Bir farede utero viral transdüksiyon

Transdüksiyon için istenen bir geni içeren bir virüs karışımı ve bir tamponda bir izleme boyası alın.

Virüs-boya karışımını ince uçlu bir kılcal damara aspire edin.

Traş edilmiş bir karın bölgesi olan anestezi uygulanmış hamile bir fareyi ele alalım.

Cildi etanol ile dezenfekte edin, ardından bir betadin çözeltisi ekleyin.

Karın boşluğunu ortaya çıkarmak için orta hat kesisi yapın ve üzerine bir parafin filmi yerleştirin.

Rahim boynuzlarını açığa çıkarın ve kuruluğu önlemek için üzerlerine tampon dökün.

Embriyoların sırasını ve konumunu not edin. Enjeksiyon bölgelerine erişmek için embriyonun rahim kesesi içindeki konumunu ayarlayın.

Virüs-boya karışımını omurilik ve beyin ventriküllerine enjekte edin.

Boya dağılımını görselleştirerek doğru enjeksiyonu sağlayın.

Rahim boynuzlarını karın boşluğuna geri yerleştirin ve biraz tampon dökün.

Karın boşluğunu ve ardından cildi dikin.

Enjekte edilen virüs konak hücreye girerek hedef geni serbest bırakır ve ekspresyonunu sağlar.

İstenen hedef için dört kez 10 ila 11 viral adeno ilişkili virüs tip 1 partikül içeren ve bir aspiratör tüpüne Hızlı Yeşil boya ile etiketlenmiş özelleştirilmiş bir kılcal uç yükleyerek başlayın. Kılcal damara etiketli adeno ilişkili virüs parçacıklarından 15 mikrolitre ekleyin.

Daha sonra, anestezi uygulanmış embriyonik gün 14.5 hamile farede ayak parmağını sıkıştırmaya yanıt verilmediğini onaylayın ve cildi dezenfekte edin. Linea mediana boyunca bir cilt kesisi yapmak için kavisli tırtıklı iris forseps ve düz tungsten karbür makas kullanın. Periton duvarını kavramak için düz Dumont cımbız kullanarak, düz Vannas makasla linea alba boyunca devam edin ve karın açıklığının üzerine bir parça fenestre parafin filmi yerleştirin ve boynuzların içindeki embriyolara zarar vermeden rahim boynuzlarını ortaya çıkarmak için kaşık benzeri bir cihaz kullanın.

Rahim boynuzlarına birkaç damla 37 santigrat derece PBS uyguladıktan sonra, embriyoları rahim kesesi içinde hasar veya malformasyon açısından inceleyin. Her enjeksiyon için istenen pozisyon elde edilene kadar embriyoları keselerinin içinde dikkatlice çevirin. Embriyolar yerine oturduğunda, her embriyoya Fast Green etiketli virüs parçacık çözeltisinden bir ila iki mikrolitre enjekte edin.

Tüm embriyolar enjekte edildikten sonra, uterus boynuzlarını karın boşluğuna geri yerleştirin ve karın içine birkaç damla 37 santigrat derece PBS ekleyin. Daha sonra periton duvarını kapatmak için poliamid 6-0 boyutlu sütürler ve cildi kapatmak için poliamid 3-0 boyutlu sütürler ve Halsted's Mosquito hemostatik forseps kullanın.