Nöral Hücre Süspansiyonunun Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fareye Stereotaksik Nakli

Stereotaksik bir şırınga pompasına bağlı önceden yüklenmiş bir şırınga ile başlayın.

Şırınga, insan kaynaklı pluripotent kök hücreden türetilmiş bir nöral hücre süspansiyonu içerir.

İğneyi, travmatik beyin hasarı olan bir farenin cerrahi olarak maruz kalan beyin korteksinin üzerine yerleştirin.

İğne ucuyla duraya dokunmak için şırıngayı indirin, yaralanma bölgesini hedef alacak şekilde koordinatları ayarlayın ve hafifçe geri çekin. Şimdi

, iğne için bir giriş noktası oluşturan küçük bir kesi oluşturun.

Ardından, hücre süspansiyonunun akışına izin vermek için pistonu indirin.

İğneyi indirin ve derin korteksin gri madde-beyaz madde sınırına ulaşmak için beyne nüfuz edin.

Son olarak, hidrasyonu korumak için cerrahi bölgeyi tuzlu su ile sularken hücre süspansiyonunu yavaşça infüze edin.

Tamamlandıktan sonra iğneyi geri çekin, yeniden yıkayın ve kesiği kapatın.

Zamanla, nakledilen hücreler olgunlaşır, sinir devrelerini eski haline getirir ve beyin hasarını onarır.

Kraniektomiden yaklaşık 24 saat sonra, fareyi tekrar stereotaksik çerçeveye yerleştirin.

Fareyi fenestre cerrahi örtü ile örtün. Bölgeyi temizlemek ve dikişleri gevşetmek için kesi bölgesini steril tuzlu su ile lavajlayın. Kesi bölgesini nazikçe sterilize etmek için %70 etanole batırılmış bir pamuklu çubuk kullanın ve dikişleri çıkarmak için ince cımbız ve oftalmik makas kullanın.

Daha sonra ameliyat ve kraniektomi bölgesini bol miktarda steril tuzlu su ile sulayın. Bir hücre kültürü biyogüvenlik başlığında, homojen bir hücre süspansiyonu sağlamak için hücre tüpünü hafifçe döndürün veya hafifçe vurun. Piston ucundan bir Hamilton şırıngasına yaklaşık 7,5 mikrolitre hücre yüklemek için bir mikropipet kullanın.

Şırıngayı, piston ucu aşağı bakacak şekilde 120 derecelik bir açıyla tutarak, süspansiyon ile piston ucu arasına hava kabarcığı girmemesine dikkat ederek pistonu yerleştirin. Conta tertibatını pipet iğnesine takın ve iğneyi şırıngaya takın. Hücre süspansiyonunu pipet iğnesine taşımak için pistonu itin ve şırıngayı stereotaksik şırınga pompasına takın.

Şırınga pompası tertibatının düzgün çalıştığından emin olmak için pistonu ilerletin ve iğneyi enjeksiyon için koordinatlara hareket ettirin. İğne ucunu bregma ile hizalayın ve x ve y koordinatlarını sıfıra ayarlayın. İğne ucunu kraniektomi üzerinden bregmanın iki milimetre lateral ve eksi bir milimetre arkasına hareket ettirin ve iğne ucunu dura mater yüzeyine dokundurun.

İğneyi hafifçe kaldırın, ardından iğnenin temas ettiği yerde dura materde küçük bir kesi yapın. Stereotaksik koordinatı z sıfıra eşit olacak şekilde ayarlayın ve iğneyi beyne sokmadan önce hücre süspansiyonunun yeterince aktığını doğrulamak için pistonu itin. Grefti derin korteksin gri madde / beyaz madde sınırına yerleştirmek için iğneyi beyne z eşittir eksi 1.4 milimetre derinliğe kadar sokun.

Hücre süspansiyonunu 15 dakikalık bir süre boyunca infüze etmek için şırınga pompasını başlatın. Hücre süspansiyonu çıkışını izlemek için uzun bir çalışma mesafesi mikroskobu kullanın, doku hidrasyonunu korumak için enjeksiyon sırasında ameliyat bölgesini steril tuzlu su ile sulayın. Tüm hücreler teslim edildiğinde, nakil iğnesini yavaşça geri çekin ve kesiyi yeni dikişlerle kapatmadan önce ameliyat bölgesini ek tuzlu su ile sulayın.

Daha sonra gösterildiği gibi ameliyat sonrası bakım sağlayın.