JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:42 dk. • January 30th, 2026
Bakteriyel 16S rRNA'ya özgü Floresans in situ hibridizasyon (FISH) sondalarını içeren bir çözelti ekleyerek başlayın; bakteriler tarafından kolonileştirilmiş fare bağırsak kesimlerini içeren bir slayta ekleyin.
Sıvı içeren probları yaymak ve buharlaşmayı önlemek için bir kapak kuşağı yerleştirin.
Kaydırı, nemlendirilmiş bir odada yüksek sıcaklıkta kuluçka yapın.
Bu, RNA ikincil yapısını açığa çıkarır ve probun bakteriyel 16S rRNA'daki tamamlayıcı dizilerle hibritleşmesini kolaylaştırır.
Kapak kapağını çıkarın ve kaydırmayı önceden ısıtılmış bir yıkama tamponunda kuluçkaya geçirerek açılan probları çıkarın.
Fizyolojik pH'ı korumak için fosfat tamponu ile durulayın.
Mukusa özgü bir boya ve nükleer boya içeren bir karşı boyama uygulayın ve kuluçka yapın.
Bu boyalar, bağırsak mukusuna ve bakteriyel ve konak hücrelerin DNA'sına seçici olarak bağlanır. Sürgü tamponu ile yıkayın ve kaplama kaşlarını montaj ortamı kullanarak sürgüye monte edin.
Konfokal mikroskop altında, bölümler içindeki FISH etiketli bakterileri, bağırsak hücrelerini ve mukus tabakasını gözlemleyin.
Hibritizasyon çözeltisiyle kaplanması gereken genişleme alanını sınırlamak için her doku kesitinin etrafında çok yakın daireler olu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin