Alfa-sinüklein ekspresyonunun epigenetik regülasyonu için nöral progenitör hücrelerin lentiviral transdüksiyonu

Bir ısı bloğunda bir kriyoprotektan ile depolanan nöral progenitör hücreleri veya NPC'leri çözün.

Bu NPC'ler, Parkinson hastalığında önemli bir faktör olan artmış alfa-sinükleini eksprese eder.

Kriyoprotektanı seyreltmek için çözülmüş hücreleri ılık bazal ortam içeren bir tüpe aktarın.

Hücreleri peletlemek için santrifüjleyin, süpernatanı çıkarın, ve peleti nöral ortamda yeniden süspanse edin.

Hücre süspansiyonunu ECM kaplı çok kuyulu bir plakaya ekleyin ve hücre yapışmasına ve çoğalmasına izin vermek için inkübe edin.

Kılavuz RNA, devre dışı bırakılmış Cas9-DNA metiltransferaz ve bir antibiyotiğe dirençli gen içeren lentiviral vektörler ekleyin.

Viral girişi, viral RNA'nın ters transkripsiyonunu, konakçı genomuna entegrasyonu ve transgen ekspresyonunu kolaylaştırmak için inkübe edin.

Kılavuz RNA, dCas9'u, metiltransferaz aracılı DNA metilasyonunun alfa-sinüklein ekspresyonunu azalttığı alfa-sinüklein genine yönlendirir.

Transdüksiyon yapılmamış hücreler apoptoza uğrarken, transdüksiyon yapılan hücreleri seçmek için medyayı antibiyotik içeren nöral medya ile değiştirin.

MD NPC'li bir Cryovial'i iki dakika boyunca 37 santigrat derece ısı bloğuna yerleştirin ve çözülmüş hücreleri 10 mililitre