Name: Negatif Seçilebilir Marker Geliştirme Entamoeba histolytica /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-12T17:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: Keşfedin Entamoeba histolytica'da negatif seçim yöntemi olarak FCU1 sistemi kullanımını. 5-fluorocytosine ile transfekte hücrelerin seçici eliminasyonu genetik manipülasyon ve virülans faktörleri testinde uygulanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Dr. Philippe Erbs FCU1 gen dizisi ile sunduğunuz için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, hibe AI 26.649 tarafından desteklenen oldu.

1. Entamoeba histolytica FCU Negatif Seçim Sistemi <ol><li> Vektör kontrol hattı (HM1 / pKT3M) ve deneysel hattı (HM1/pKT3M-FCU1), daha önce açıklanan teknikler 1,2 üretildi . Tohum T-25 ölçülü balona stok tüpleri çalışma altında hatları ve TYI-S-33, 3 orta uygun antibiyotik (12 mg / ml G418) ekleyerek seçimi korumak . Matara 37 büyüme 16-18 saat sonra% 70-80 konfluent olmalıdır ° C </li><li> Sıcak TYI-S-33 orta, 5-florositozin (5-FC, Sigma) taze bir 50mm stok solüsyonu hazırlayın. Vortex titizlikle birkaç dakika için tamamen çözmek için 5-FC. Filtre sterilize filtresi 0.22 mikron geçirilerek stok solüsyonu. </li><li> 3-5 dakika buz üzerinde şişeler yerleştirerek ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 200xg santrifüj hücreleri toplamak Hasat trofozoitleri. Taze TYI orta pelletini tekrar ve hücreleri saymak. </li><li> Tipik bir deney tasarımı, son hacim 1 ml 48 plaka başına 0.5 x 10 4 hücreleri kullanır; ve her bir test durumu için üç nüsha tekrarlar . Buna ek olarak, floresan ölçümleri kolaylaştırmak için, her zaman noktası başına suşu için ayrı bir plaka kullanılır. </li><li> Her test 5-FC, konsantrasyon, üç nüsha halinde de her Tohum 0.5 x 10 4 hücreler. TYI orta antibiyotik seçimi basınç koruyun. Şimdi 5-FC stok solüsyonu ve her kuyuya trofozoitleri gereken miktarda ekleyebilirsiniz. </li><li> 37, anaerobik bir torba içinde tabak inkübe ° C </li></ol> 2. Seçim Verimliliğinin Belirlenmesi <ol><li> 2 mg / ml DMSO Hücre tracker yeşil CMFDA (Invitrogen) stok solüsyonu hazırlayın. Çalışma çözeltisi, stok serum serbest TYI ortamda 1000 kat sulandırmak yapmak için. </li><li> Orta trophozoite kültür plakaları tamamen kaldırın ve 150 mcL serum serbest TYI içeren CMFDA ile değiştirin. Devam az 37 inkübasyon ° C 1 saat. </li><li> Kuyulardan boya çözüm çıkarın ve SPECTRAmax M2 mikroplaka spectrofluorometer plaka okuma. Dalgaboyu 492 nm dalga boyunda ve 517 nm okuma floresans emisyon olmalıdır. </li><li> Test transfektanları karşı kontrol hücreleri için floresan değerleri karşılaştırın. </li><li> Her bir zaman aralığı plakaları okumaya devam edin. Her plaka uygun pozitif (TYI sadece) ve negatif (25 mg / ml hygromycin) kontrol kuyuları kullanın. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar E. histolytica transfektanları kodon optimize edilmiş rekombinant FCU1 (Şekil 1) sağlam bir ifade gösterdi. Bu protokol E. seçici eleme sonuçları doğru takip edildiğinde 0.5 mM 5-florositozin varlığı FCU1 ifade histolytica hücreleri. Kontrol hücreleri, aksine 5-FC, 5 mM konsantrasyonu normalde kadar büyüyebilir ve 72 ve 96 saatleri arasında izdiham ulaşmak devam (Şekil 2-a). Tedavi edilen kuyuların bir mikroskop altında incelendi 48 saat FCU1 taşıyan hücreleri tamamen parçalanmış. Bunlar da örnekleri çok sayıda (Şekil 2-b) içeren kantitatif çalışmalarda kullanılan hayati, boya CMFDA ile boyanarak floresan azalma gösterir. FCU1/5-FC sistemi E. için etkili ve güçlü bir negatif seçim aracı histolytica trofozoitleri. <img src="/files/ftp_upload/2410/2410fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. E. Üretimi negatif seçilebilir işaretleyici ifade histolytica HM1 transfektanları (A) FCU1 rekombinant protein, anti-c Myc antikor (üst panel) kullanarak bir western blot tespit edildi . Beklendiği gibi, bir 42kDa bant değil sadece vektör kontrolü transfektanları FCU transfektanlarından toplam lizat (bir ok ile gösterilen) tespit edilebilir. Alt panel aynı leke yükleme kontrolü gibi anti aktin antikor probed gösterir. (B) kantitatif gerçek zamanlı PCR Sonuçları lgl4 kontrol etmek için normalize FCU1 spesifik mRNA ifadesi gösteriyor. <img src="/files/ftp_upload/2410/2410fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> E. Şekil 2 in vitro ilaç duyarlılığı negatif seçilebilir işaretleyici ifade histolytica transfektanları (A) kontrol transfektanları ve (b) FCU1 ifade transfektanları 48 plaka kültür sağkalım eğrileri. Hücreleri artan konsantrasyonlarda varlığı yetiştiği prodrogu-5-florositozin; X-ekseni üzerinde gösterilir hücre sağkalım CMFDA boyama ile her bir zaman aralığı belirlendi. Y ekseni floresan birimleri temsil eder ve hücrenin hayatta kalan nüfusun doğrudan bir yansımasıdır. FCU1 ifade transfektanları 0.5mm prodrogu konsantrasyon, kontrol ile karşılaştırıldığında önemli bir duyarlılık gösterdiğini dikkat ediniz. Hücreleri com bu kuyulardan 120h zaman noktasında gözlendiilgili kontrol kuyuları (veriler gösterilmemiştir) mikroskop altında görülen konfluent büyüme için hazırlandık. Higro negatif kontrol olarak kullanılan 25μg / ml hygromycin gösterir.

<ol><li>Olvera, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+transfection+of+Entamoeba+histolytica+trophozoites+by+lipofection%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Stable transfection of Entamoeba histolytica trophozoites by lipofection.</a> Arch. Med. Res. , 49-51 (1997).</li>
<li>Saito-Nakano, Y., Yasuda, T., Nakada-Tsukui, K., Leippe, M., Nozaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rab5-associated+vacuoles+play+a+unique+role+in+phagocytosis+of+the+enteric+protozoan+parasite+Entamoeba+histolytica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Rab5-associated vacuoles play a unique role in phagocytosis of the enteric protozoan parasite Entamoeba histolytica.</a> J. Biol. Chem. 279, 49497-49507 (2004).</li>
<li>Diamond, L. S., Harlow, D. R., Cunnick, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+medium+for+the+axenic+cultivation+of+Entamoeba+histolytica+and+other+Entamoeba%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+R.+Soc.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">A new medium for the axenic cultivation of Entamoeba histolytica and other Entamoeba.</a> Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 72, 431-432 (1978).</li>
<li>Clark, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aClark%2C+C+%22Anaerobic+parasitic+protozoa+%3A+genomics+and+molecular+biology%22">Anaerobic parasitic protozoa : genomics and molecular biology</a>. , Caister Academic. Norfolk UK. (2010).</li>
<li>Linford, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+hairpin+RNA-mediated+knockdown+of+protein+expression+in+Entamoeba+histolytica%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Short hairpin RNA-mediated knockdown of protein expression in Entamoeba histolytica.</a> BMC Microbiol. 9, 38-38 (2009).</li>
<li>Solis, C. F., Guillén, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+genes+by+RNA+interference+in+the+protozoan+parasite+Entamoeba+histolytica%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Silencing genes by RNA interference in the protozoan parasite Entamoeba histolytica.</a> Methods Mol. Biol. 442, 113-128 (2008).</li>
<li>Solis, C. F., Santi-Rocca, J., Perdomo, D., Weber, C., Guillén, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+bacterially+expressed+dsRNA+to+downregulate+Entamoeba+histolytica+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Use of bacterially expressed dsRNA to downregulate Entamoeba histolytica gene expression.</a> PLoS ONE. 4, e8424-e8424 (2009).</li>
<li>MacFarlane, R. C., Singh, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+dsRNA-based+gene+silencing+in+Entamoeba+histolytica%3A+implications+for+approaches+to+genetic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Loss of dsRNA-based gene silencing in Entamoeba histolytica: implications for approaches to genetic analysis.</a> Exp. Parasitol. 119, 296-300 (2008).</li>
<li>Dhar, S. K., Vines, R. R., Bhattacharya, S., Petri, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribosomal+DNA+fragments+enhance+the+stability+of+transfected+DNA+in+Entamoeba+histolytica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Eukaryot.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ribosomal DNA fragments enhance the stability of transfected DNA in Entamoeba histolytica.</a> J. Eukaryot. Microbiol. 45, 656-660 (1998).</li>
<li>Erbs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cancer+gene+therapy+by+adenovirus-mediated+transfer+of+a+bifunctional+yeast+cytosine+deaminase%2Furacil+phosphoribosyltransferase+fusion+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo cancer gene therapy by adenovirus-mediated transfer of a bifunctional yeast cytosine deaminase/uracil phosphoribosyltransferase fusion gene.</a> Cancer Res. 60, 3813-3822 (2000).</li>
<li>Braks, J. A. M., Franke-Fayard, B., Kroeze, H., Janse, C. J., Waters, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+application+of+a+positive-negative+selectable+marker+system+for+use+in+reverse+genetics+in+Plasmodium%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Development and application of a positive-negative selectable marker system for use in reverse genetics in Plasmodium.</a> Nucleic Acids Res. 34, e39-e39 (2006).</li>
<li>Maier, A. G., Braks, J. A. M., Waters, A. P., Cowman, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+selection+using+yeast+cytosine+deaminase%2Furacil+phosphoribosyl+transferase+in+Plasmodium+falciparum+for+targeted+gene+deletion+by+double+crossover+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Negative selection using yeast cytosine deaminase/uracil phosphoribosyl transferase in Plasmodium falciparum for targeted gene deletion by double crossover recombination.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 150, 118-121 (2006).</li>
</ol>

Bu video üretimi Bu makalede kullanılan bazı reaktifler üreten Sigma Aldrich, Inc tarafından sponsor oldu.

Entamoeba moleküler biyoloji araçları önemli gelişmeler olmasına rağmen genler 4 silmek veya bozmak için hiçbir geçerli yöntemleri vardır. Gen belirli ifade demonte küçük saç tokası RNA&#39;lar RNA 6 müdahale 5, kullanımı sağlanır ve bakteriyel ifade dsRNA 7 olmuştur. Ilgili hedef genlerin etkili Ancak bu yöntemler, pahalı kimyasalların, antibiyotiklere karşı sürekli seçimi ve zaman içinde meydana gelen reversion yüksek insidansı (Alicia Linford, kişisel iletişim) 8 nedeniyle sürekli doğrulama için ihtiyaç kullanımı da dahil olmak üzere çeşitli sınırlamalar var . DNA replikasyonu 9 kökeni için sıraya gereksinimi görünüşte yok gibi herhangi bir plazmid Entamoeba çoğaltmak, böylece bir kez transfekte, genellikle plazmid tedavi etmek zordur. Bu rekombinasyon ve gen nakavt deneylerde sağlam plazmid olası kullanımını sınırlar. Negatif seçim işaretleri rekombinant alt popülasyonlar ortadan kaldırmak için kullanılabildiği gibi yöntemler hedef geninin anahtar bileşenleri. Biz başarılı bir kodon ifade Entamoeba histolytica FCU1 gen optimize edilmiş ve potansiyel olumsuz seçilebilir marker olarak test edilmiştir. Bu gen füzyon, insan tümör hücreleri intihar gen terapisi için kullanılan ve RNA ve DNA sentezi 10 inhibisyonu sonucu toksik aşağı ürünler haline prodrogu 5-FC metabolize olmuştur . FCU1 son zamanlarda, başka bir protozoon parazit Plasmodium olumsuz bir seçilebilir marker olarak kullanılır olmuştur. FCU1 ifade Plasmodium berghei hücreleri 5-FC ile in vitro ve in vivo tedavisinde prodrogu yaklaşık 1000 kat daha duyarlı olduğu tespit edildi,% 99.9 &#39;u öldürdü 11 sıtma eritrosit aşamalı bir fare modelinde rekombinant parazitlerin bulaşmasını E. FCU1 ifade histolytica hücreleri P. gözlenen hassasiyeti aksine prodrogu 5-FC, sadece 30 kat artmış duyarlılık gösterdi berghei. Bunun için olası nedenleri toksik metabolitleri ile rekabet büyüme orta nükleotidlerin büyük havuz olabilir. P. hem berghei ve P. falciparum FCU1 işaretleyici hedef gen bozulması kullanılmıştır. çalışmalar 11,12. Biz homolog rekombinasyon kullanarak Entamoeba genom işlemek için hedefliyoruz. FCU1/5-FC negatif seçim sistemi doğrulama, bu amaca yönelik önemli bir adım.

<table><tbody><tr><td>TYI-S-33 besiyeri</td><td>ATCC</td><td></td><td>Metinde referans verilmiştir</td></tr><tr><td>&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;amp;N4=F7129%7CSIGMA&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;amp;F=SPEC">5-Florositozin&lt;/a&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7129</td><td></td></tr><tr><td>Cell tracker green CMFDA</td><td>Invitrogen</td><td>C2925</td><td></td></tr><tr><td>Spectra Max M2 plaka okuyucu</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

negatif seçilebilir marker geliştirme entamoeba histolytica</em

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica amebiyazis etkeni ve dünya nüfusunun% 10 kadar bozar. Gen ekspresyonu yukarı ve aşağı düzenleme etkin moleküler teknikler stabil bir şekilde devam plazmid transfeksiyon güveniyor. Bu Entamoeba virülans faktörleri anlayışımız artış varken, kapasite eksojen DNA genomu içine ters genetik deneyler, bu parazitin çalışmada önemli bir avantaj olacaktır sağlayacak entegre etmek. Bu organizma tarafından sunulan zorluklar homolog rekombinasyon olayları ve transfekte trofozoitleri episomal plazmid DNA tedavi zorluk seçmek için yetersizlik içermektedir. Eksojen DNA, iyi niyetli bir genomik entegrasyon olay meydana geldi trofozoitleri belirlenmesi önemli bir sorun yüksek bir arka planda daha sonra sonuçlanır. Biz olumsuz bir seçim sistemi, bir maya sitozin deaminaz ve urasil prodrogu 5-florositozin (5-FC) fosforibozil transferaz Chimera (FCU1) ve seçim transgenik ifade dayalı gelişme raporu. FCU1 enzim toksik 5-fluorourasil ve 5-fluorouridin-5&#39;-monofosfat E. toksik olmayan, 5-FC dönüştürür FCU1 ifade histolytica hatları 30 kat prodrogu kontrol suşu göre daha duyarlı olduğu tespit edildi.

Biz olumsuz bir seçim sisteminin gelişme raporu<em&gt; E. histolytica</em&gt; Transgenik kimerik protein ekspresyonu (FCU1) ve prodrogu 5-florositozin seçimi dayalı. FCU1 protein, maya sitozin deaminaz ve phosphoribosyltransferase urasil bir füzyon. FCU1, İfade sonuçlandı<em&gt; E. histolytica</em&gt; 5-florositozin karşı duyarlılık.

Negatif Seçilebilir Marker Geliştirme Entamoeba histolytica</em

Entamoeba histolytica, amebiyazisin etken maddesidir ve dünya nüfusunun %10'una kadarını enfekte eder. ...'yı mümkün kılan moleküler teknikler...

Bu deneyin genel amacı, beş FC FCU1 sisteminin Enteramoeba histolytica'da bir negatif seleksiyon yöntemi olarak kullanımını doğrulamaktır. 48 kuyucuklu plakalara E. histolytica ekilir; ya FCU1 genini ya da uygun vektör kontrolünü eksprese eden hatlar transfekte edilir. Hücreler pro-ilaç beş FC ile tedavi edilir. Yüksek seviyelerde FCU1 eksprese eden hücrelerde beş FC, toksik uç ürünlerin etkili miktarlarına dönüştürülecektir. Sağ kalan hücre popülasyonu, beş FC varlığında FCU1 eksprese eden hücrelerin seçici olarak eliminasyonunu göstermek ve negatif seleksiyonun verimliliğini nicel olarak karşılaştırmak için C-M-F-D-A ile boyanır. Bu negatif seleksiyon sistemi, transfekte edilmiş E. histolytica'dan episomal plazmidleri ilk kez temizlememize olanak sağlayacaktır.Konvansiyonel genetik manipülasyona karşı var olan zorluk göz önüne alındığında, bu yöntem genleri bozmamıza ve silmemize, ardından ilaç keşif programımızdaki hedef VIR faktörlerini test etmemize olanak sağlayabilir. Trofozoitlerin stok kültürlerinin kültürde ne kadar iyi geliştiği değişkenlik gösterebilir. Başlangıçtaki bir hata artefaktlara yol açabilir, bu nedenle başlangıç kültürünün kalite kontrolü kritik bir erken adımdır.İncelenen inba hisa hatlarını stok tüplerinden T 25 flasklara ekleyin ve TYIS 33 besiyerine uygun antibiyotik ekleyerek seçilimi sürdürün. Kültürlerin yaklaşık %80 konfluense ulaşması için flaskları 37 °C'de 16 saat inkübe edin. Bu prosedür için, her zaman sıcak TYIS 33 içinde taze 50 mM beş florür veya FC stoğu hazırlayın.Beş FC'yi tamamen çözmek için ortamı birkaç dakika boyunca kuvvetlice vorteksleyin ve ardından stok çözeltiyi 0,22 mikronluk bir filtreden geçirerek sterilize edin ve trofozoitleri hasat edin. Erlenmayerleri üç ila beş dakika boyunca buz üzerinde bekletin ve hücreleri oda sıcaklığında 200 ×g'de beş dakika santrifüjleyerek toplayın. Peleti taze TYI ortamında yeniden süspande edin ve sonraki floresan ölçümlerini kolaylaştırmak için hücreleri sayın.Deneyleri üç tekrar şeklinde gerçekleştirin ve her zaman noktası için her suş adına ayrı bir 48 kuyucuklu plaka kullanın; her test için kuyucuk başına 0,5 ml hacimde 0,5 × 10⁴ hücre ekleyin. Beş FC konsantrasyonu kullanın ve TYI besiyerindeki antibiyotik seleksiyon baskısını sürdürün. Şimdi her kuyucuğa gerekli miktarda beş FC stok çözeltisini, ardından toplam hacim bir ml olacak şekilde TYI besiyerini ekleyin ve plakaları 37 °C'de, anaerobik bir torba içerisinde inkübe edin.DMSO içerisinde 2 mg/mL konsantrasyonunda bir CellTracker Green CMFDA stok çözeltisi hazırlayın. Daha sonra çalışma çözeltisini hazırlamak için, stok çözeltiyi belirlenen deneysel zaman noktalarında serumsuz TYI besiyerinde 1000 kat seyreltin. Tropho Xite kültür plaklarındaki besiyerini tamamen uzaklaştırın ve yerine CMFDA içeren 150 µL serumsuz TYI ekleyin.İnkübasyona 37 °C'de bir saat daha devam edin ve kuyucuklardaki DI çözeltisini aspire edin. Son olarak, 492 nm eksitasyon dalga boyu ve 517 nm floresan emisyonu kullanarak plakayı SpectraMax M2 mikroplaka spektro-fluorimetre ile okuyun. Kontrol hücreleri ile test transfektlerinin floresans değerlerini karşılaştırın.Plakları her zaman aralıkla okumaya devam edin. Her plakta daima uygun pozitif ve negatif kontrol kuyucukları kullanın. Western BLO analizleri, FCU one, maya sitozin deaminaz ve urasil fosforiboziltransferaz kimerasını eksprese eden lya transfektlerinin başarılı bir şekilde oluşturulduğunu göstermektedir.Bu sonuçlar kantitatif PCR ölçümlerine de yansımıştır. Beş florun varlığında kontrol hücreleri 5 millimolar konsantrasyona kadar normal şekilde büyür ve 72 ile 96 saat arasında konfluense ulaşır. Buna karşılık, FCU one eksprese eden E. histolytica hücreleri, brightfield mikroskobu altında, ön ilacın 0.5 millimolar varlığında seçici olarak elimine edilir.E histolytica hücrelerinin eksprese ettiği FCU'nun beş FC Pro ilacına verdiği seçici yanıt, hücrelerin temizlenmesiyle görülür. Bu durumda, transfeksiyondan 72 saat sonra kültürleme yapılır. Bu deney gerçekleştirilirken, her zaman noktasında büyümenin izlenmesinin önemli olduğunu unutmamak gerekir.Bu yöntem, Inba Hisa'nın virülansına ilişkin önemli soruları yanıtlamak için kullanacağımız "hit and run" mutajenezinde kullanılabilir.

development-of-a-negative-selectable-marker-for-entamoeba-histolytica

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Üretimi C. elegans Recombineering yoluyla transgenlerin GalK Seçilebilir Marker

Bu protokol hazırlanması için sentetik bir tRNA substrat...

Entamoeba histolytica DNA ve tRNA Metiltransferaz Dnmt2 (Ehmeth) Enzim ile in vitro tRNA Metilasyon Testi

Burada, belirli bir hedef dizisi için, rastgele bir mutant kütüphane oluşturmak için basit bir protokol göstermektedir. Escherichia coli, in vivo olarak yapılan bu yöntem, yeni enzimatik faaliyetleri gelişmeye fonksiyonel seçimleri ile birleştiğinde nasıl kullanılabileceğini göstermek.

Proteinlerin Yönetmen Evolution Mutagenez ve Fonksiyonel Seçim Protokolleri E. coli</em

Seçimi Plasmodium falciparum İnsan Beyninin endotel hücreleri Cytoadhesion için Parazitler

İleri genetik, moleküler düzeyde nasıl aydınlatmak için güçlü bir...

Isolate A Genetik Ekran Toxoplasma gondii Host-hücre çıkış Mutants

Entamoeba histolytica insan enfeksiyon amebiazisli, tropikal ülkelerde ishal önemli bir nedeni yol açar. Enfeksiyon, hücre-hücre kontaktların açılmasına ve dolayısıyla ishal, bazen karaciğer enfeksiyonu tarafından takip edilen tahrik, intestinal epitel hücreleri ile patojenik etkileşimleri ile başlatılır. Bu makale Amebiazis patogenezinde anlayışımızı geliştirmek için erken konak-patojen değerlendirmek için bir model sunar.

Yapımcı Epitel Hasar Analizi<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Enfeksiyon

Burada tanımlanan floksed kaset allelic değişim mutagenezi, FLAEM kullanarak Chlamydia trachomatis hedefli, markerless gen delemesi için bir yöntemdir.

Klamidya trachomatis Floxed Kaset Allelic Exchange Mutagene tarafından Markerless Gen Deletion

Burada, pLEXSY sistemini kullanarak eGFP genini stabil bir entegre transgen olarak eksprese eden L. panamensis ve L . donovani suşlarını oluşturmak için kullanılan metodolojiyi açıklıyoruz. Transfekte edilen parazitler, seyreltme sınırlandırılarak klonlandı ve her iki türde de en yüksek floresan yoğunluğuna sahip klonlar, ilaç tarama testlerinde daha fazla kullanılmak üzere seçildi.

eGFP'nin Yapısal Ekspresyonu ile Leishmania Tür Suşlarının Gelişimi

Hazır malzemeler kullanarak, bu biocontained kompostlama sistemi, bulaşıcı hastalık salgını durumunda ortaya çıkan büyük hayvan leşleri yerinde imha etkili sağlar. Bu prosedür, karkas ve dışkılarıyla en enfeksiyöz ajanlar öldürür. Enfeksiyöz ajan teyit cansız, olgun kompost gübre olarak yayılır.

Hayvancılık Bulaşıcı Hastalık Salgın Kontrol Biocontained Karkas Kompostlama

Biz T hücre gelişimini incelemek üzere bir akım sitometri tabanlı bir yöntem...

Akım Sitometri tarafından Timik Pozitif ve Negatif Seçim incelenmesi

Keşfedin Entamoeba histolytica'da negatif seçim yöntemi olarak FCU1 sistemi kullanımını. 5-fluorocytosine ile transfekte hücrelerin seçici eliminasyonu genetik manipülasyon ve virülans faktörleri testinde uygulanır.

Negatif Seçilebilir Marker Geliştirme Entamoeba histolytica

Daha fazla video keşfet