Fare bağırsak bakterilerinin fare bağırsak kesitlerinde yerinde floresans hibridizasyonu

0 görüntüleme3:42 dk • January 30th, 2026

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bakteriyel 16S rRNA'ya özgü Floresans in situ hibridizasyon (FISH) sondalarını içeren bir çözelti ekleyerek başlayın; bakteriler tarafından kolonileştirilmiş fare bağırsak kesimlerini içeren bir slayta ekleyin.

Sıvı içeren probları yaymak ve buharlaşmayı önlemek için bir kapak kuşağı yerleştirin.

Kaydırı, nemlendirilmiş bir odada yüksek sıcaklıkta kuluçka yapın.

Bu, RNA ikincil yapısını açığa çıkarır ve probun bakteriyel 16S rRNA'daki tamamlayıcı dizilerle hibritleşmesini kolaylaştırır.

Kapak kapağını çıkarın ve kaydırmayı önceden ısıtılmış bir yıkama tamponunda kuluçkaya geçirerek açılan probları çıkarın.

Fizyolojik pH'ı korumak için fosfat tamponu ile durulayın.

Mukusa özgü bir boya ve nükleer boya içeren bir karşı boyama uygulayın ve kuluçka yapın.

Bu boyalar, bağırsak mukusuna ve bakteriyel ve konak hücrelerin DNA'sına seçici olarak bağlanır. Sürgü tamponu ile yıkayın ve kaplama kaşlarını montaj ortamı kullanarak sürgüye monte edin.

Konfokal mikroskop altında, bölümler içindeki FISH etiketli bakterileri, bağırsak hücrelerini ve mukus tabakasını gözlemleyin.

Hibritizasyon çözeltisiyle kaplanması gereken genişleme alanını sınırlamak için her doku kesitinin etrafında çok yakın daireler oluşturun; böylece mürekkep kesitle temas etmenizi önleyin.

Hibritizasyon çözeltisini hazırlayın ve kullanılan her 50 mikrolitre çözeltiye karşı 0,5 mikrogram prob ekleyin. Çözeltiyi slayttaki bölümlere pipetleyin. Bölümü esnek plastik kapak örtüleriyle örtün, böylece kullanılan sıvı hacmi tüm bölümü kaplasın.

Nem sağlamak için fazla hibritizasyon çözeltisi veya PBS ile ıslatılmış mendiller veya kağıt havlularla nemli bir kutu oluşturun. Buharlaşmayı azaltmak için prob ayarlanmasına bağlı olarak en az üç saat boyunca slaytı nemli odada 45 ila 50 derece Celsius sıcaklıkta kuluçka edin. Plastik kapak kapaklarını çıkarın ve slaytları FISH yıkama tamponunda, her ikisi de 50 derece Celsius'a kadar ısıtılmış bir Coplin kavanozunda kuluçkaya geçirin.

Coplin kavanozunu tekrar 50 derece Celsius fırına 10-20 dakika koyun. FISH yıkama tamponunu çıkarın ve yerine Coplin kavanozunda PBS ile değiştirin. Coplin kavanozunu PBS ile doldurduktan hemen sonra PBS'yi boşaltın.

Kavanozdaki slaytları çıkarın ve karşı boyayı tüm bölümün üstüne pipetleyin, pipet ucu ile dokuya dokunmamaya dikkat edin. 4 derece Celsius'ta 45 dakika kuluçka yapın. Lekeleri taze PBS ile üç kez hızlıca yıkayın.

Slaytların arkasını bir mendil veya kağıt havlusuna silin ve PBS'nin çoğunun buharlaşmasına izin verin; bu hatt, pipet ucuna bağlı bir vakum hattıyla desteklenir. Bölümleri bir montaj ortamı ile monte edin. Coverslip'leri slayta yapıştırın; coverslip'in kenarlarını şeffaf oje ile boyayarak slaytın kenarından uzak durmaya özen gösterin. Oda sıcaklığında donmasına izin verin.

06:26

Serbest dalgalanma fare değişir Cryosections hücrelerde bağırsak tutam görselleştirmek için Anti-fosfo-girdin antikor kullanımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:08

Situ Hibridizasyonfloresan Kullanarak Murine Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:25

Bağırsak İsviçre ruloları ve parafine gömülü dokunun immünofloresan boyaması için optimize edilmiş protokol

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:06

Murin bağırsak iltihabını değerlendirmek için floresan aracılı tomografi kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:51

IMMUNO florasan mikrotübüller ve Ex Vivo bağırsak dokusu ve 3D Vitro bağırsak Organoids Centrosomal proteinler etiketleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:30

Kene bağırsaklar tarafından bütün-mount Situ hibridizasyon Microbiota görselleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:50

Situ Hibridizasyonda 16S rRNA Floresan ile Mesane Biyopsilerinde Doku Dağı Bakterilerin In Salgılanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:31

Floresan In Situ Hibridizasyon, Lectin Boyama ve Görüntüleme Yoluyla Gut Mikrobiyota-konak Etkileşimlerinin Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:27

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Caenorhabditis elegans Bağırsaklarında Mikrobiyal Kolonizasyon ve Enfeksiyonu Görselleştirmek için RNA Floresan in situ Hibridizasyon (FISH)

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026