Dişi Fare Modelinde Meme Tümörü İlerlemesinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Lusiferaz eksprese eden meme tümörü hücreleri enjekte edilen dişi bir fare ile başlayın.

Tümör hücreleri enjeksiyon bölgesinde çoğalır ve birincil tümöre dönüşür.

Fareyi uyuşturmak için fareyi anestezik akışlı bir görüntüleme odasına yerleştirin.

Daha sonra, anestezi uygulanmış fareye lusiferaz için bir substrat olan lusiferin enjekte edin.

Luciferin, biyolüminesans yaymak için lusiferaz ile reaksiyona girerek tümör hücrelerini dolaştırır ve girer.

Görüntüleme sistemini kullanarak fareden biyolüminesans sinyalini yakalayın.

Zamanla, tümör birincil bölgede ilerler ve akciğerlere metastaz yapar.

Fare görüntüsünü düzenli aralıklarla alın ve ilgilendiğiniz bölgeleri tanımlayın.

Biyolüminesans yoğunluklarına dayanarak, her iki bölge için de tümör büyüme kinetiği oluşturun.

Zamanla, primer tümör bölgesindeki sinyalde sabit bir artış, sürekli tümör proliferasyonunu gösterir.

Bununla birlikte, daha sonraki zaman noktalarında akciğer biyolüminesansında keskin bir artış, tümör hücresi metastazını düşündürür.

Başlamak için, takviye edilmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı veya DMEM'de 4T1 hücre hattını koruyun. Hücreleri yüzde 5 karbondioksit içeren nemli bir atmosferde 37 santigrat derecede inkübe edin.

Yapısal olarak üretilen bir biyolüminesan enzim olan lusiferazı eksprese etmek için 4T1 hücre hattını Luc2 geni ile transfekte edin. Fare enjeksiyonuna hazır tutmak için hücreleri inkübe edin.

Bir Balb-C dişi fareyi uyuşturduktan ve hazırladıktan beş dakika sonra, 1 mililitrelik bir insülin şırıngası kullanarak sol sırta deri altından beş lusiferaz eksprese eden 4T1 hücresine 2 kez 10 kez enjekte edin. Enjeksiyondan sonra hayvanı 4 hafta boyunca barındırın.

Görüntüleme için, anestezi uygulanmış fareyi biyolüminesans görüntüleme ekipmanının belirlenen alanı içinde dorsal yatar pozisyona yerleştirin. Fareye mililitre başına 15 miligram konsantrasyonda 100 mikrolitre D-lusiferin çözeltisi ile intraperitoneal olarak enjekte edin.

Görüntüleme parametrelerini ayarlamak için, emisyon filtresini uyarılmadan açık, gruplamayı 8'e, F-Stop'u 2'ye ve görüş alanı türünü D'ye ayarlayın. Her görüntüleme uç noktasında her hayvan için 20 dakika boyunca 20 biyolüminesans görüntü yakalayın ve görüntülerin 60 saniyelik bir sinyal entegrasyonunu temsil ettiğinden emin olun.

Ekipmanın yazılımını kullanarak, birincil tümör ve akciğer metastazı sinyallerini ayırt etmek için belirli ilgi alanlarını tanımlayın. Enjeksiyon bölgesinde ve metastazın meydana geldiği torasik bölgede biyolüminesans sinyalleri tanımlayın. Biyolüminesans sinyal yoğunluklarına dayalı olarak tümör ilerlemesini hesaplayın.

Haftalık olarak toplanan görüntüleri kullanarak, hem birincil tümör hem de metastatik bölgelerde zaman içindeki sinyal yoğunluğu değişikliklerini temsil etmek için bir büyüme kinetik profili oluşturun. Tümör ilerlemesini ve metastazını analiz etmek için sinyal yoğunluğu eğilimlerini karşılaştırın.