Transplantasyon Modellemesi için Floresan Nöral Progenitör Hücrelerin İnsan Serebral Organoidlerine Enjeksiyonu

JoVE Encyclopedia of Experiments

Sinirbilim

0 görüntüleme • 3:40 dk • August 29th, 2025

Floresan etiketli indüklenmiş pluripotent kök hücre türevli nöral progenitör hücreler veya NPC'ler ile başlayın.

Düzgün bir hücre matrisi karışımı oluşturmak için hücreleri hücre dışı bir matris hidrojel içinde yeniden süspanse edin.

Karışımı buz üzerinde inkübe edin.

Daha sonra, bir insan serebral organoidini bir tabağa aktarın.

Fazla ortamı çıkarın ve enjeksiyon prosedürü için tabağı mikroskop altına yerleştirin.

Hücre matrisi karışımını önceden soğutulmuş, steril bir cam slayt üzerine dağıtın ve önceden soğutulmuş bir şırınga kullanarak aspire edin.

Doku bozulmasını en aza indirmek için karışımı organoid yüzeye yavaşça enjekte edin.

Organoidin kısa bir süre dinlenmesine izin verin, ardından ortam ekleyin, organoidi çok kuyulu bir plakaya aktarın ve inkübe edin.

Hidrojel katılaşır ve NPC'leri enjeksiyon bölgesine sabitler. Floresan mikroskobu kullanarak NPC'leri takip edin.

Zamanla, NPC'ler çoğalır ve organoidin uzak bölgelerine göç eder, burada olgunlaşmamış ve olgun nöronlara farklılaşırlar.

Bu, nöral hücre tedavisi için uygun, minimum organoid bozulma ile güvenilir hücre nakli sağlar.

İndüklenmiş pluripotent kök hücrelerin veya iPSC'den türetilmiş nöral progenitör hücrelerin veya NPC'lerin tek hücreli süspansiyonunu buzdan çıkararak ve bunları 4 santigrat derecede beş dakika boyunca 300 g'de santrifüjleyerek başlayın.

Süpernatanı çıkarın ve enjeksiyon başına iki mikrolitrelik bir nihai hacim elde etmek için hücre peletini mililitre çözünmüş bazal membran matrisi başına 3 miligram içinde yeniden süspanse edin. Süspansiyonu kullanana kadar hemen buzun üzerine geri yerleştirin. Önceden soğutulmuş şırıngayı daha fazla kullanım için 20 santigrat derece dondurucudan bir buz kovasına aktarın.

Daha sonra, beyin organoid plakasını inkübatörden çıkarın ve organoidi geniş delikli bir uç kullanarak 35 milimetrelik bir tabağa aktarın. Organoidleri stabilize etmek ve enjeksiyonu kolaylaştırmak için, organoide zarar vermeden ortamı mümkün olduğunca çıkarın. Enjeksiyonu kolaylaştırmak için organoidi içeren 35 milimetrelik çanağı diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin.

Organoidler enjekte edilmeye hazır olduğunda, soğutulmuş bir P20 pipet ucu kullanarak EGFP etiketli NPC hücrelerini nazikçe yeniden süspanse edin ve bu hücrelerin iki mikrolitresini önceden soğutulmuş steril bir cam slayt üzerine taşıyın. Buzdan önceden doldurulmuş bir insülin şırıngası alın ve iğnenin eğimi aşağı bakacak şekilde 2 mikrolitre hücre süspansiyonunu yavaşça yukarı çekin. Mikroskobu üzerine odaklamadan önce organoidi içeren tabağın kapağını açın.

Çanağı bir elinizle tutun, iğnenin eğimini yukarı yerleştirin. Öte yandan, hücreyi yavaşça organoid yüzeye enjekte edin. Hücreleri enjekte ettikten sonra, kapağı tekrar tabağa yerleştirin ve enjekte edilen organoidi bir ila iki dakika inkübe edin.

Ardından, organoidi geniş delikli bir uca sahip 24 oyuklu bir plakaya aktarmadan önce plakaya 500 mikrolitre organoid ortam ekleyin. Organoidi 37 santigrat derecede ve yüzde 5 karbondioksitte her iki günde bir tam bir orta değişiklikle inkübe edin.

10:16

Ev Yapımı Mini Biyoreaktörlerde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Beyin Organoidi Üretimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:56

Bağırsak Bölgesine Özgü İşlevselliği Modellemek için İnsan Organoidlerini ve Çip Üzerinde Organ Teknolojisini Birleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:42

Organoidlerin kültürü ve 3D görüntülenmesi için yüksek verimli bir platform

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:58

Kök Hücre Kaynaklı Nöronal Progenitörlerin İnsan Kortikal Dilimlerine Nakli

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:17

Fare beynindeki insan nöral progenitör hücrelerinin nakli

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:33

İnsan Beyni Organoidlerini Oluşturmak için İn Vitro Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:36

Beyin kanseri ve nörodejeneratif hastalıkların Incelenmesi için insan nöral Organoidler

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:12

İntraserebral Transplantasyon ve Fare Beynindeki İnsan Nöral Progenitör Hücrelerinin İnVivo Biyolüminesans İzlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:40

Beyin Nöronal Yaşlanmasını Modellemek için Kortikal Beyin Organoidlerinin Sağlam ve Yüksek Oranda Yeniden Üretilebilir Üretimi In Vitro

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Nöral Hücre Transplantasyonunun İnsan Serebral Organoid Modeli

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026