. Neurobiol. 70, 589-603 (2010).</li>
<li>Tan, S. -H., Kotaki, M., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+parameter+study+for+ultra-fine+fiber+fabrication+via+electrospinning+process%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Systematic parameter study for ultra-fine fiber fabrication via electrospinning process.</a> Polymer. 46, 6128-6134 (2005).</li>
<li>Wang, H. B., Mullins, M. E., Cregg, J. M., Hurtado, A., Oudega, M., Trombley, M. T., Gilbert, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+highly+aligned+electrospun+poly-L-lactic+acid+fibers+for+nerve+regeneration+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Creation of highly aligned electrospun poly-L-lactic acid fibers for nerve regeneration applications.</a> J. Neural Eng. 6, (2009).</li>
</ol>

Bu protokol, pek çok kritik adımlar vardır. Ilk electrospun fiber yüzeylerin uygun üretim içerir. PLLA lifler, PLGA film ve PLGA hendek sıvı medya, tek bir birim olarak cam kapak slip ayrı olacaktır. PLGA atlanırsa, PLLA lifleri, düz bir levha kalamaz kullanılamaz karmaşasının içine kıvrılıp. Böylece, PLGA filmi kültür sırasında fiber uyum sağlamak için uygun bir substrat olarak yer almaktadır. Hendek lifler güvenli PLGA film sabit ve filmin yapısal katılık eklemek sağlamak için her iki iplik sonra eklenir. Yüzeyler, montaj, boyama ve montaj sırasında manipüle hendek de yararlı bir kolu olarak hizmet vermektedir. Öğütme ikinci kritik bir adımdır. Kabarcık oluşumunu önlemek için her türlü çabayı yapılmalıdır. Ayrıca, bu adımı bir yangın cilalı pipet kullanıldığında çok daha yüksek verim elde edilmiştir. Lehçe yangın, bir Bunsen beki ışık ve pipet bir ampul takın. Sürekli sıkma ve ampul bırakırken alev ile 2-3 kez hızlı bir şekilde pipet ucu Pass - pipet ile hava akışı tamamen kapatarak ucu önlemeye yardımcı olur. Pipet ucu delik hala açık olduğundan emin olmak için inceleyin ve kullanmadan önce biraz yuvarlatılmış kenarları görünür. Elektrospinning çok yönlü bir süreçtir; elektrospinning parametreleri morfolojileri çeşitli lifler üretmek için modifiye edilebilir. , Tan ve ark. (2005) PLLA electrospun liflerin çapı etkileyen parametrelerin sistematik bir çalışma . Wang ve ark (2009), hizalama electrospun PLLA lifleri etkileyen parametreler detaylı bir çalışma sunar .

<table><tbody><tr><td>PLLA</td><td>Boehringer Ingeheim</td><td>Resomer L210</td><td></td></tr><tr><td>PLGA 85:15</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43471</td><td></td></tr><tr><td>L15</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11415</td><td></td></tr><tr><td>Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2289</td><td></td></tr><tr><td>Apo-transferrin</td><td>Akorn Inc</td><td>AK8227</td><td></td></tr><tr><td>Biyotin</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC 23009-0010</td><td></td></tr><tr><td>Galaktoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G0625</td><td></td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7556</td><td></td></tr><tr><td>Putresin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5780</td><td></td></tr><tr><td>Selenyum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9133</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#946;-estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E 1132</td><td></td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0396</td><td></td></tr><tr><td>Katalaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Süperoksit dismutaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4636</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>PSN</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15640</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Nalge Nunc international</td><td>1680149</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Nalge Nunc international</td><td>1689149</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovin serum</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>26140</td><td></td></tr><tr><td>Optiprep</td><td>Accurate Chemical &amp;amp; Scientific Corporation</td><td>2011</td><td></td></tr><tr><td>PLL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4832</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F 4759</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TuJ1</td><td>BD Biosciences</td><td>556321</td><td></td></tr><tr><td>Anti-nörofilament</td><td>EMD Millipore</td><td>AB1987</td><td></td></tr><tr><td>Anti-S100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2532</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NGFR p75</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N3908</td><td></td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6767</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8032</td><td></td></tr><tr><td>Karbon bant</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>13073-1</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold +DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P36931</td><td></td></tr></tbody></table>

kültür İlköğretim motor ve electrospun poli-l-lactide nanofiber yapı iskeleleri tanımlı medya duyu nöronlar

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Elektrospinning nano ölçekli liflerin mikro üretmek için kullanılan bir tekniktir. Elyaf yüksek tamamen rasgele hizalanır, uyum değişen derecelerde ile electrospun olabilir. Buna ek olarak, lifler, poli-L-laktik asit (PLLA) gibi biyolojik olarak parçalanabilen polimerler dahil olmak üzere çeşitli malzemeler spun olabilir. Bu özellikler, doku mühendisliği iskele uygulamaları bir dizi için uygun electrospun elyaf olun. Bizim odak sinir rejenerasyonu için hizalanmış electrospun liflerin kullanımı ile ilgili. Biz daha önce hizalı electrospun PLLA lifleri in vitro hem de primer duyu ve motor nöronların akıbet doğrudan göstermiştir . Biz mümkün olduğunca yakın bir in vivo model gerçek nöronların biyomateryaller değerlendirirken birincil hücre kültürü sisteminin kullanılması gerekli olduğunu korur. Burada, fibröz iskeleleri ve kültür dorsal kök gangliyon eksplantlar, yanı sıra electrospun iskeleleri dissosiye duyu ve motor nöronlar, electrospin laboratuvarımızda kullanılan teknikler açıklanmaktadır. Ancak, elektrospinning ve / veya burada sunulan kültür teknikleri kolayca diğer uygulamalarda kullanılmak üzere uyarlanmıştır.

Bağlantısızlar electrospun lifler in vitro nöron büyüme doğrudan ve sinir rejenerasyonu iskeleleri potansiyel bir bileşenidir. Biz electrospun elyaf yüzeyleri ve birincil sıçan E15 duyusal (DRG) ve motor nöronların serum serbest kültür hazırlanması için bir prosedür açıklanmaktadır. Immünsitokimya tarafından nöronların Görselleştirme de dahildir.

Kültür İlköğretim Motor ve Electrospun Poli-L-lactide Nanofiber Yapı iskeleleri Tanımlı Medya Duyu Nöronlar

Elektroeğirme, mikro ila nano ölçekli liflerin üretimi için kullanılan bir tekniktir. Lifler, yüksek düzeyde hizalanmış liflerden ... kadar değişen hizalanma derecelerinde elektroeğirme yöntemiyle üretilebilir.

Hizalanmış elektre spun BUN lifleri, in vitro nöron büyümesini yönlendirir ve sinir rejenerasyon iskelelerinin potansiyel bir bileşenidir. Burada, elektre spun BUN lif iskeleleri üretilmiş ve üzerlerinde primer sıçan duyusal ve motor nöronlar büyütülmüştür. İlk olarak, cam lameller üzerine elektre spun yöntemiyle lifli iskeleler oluşturulur.Ardından, embriyonik 15. gündeki sıçanlardan primer nöronlar elde edilir ve elektroeğirme fiber iskeleler üzerinde kültüre edilir. Nöronların yapışması ve büyümesi için süre tanınır; ardından immünositokimyasal teknikler kullanılarak fikse edilir ve boyanırlar. Görüntüleme sonuçları, elektroeğirme fiberler üzerinde kültüre edilen nöronların morfolojisindeki değişiklikleri ortaya koyarak, elektroeğirme fiberlerin nanotopografyasının nörit çıkışını yönlendirebileceğini göstermektedir.Bu tekniğin transform edilmiş hücre hatlarının kullanımı gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, primer nöronların in vitro ortamda, transform edilmiş hücrelere kıyasla in vivo nöron davranışlarını daha yakından taklit etmesidir. Bu teknikler, izleyicilere elektro-iletken lifleri diğer hücre tipleriyle birlikte kullanma imkanı sunar. Alternatif olarak izleyiciler, kültürlenmiş motor ve duyusal nöronları diğer araştırma amaçları için kullanmak isteyebilirler.Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, elektro eğirme işleminin hassas bir süreç olması nedeniyle zorluk yaşayacaklardır; bu durumu beraberindeki video makalemizde daha ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Elektro eğirme fiber substratlarını hazırlamak için önce, düşük ısıda karıştırarak kloroform içinde %8'lik 85:15 polilaktik ko-glikolik asit veya PLGA çözeltisi ve kloroform içinde %4'lük poli L-laktid veya PLLA çözeltisi hazırlayın. Ardından, her bir lamın yüzeyini PLGA çözeltisi ile kaplayarak temiz cam lamları PLGA ile kaplayın. PLGA'nın yaklaşık 30 dakika süren ince bir film tabakası şeklinde kurumasını bekleyin.PLGA kuruduktan sonra, PLGA kaplı lamı, hizalı fiberler üretmek için motorlu bir tekerleğe veya rastgele fiberler için sabit bir plakaya sabitlemek için iletken karbon bant kullanın. %4 PLLA çözeltisi içeren bir şırıngayı, kolektörden 20 santimetre uzağa konumlandırılmış uçlu bir pompaya yerleştirin.Pompayı yaklaşık 0,22 mililitre/saat hızına ayarlayın. Tekerlek motorunu dakikada 300 ile 400 devir arasına ayarlayın. Kolektöre eksi iki kilovolt DC bias, metal uçla temas halinde olan iletken plakaya ise artı 15 kilovolt uygulayın.Bipolar bir güç kaynağı toprağına erişim sağlanamadığında, kolektör başlatılır; şırınga pompasındaki fiberler şırınga ucundan fışkıracak ve dönen tekerlek üzerinde toplanacaktır. İstenen fiber yoğunluğu elde edilene kadar döndürme işlemine devam edin; metal ucun tıkanmasını önlemek için belirli aralıklarla ucu, iletken olmayan bir çubuğa sabitlenmiş kağıt havlu ile silin. Döndürme işlemi tamamlandıktan sonra, lamelin çevresine PLGA hattı pipetleyin. Bu işlem, elektrotların etrafına esasen bir hendek yerleştirmek anlamına gelir.Numuneler, PLGA'nın kuruması için bekletilir. Bu işlem, kültürleme sırasında fiberlerin hizalanmasını koruyacaktır. Elektro-eğirme fiberlerin ve cam kontrollerin, hücre kültürü öncesinde protein ile kaplanması gerekir.Bunu yapmak için, alt tabakaları en az bir saat boyunca polyol, lizin, laminin veya fibronektin ile kaplayın. Ardından, alt tabakalar kuruyana kadar fazla solüsyonu aspire edin. Polyol lizin kullanılıyorsa, ilk kaplamayı takiben alt tabaka steril su ile durulanmalı ve iki kez kurutulmalıdır.Kuruduktan sonra, elektropun fiberleri üzerinde büyütülecek kültür hücrelerini hazırlamak için substratları altı kuyucuklu doku kültürü plaklarına yerleştirin. Ötanazi uygulanmış gebe bir sıçandan E 15 embriyolarını alın. Bölgeyi %70 ethanol ile sterilize ederek ve ardından karın derisini gererek işleme başlayın.Karın boşluğunu açığa çıkarmak için deri ve kas tabakalarını kesin. Uterusu bulun; serviks ve overlerden ayırın. Uterusu steril bir kaba aktarın.Ardından embriyoları makas yardımıyla uterustan çıkarın ve derhal sıcak L 15 içine yerleştirin. Embriyoların başlarını kestikten sonra, omuriliği bir pens setiyle koruyarak bir embriyoyu yan tarafına yatırın. Uzuvları ve abdominal organları sıyırmak için diğer pens setini kullanın.Ardından, embriyoyu çevirin ve bir penset ile sabit tutun. Tüm omurilik açığa çıkana kadar, boyundan kuyruğa doğru embriyo boyunca hafifçe kesin. Omuriliğin ucunu dikkatlice tutun, ardından kuyruk yönüne doğru kendi üzerine doğru çekin.Çıkarmak için, kordon; membran ve dorsal root ganglia ile birlikte serbestçe çekilecektir. Eğer bir dorsal root ganglia x explan veya disosiye duyusal nöron kültürü yapılacaksa, dorsal root ganglia'yı kordondan kesin ve sıcak L 15 içeren yeni bir kaba aktarın. Motor nöron kültürü için.Membranı, omuriliğin ön ucundan kavrayın ve aşağıya doğru soyun. Uzun bir çorabı çıkarmaya benzer şekilde, bu işlemi tüm embriyolar için tekrarlayın ve ardından pens kullanarak omurilikleri, motor nöron kültürleri elde etmek için küçük parçalara bölün.Doğranmış spinal kordları ve L 15'i konik bir tüpe aktarın ve 180 ×g kuvvetinde iki ila üç dakika santrifüjleyin. Parçaları çöktürmek için süpernatantı uzaklaştırın ve çöktürülmüş kordların üzerine üç mL tripsin ekleyin. Tüpü 37 °C'lik bir su banyosuna yerleştirin ve 20 dakika inkübe edin.İnkübasyonun ardından, konik tüpe üç mililitre FBS ekleyin. Ardından, FBS'yi çöktürmek için 180 ×g'de iki ila üç dakika boyunca santrifüjleyin. Bu sırada, FBS'yi pipete çekip ardından dışarı iterek COTA alevle cilalanmış pasta pipetini FBS ile yıkayın.Bu işlem, triürasyon sırasında doku parçalarının cama yapışmasını önler. Santrifüj işleminden sonra supernatantı uzaklaştırın. Ardından, çözelti görünür topaklar içermeyecek şekilde homojen hale gelene kadar, FBS kaplı pipet kullanarak konik tüpe bir pasta pipeti dolusu L 15 ekleyip nazikçe triüre edin.Hava kabarcığı oluşumundan kaçının. Her iki embriyo için üç mililitre %9'luk opre in L 15 içeren bir tüp hazırlayın. Embriyo sayısı tek ise bir damla daha ekleyin.Homojenize edilen çözeltiyi, homojenatı tüm tüplere eşit şekilde paylaştırarak OptiPrep çözeltisinin üzerine ekleyin. Homojenat, OptiPrep çözeltisinin üzerinde görünür bulanık bir tabaka oluşturacaktır. Tüpleri 700 ×g hızda 15 dakika boyunca santrifüjleyin.Her tüpün üst kısmından iki mililitreyi dikkatlice toplayın ve 50 mililitrelik konik tüpe çekin. Konik tüpü L 15 ile doldurun ve hücreleri opre'den arındırmak için 180 ×g hızda beş dakika santrifüjleyin. Süpernatanı uzaklaştırın.Pelet nadiren gözle görülür. Bu aşamada, Reese, hücreleri az miktarda ekim medyası içinde süspanse et. Canlı hücreleri belirlemek için tripan mavisi dışlama yöntemiyle hücre sayımı yap.Hücreler artık ekime hazırdır. Duyusal nöron kültürleri elde etmek için %90'ın üzerinde nöron saflığı beklenir. Omuriliklerden ve L 15'ten çıkarılan dorsal root ganglionlarını konik bir tüpe dökerek başlayın.Santrifüjasyon sonrası parçaları çöktürmek için 180 xg hızında iki ila üç dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı dökün ve çöktürülmüş DRG'ye üç mililitre tripsin ekleyerek 37 °C'lik bir su banyosunda inkübe edin. 10 dakika sonra tüpü su banyosundan çıkarın, tüpe üç mililitre FBS ekleyin ve tekrar çöktürmek için 180 xg hızında iki ila üç dakika boyunca santrifüjleyin.Bu sırada, ateşle cilalanmış bir pasta pipetini FBS ile kaplayın. Daha önce olduğu gibi, pelete bir tam pipet dolusu L 15 eklemek için FBS ile kaplanmış pipeti kullanın ve çözelti, görünür topaklar kalmadan homojen hale gelene kadar nazikçe tritüre edin. Homojenatı 180 ×g'de beş dakika boyunca santrifüj ettikten sonra hava kabarcığı oluşmasını önleyin.Süpernatanı uzaklaştırın ve hücreleri az miktarda duyusal nöron ekim medyumunda yeniden süspande edin. Canlı hücreleri belirlemek için tripan mavisi dışlama yöntemiyle hücre sayımı yapın. Hücreler artık duyusal veya motor nöron kültürü için ekime hazırdır.Protein kaplı elektro eğrilmiş fiber substratların üzerine birkaç damla besiyeri damlatarak başlayın. Ardından uygun hacimde hücre süspansiyonu ekleyin. Ayrıştırılmış hücreler düşük yoğunlukta ekilmelidir.Kuyucukları besiyeri ile doldurup kültürleme için inkübatöre geri yerleştirmeden önce, hücrelerin inkübatörde en az bir saat boyunca yapışmasına izin verin. Protein kaplı elektro eğirme fiber altlıkların üzerini birkaç damla besiyeri ile kapatın. Ardından, dorsal kök ganglionlarını besiyerine ekleyin.Dorsal root ganglionlarının substrat üzerine eşit şekilde dağılmasını sağlayın. 22 by 22 milimetrelik bir lamel üzerine yaklaşık dört dorsal root ganglionu sığacaktır. Dorsal root ganglionu kültürlerini 37 °C'deki inkübatöre yerleştirin ve inkübasyon sonrası yapışmaları için en az dört saat bekleyin.Kuyucukları medya ile doldurun ve inkübatöre geri yerleştirin. Kültürler, medya değişimi yapılmadan dört güne kadar sürdürülebilir. Daha uzun süreli kültürler için, besleme medyası ile yarı medya değişimi yapılmalıdır.Besleme ortamı, L-glutamin hariç, ekim ortamı ile aynı bileşime sahiptir. Hücreler istenen zaman noktasına ulaştığında, beraberindeki yazılı protokoldeki talimatlara göre immünositokimya uygulanabilir. Bu SEM görüntüsü, hizalanmış ve rastgele elektroeğirme yöntemiyle üretilmiş fiberlerin tipik morfolojisini göstermektedir.Lif hizalaması, toplayıcının seçimine göre düzenlenir. Döner bir tekerlek toplayıcıya eğrilen liflerin tekdüze bir şekilde hizalandığına dikkat edin. Buna karşılık, sabit bir toplayıcıya eğrilen lifler rastgele bir morfolojiye sahiptir.Bu görüntüler, yeşil renkte gösterilen beta tubulin motor nöron boyamasını ve mavi renkteki DPI çekirdek boyamasını göstermektedir. PLL kaplı fiberler ve fiberler üzerindeki cam üzerinde 24 saatlik kültürden sonra, motor nöronlar tipik olarak hücre gövdesinden fiber hizalanma yönüne (bu görüntüde soldan sağa) paralel uzanan birkaç uzantıya sahiptir. Fiberler üzerinde kültüre edilen hücrelerin ana uzantıları, eş zamanlı olarak cam üzerinde kültüre edilen hücrelerin ana uzantılarından çok daha uzundur.Cam üzerindeki motor nöronlar tipik olarak 24. saatte, hücre gövdesinden radyal olarak uzanan daha fazla uzantıya sahiptir. Fiberler üzerinde kültüre edilen nöronlar. Bu görüntülerde, ana uzantı cam üzerinde fiberlerde görülene göre daha kısadır.Dorsal kök ganglionları, yeşil renkte gösterilen nörofilaman için boyanmıştır. PLL kaplı cam ve cam üzerindeki fiberler üzerinde üç günlük kültürden sonra, nöritler dorsal kök ganglionundan radyal olarak yayılır. Ayrıca, fiberler üzerindeki komşu nöritler arasında belirgin bir örtüşme vardır.Neuritler ayrıca gangliondan radyal olarak yayılırlar. Ancak, daha sonra yön değiştirerek hizalanmış fiberlerin yönünü takip ederler. Bu prosedürler ustalıkla uygulandığında, komşu nöritlerin birbiri üzerine binme oranı önemli ölçüde azalır.Elektroeğirme yaklaşık 30 dakikada tamamlanabilir ve motor ile duyusal nöronlar yaklaşık iki saat içinde elde edilebilir. Bu prosedür uygulanırken steril teknik kullanmaya dikkat etmek önemlidir. Nöronal sağkalımı maksimize etmek için iterasyon adımında ateşle cilalanmış bir pipet kullanılması gereklidir.Ek olarak, adezyon molekülünü ve elektro eğirme ile üretilmiş fiberleri uygun süre boyunca inkübe etmek önemlidir. Örneğin, fiberler bir saatten daha kısa süreyle polilizin ile kaplanırsa, hücre adezyonunu desteklemek için yetersiz kaplama oluşacaktır. Ancak, polilizin gece boyunca kalması gibi çok uzun süre tutulursa, fiberler bozunabilir.Ayrıca, çoğu mikroskobun kültür sırasındaki lifler üzerindeki nöronların görüntülenmesine izin vermeyeceğini hatırlamak önemlidir. Bunun nedeni, liflerin ve nöronal uzantıların birbirine çok benzemesidir. Bu videoyu izledikten sonra, elektro eğirme lif substratları üzerinde embriyonik 15. gün sıçanlarından motor ve duyusal nöronların primer kültürlerinin nasıl büyütüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Yüksek voltajlarla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve uygun önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın. Operatörü elektrospinning düzeneğinden izole etmek için her zaman gerekli önlemler alınmalıdır.

the-culture-primary-motor-sensory-neurons-defined-media-on

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Elektrospinning iskelelerinin doku mühendisliği uygulamaları için post prodüksiyon işlenebilir. Burada kısırlık (aseptik üretim veya sterilizasyon post prodüksiyon) ulaşmak için ve uygun biyomekanik özellikleri elde etmek için, daha kalın iskeleleri (çoklu katman ısı kullanarak veya buhar tavlama ile) yapmak için, karmaşık iskeleleri (ardışık eğirme) eğirme yöntemleri açıklanmaktadır.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Bu video, ipek-kollajen iskeleleri kullanılarak 3D polarize bir nöral doku modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Nöronal hücrelerin gözenekli ipek iskeleler üzerine ekilmesi, hücre bağlanması için kuluçkaya yatırılması, iskelenin kollajen ile gömülmesi sürecini detaylandırıyor ve 3D polarize nöral doku modeli oluşturmada destekleyici kollajen matrisinin önemini vurguluyor.

Polarize nöral dokunun tasarlanmış ipek kollajen bazlı 3D modelinin geliştirilmesi

Bu protokol, nöronları yönlendirmek için doku mühendisliği iskeleleri geliştirmek için elektrospinning ve mikroküreleri birleştirir. Sinir büyüme faktörü PLGA mikroküreleri içinde kapsüllendi ve Hyaluronik Asit (HA) fibröz iskelelere elektrospre edildi.  Protein biyoaktivitesi, iskelelerin birincil civciv Dorsal Kök Gangliyonları ile tohumlanması ve 4-6 gün boyunca kültürlenmesi ile test edildi.

Lifli iskelelerinin içine Microspheres ibra Elektroeğirme Büyüme Faktörü

Poli (gliserol-dodekanoat) adında yeni bir biyolojik polimerden bir yeni tasarlanmış toplayıcı aracılığıyla daha geniş bir alanı kapsayan mevduat electrospun uzun liflerin (PGD) Sentezi ve fabrikasyon bildirildi. Lifler fare pluripotent kök hücrelerinden türetilen hücrelerin büyümesini desteklemek mümkün.

Fare Embriyonik kök hücrelerden Mühendislik Sinir Dokular için Poli electrospun fibröz iskeleleri (gliserol-dodecanedioate)

Bu makale, insan mezenkimal kök hücrelerinin, bilinen tohumlama yoğunluğuna kıyasla başlangıçta bağlanan hücre sayısını en üst düzeye çıkarmak ve ölçmek için standart kültür kuyusu plakalarının tabanını kaplamayan malzemelere, bu durumda elektro eğrilmiş ipliklere tohumlanması için bir dizi kurulumu açıklamaktadır.

Poli (ε-kaprolakton) electrospun İplik İnsan Mezenkimal Kök Hücre Ek Optimize

Burada, biz liflerin Basamaklandırılmış organizasyonu ile electrospun nanolif iskeleleri imal ve hücre morfolojisi / yönünü düzenleyen kendi uygulamalarını keşfetmek için bir protokol mevcut. Nanolif iskelelerinin fiziksel ve kimyasal özellikleri açısından Degrade'ler biyomedikal alanındaki uygulamalar geniş bir yelpazede sunuyoruz.

Fiber Teşkilatı geçişleri ile electrospun Nanolif iskeleleri

Beynin karmaşık eylemlerine ilişkin içgörü, gelişmiş araştırma araçları gerektirir. Burada, beyin benzeri mimariye benzeyen yeni bir ipek kollajen bazlı 3D mühendislik nöral doku modelini gösteriyoruz. Model, nöronal ağ montajı, aksonal rehberlik, hücre-hücre etkileşimleri ve elektriksel aktiviteyi incelemek için kullanılabilir.

Polarize Sinir Doku Engineered 3D İpek-kolajen bazlı Modeli

Biyomalzeme teknolojilerindeki gelişmeler, üç boyutlu çok hücreli tip yapıların geliştirilmesini sağlar. Hava yolu bronşiyol duvarının 3D in vitro modelini sağlamak için hava yolunun ana yapısal hücrelerini kültürlemek için üç ayrı iskele üretmek için elektrospinning protokolleri geliştirdik.

Elektrospinning Süreci Uyarlama bir Tri-katmanlı için üç Benzersiz ortamlar sağlamak için<em&gt; In Vitro</em&gt; Havayolu Wall Modeli

Burada, biz fare 3D kültür için bir protokol beyin kaynaklı glia hücreleri, astrocytes, microglia ve oligodendrocytes de dahil olmak üzere mevcut. Biz birincil hücre kültürü, methacrylated hyaluronik asit (HAMA) hidrojel sentezi, HAMAphoto polimerizasyon ve hücre saklamasını ve confocal ve tarama elektron mikroskobik görüntüleme için işleme örnek göstermektedir.

Geliştirilmiş 3D hidrojel Neuroinflammation Vitro modelleme için birincil gliyal hücreler kültürleri

Bu metodoloji, substrat sertliği, protein bileşimi ve hücre morfolojisi gibi hücre dışı matris ipuçlarının Schwann hücresi (SC) fenotipini düzenleyen mekanizmalarını göstermeyi amaçlamaktadır.

Schwann Hücre Fenotip Spesifikasyonunu Değerlendirmek Için Hücre Dışı Matriks Mikroortamlarının Hazırlanması

Burada, nanofibröz membran bazlı iki katmanlı sistemde fibroblastlarla kültürlenen epitel hücrelerinin membrana nasıl stabil bir şekilde yapışabileceğini ve zar üzerinde büyüyebileceğini gösteriyoruz.

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Öğrenin, elektrospun nanofiber iskeleler üzerinde embriyonik gün 15 sıçan duyu ve motor nöronlarının serum içermeyen kültür yöntemini. Bu teknik, sinir rejenerasyonu ve doku mühendisliği araştırmalarında biyouyumlu yapıların geliştirilmesine katkı sağlar.

Kültür İlköğretim Motor ve Electrospun Poli-L-lactide Nanofiber Yapı iskeleleri Tanımlı Medya Duyu Nöronlar

Daha fazla video keşfet